Материалы к характеристике полимерной фракции столбнячного анатоксина

• Автор: Карсанова, Ирина Батырбековна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 90 с.

Оглавление
Введение
Глава I. Особенности эпидемиологии и профилактики столбняка при плановой вакцинации населения формольным дериватом столбнячного токсина СТ и современные подходы к изготовлению очищенного столбнячного анатоксина СА. Обзор литературы.

I. Особенности эпидемиологии столбняка.

И. Особенности профилактики столбняка.

III. СТ, его характеристика и структура.

IV. Получение СА.

V. Методы очистки СА. V1. Использование хроматографических методов для очистки

СТ, СА и изучения их фракционного состава.

V2. Метод мембранной диафильтрации для очистки СА.

VI. Полимерные микросферы биомедицинского назначения.

VII. Применение полимерных микросфер в биоанализе.
Глава . Материалы и методы исследования.
I. Материалы.
1.1. СТ
1.2. Очищенный СА.
. Лабораторные животные.
1.4. Стандартная яспиадиная противостолбнячная сыворотка.
1.5. Сыворотка противостолбнячная лошадиная очищенная концентрированная жидкая .
1.6. Человеческий и бычий сывороточные альбумины ЧСА и КС А.
1.7. Эритроцитарный антигенный столбнячный диагностикум ЭАСД.
1.8. Полимерные микросферы латексы.
1.9. Фосфатносолевые буферные растворы ФСБ.
1 ФСБ. содержащий ЧСА.
1 Раствор формальдегида.
1 Хроматографические носители и гелеобразователи.
1 Оборудование.
II. Методы.
II. 1. Культивирование .i.
II.2. Диафильтрация.
П.З. Спектрофотометрия.
.4. Хроматография.
.5. Определение белка и общего белкового азота.
.6. Иммунохимическая характеристика препаратов.
.7. Определение удельной антигенной активности препаратов.
.8. Получение латексых антигенных столбнячных диагностикумов.
.9. Постановка реакции пассивной агглютинации латекса РИЛА.
Постановка реакции торможения пассивной агглютинации латекса РТПЛА.
Постановка реакции пассивной гемагглютинации РИГА с ЭАСД.
Биологическое тестировашс токсина. 4
Статистические методы обработки результатов экспериментов.
Глава III. Результаты исследований и их обсуждение
1.1. Очистка С А методом ступенчатой мембранной диафильтрации.
Ш.2. Разделение образов С А методом эксклюзионной хроматографии.
Ш.З. Изучение сенситивных и иммунохимических свойств рехроматограф ированньиг образцов из серий СА, доочищенных методом диафильтраци.
Заключение
Выводы
Список литературы


В период формольной детоксикации возможно закручивание молекулы СТ за счет формирования шифовых мостиков, в результате чего инактивируется токсофорный центр, а обработанный формалином белок переходит в анаформу и становится столбнячным анатоксином СА. При этом сохраняется конформация рецепторсвязывающего фрагмента молекулы СТ и после обезвреживания она проявляет такую же иммунохнмическую активность, как и в составе исходной белковой молекулы. Помимо конформационной перестройки детоксикация может сопровождаться частичной сополимеризацией СТ с другими белковыми комплексами токсин содержащего фильтрата. В некоторых странах Европы, в том числе и в России, резкое снижение случаев болезни началось после введение в практику здравоохранения плановой иммунизации населения против столбняка. Так но данным В. России за период с по годы 1. Массовая иммунизация против столбняка поставила на повестку дня вопрос о чистоте прививочного препарата. Производимые в РФ СА должны соответствовать требованию ВОЗ и содержать не менее ЕСмг белковою азота. Действующие же производственные регламе1ггы не всегда позволяю СА, удовлетворяющий этим требованиям. Образцы выпускаемой в настоящее время продукции могут существенно различаться по нммуногенным свойствам и степени очистки. При изучении их фракционного состава было показано, что они неоднородны, было также подтверждено наличие в них высокомолекулярных компонентов , которые по данным Ермолаева А. В. с соавторами , и Бинима Са1у 8 могут проявлять защитную способность. В частности, этими исследователями было показано, что приготовленный из полимерной фракции, выделенной методом ступенчатой мембранной днафильтрафии, прививочный препарат не уступал но удельной протективион способности обычным фармакопейным образцам. Тема настоящей диссертационной работы Материалы к характеристике полимерной фракции столбнячного анатоксина является продолжением выше указанных работ. Связано это с тем, что в процессе производства СА в период с по годы отечественные производители столкнулись с рядом трудностей, одна, из которых заключалась в отсутствии на фармацевтическом рынке РФ отечественных образцов казеина, с маркой для микробиологических целей, а гидролизат последнего, как известно, является основной составляющей при изготовлении жидких питательных сред, на которых ведется культивирование столбнячной палочки. Прежние внутри государственные связи с поставщиками изза распада СССР оказались разрушенными, а попытки использовать казеин с маркой технический или пищевой не привели к желаемым результатам. Суздаль Владимирской области, Фурманов Ивановской области и Милославский Рязанской области. Свою производственную программу предприятию при этом удалось выполнить, но производство шло неритмично и у производителя скопилось весьма существенное количество материала, удельная специфическая активность которого нагрузка ЕС на 1 мг белкового азота не соответствовала требованиям ВОЗ. Эта серии мы попытались доочистить методами мембранной диафилырации и тем самым улучшить техникоэкономические показатели производства. В процессе работы выяснилось, что образцы СА полученные на средах, основу которых составили гидролизаты казеина разных производителей, вели себя при диафильтрации поразному изза различного соотношения в них полимерных и олигомерных компонентов. В связи с обнаружением этого феномена целью работы стала адаптация различных вариантов использования ступенчатой мембранной диафильтрации для доочистки серий СА, при изготовлении которых на этапе культивирования С1. СА и испытать их пригодность для создания тестсистем, обеспечивающих контроль за ходом токсинообразования С1. ПЛаш. Предложить варианты ступенчатой мембранной диафильтрации, обеспечивающие очистку серий СА, произведенных при использовании гидролизатов казеина от отечественных производителей но имеющих показатели удельной специфической активности нагрузку ЕСмг белкового азота не соответствующие требованиям ВОЗ менее ЕСмг белкового азота. Исследовать фракционный состав доочишенных препаратов СА методом эксклюзивной жидкостной хромагофафии.