Разработка и применение молекулярно-генетических методов для идентификации микобактерий - возбудителей заболеваний человека

• Автор: Вишневская, Елена Борисовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 161 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Род микобактерий.

1.2. Молекулярногенетические методы исследования микобактерий.

1.3. Идентификация вакцинного штамма .vi

1.4. формы микобактерий.

1.5. Плазмиды микобактерий

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Исследование форм микобактерий.

2.2. Выделение ДНК из образцов патологического

материала для полимеразной цепной реакции
2.3. Полимеразная цепная реакция
2.4. Лигазная цепная реакция
2.5. Методы выделения плазмид нетуберкулезных микобактерий.
ГЛАВА 3. ПРИМЕНЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКОБАКТЕРИЙ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБРАЗ 1АХ.
3.1.Разработка схемы выявления микобактерий в клинических образцах методом ПЦР.
3.2. Идентификация М. vi в клинических образцах методом ПЦР
3.3. Эффективность применения амплификационных методов для выявления М. i
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ФОРМ М.i С ПРИМЕНЕНИЕМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
4.1. Верификация принадлежности форм к .i x
4.2. Видовая идентификация форм, принадлежащих к .i x, и их генетические особенности.
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ПЛАЗМИДНОГО ПРОФИЛЯ МИКОБАКТЕРИЙ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ МИКОБАКТЕРИОЗОВ У ЖИТЕЛЕЙ СЕВ ЕРО3 ААДНОГО РЕГИОНА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.
ЛИТЕРАТУРА


Минздрав России Методические рекомендации Повышение эффективности этиологической диагностики внелегочного туберкулеза. Основные положения диссертации, выносимые на защиту. Эффективность применения полимеразной цепной реакции для выявления М. ДНК из различных типов проб, превосходит эффективность стандартных бактериологических методов микроскопии и посева в 2 раз. Предложенная схема применения молекулярногенетических тестов позволяет проводить ускоренную идентификацию и исследование биологических свойств микобактерий различных видов. М. i и к М. , при этом ДНК культур форм не всегда содержит инсерционный элемент 1 . СевероЗападном регионе РФ, содержат плазмиды . . ,5 и . Наличие плазмид взаимосвязано с биологической активностью микобактерий. Апробация работы. СПб, , международной конференции Генодиагностика в современной медицине Москва, , региональной научнопрактической конференции Роль хирургических методов в лечении внелегочного туберкулеза СПб, . ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Рол микобактерий. Туберкулез занимает одно из первых мест по летальности среди инфекционных заболеваний нашего времени , . Возбудитель туберкулеза i i относится к роду i. На сегодняшний день известно около видов микобактерий, принадлежащих к этому роду 4. Все они могут быть разделены на две основные группы в соответствии со скоростью роста. К медленнорастущим относят виды, рост которых на плотных средах занимает 7 и более дней до образования видимых колоний, к быстрорастущим виды, формирование колоний которых на плотных средах проходит менее, чем за 7 дней. Медленнорастущие виды часто являются патогенными для человека и животных, в то время как быстрорастущие, за некоторыми исключениями, чаще всего относятся к сапрофитам Оттен Т. Ф., , ii , 1. Микобактерии аэробные, медленнорастущие, неспорообразующие, неподвижные бактерии, имеющие вид слегка изогнутых или прямых палочек. Изза высокого содержания липидов, восков, гликолипидов и полисахаридов в клеточной стенке, микобактерии не очень хорошо окрашиваются по Граму, но считаются грамположительными . При окрашивании основным фуксином или флюорохромами микобактерии устойчивы к обесцвечиванию кислым спиртом, в связи с чем получили название кислотоустойчивых. Время генерации микобактериальных клеток варьирует в зависимости от вида от 2 часов так называемые быстрорастущие микобактерии до часов эти виды относят к медленнорастущим. Оптимальная температура роста лежит в пределах от С до С. Морфология колоний гладкие или шероховатые также зависит от вида. Встречаются как фотохромогенные, так и скотохромогенные формы Отген Т. Ф., , ii, 4. i , возбудитель проказы, не культивируется i vi. Род микобактерий включает облигатных паразитов, сапрофитов и условно патогенные виды. Большинство видов размножаются в почве и воде , 8, другие М. М. находят преимущественно в организме человека и животных. Основными клинически значимыми видами микобактерий являются микобактерии, принадлежащие к М. К членам туберкулезного комплекса относятся близкородственные М. М.vi включая аттенуированный вакцинный штамм М. , . .ii. М.i x кислотоустойчивые, медленнорастущие, нехромогенные микобактерии, отличающиеся позитивным ниациновым и нитратредуктазным тестами. Микобактерии туберкулеза имеют форму палочек, прямых или слегка изогнутых, размер которых составляет 0,2 0,6 на 1 4 мкм. М.i часто растет в виде кос или шнуров, в которых бактерии имеют параллельное расположение , 8. На большинстве плотных сред образует выпуклые шероховатые морщинистые колонии неправильной формы, чаще всего кремовою цвета. Существует мнение, что морфология колоний М. Время генерации М. Оптимальная температура роста С, однако незначительный рост наблюдается и при более низкой температуре от С до С. Инкубация в атмосфере, содержащей 5 С стимулирует рост микобактерий туберкулеза.