Разработка иммуноферментного метода на основе антигенных компонентов слизи Pseudomonas aeruginosa для диагностики синегнойной инфекции

• Автор: Дубейковская, Зинаида Андреевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 172 c. : ил

ВВЕДЕНИЕ I

Часть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. АНТИГЕННАЯ СТРУКТУРА ШТАММОВ СИНЕГНОЙНОЙ

ПАЛОЧКИ .

1.1. Антигены клетки синегнойной палочки . .

1.2. Внеклеточные продукты синегнойной палочки, обладающие антигенными свойствами .

1.2.1. Экзотоксин А

1.2.2. Внеклеточная слизь

Глава 2. ГУМОРАЛЬНЫЙ ИММУННЫЙ ОТВЕТ, ФОРМИРУЩИЙ

СЯ ПРИ СИНЕГНОЙНОЙ ИНФЕКЦИИ.

Глава 3. ИМУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ И ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Часть II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Глава 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
4.1. Тестштаммы синегнойной палочки
4.2. Серотипирование клинических штаммов синегнойной палочки
4.3. Объемная реакция бактериальной агглютинации
4.4. Бактериологическая диагностика острых и хронических нагноительных заболеваний легких.
4.5. Питательная среда и метод культивирования штаммов синегнойной палочки .
4.6. Получение частично очищенных препаратов
слизи синегнойной палочки
4.7. Выделение очищенных антигенных компонентов слизи
4.8. Получение иммунных кроличьих сывороток к частично очищенным препаратам слизи синегнойной палочки . .
4.9. Адсорбция антислизевой сыворотки группоспецифическим антигеном
4 Адсорбция кроличьих антислизевых сывороток бактериальными клетками синегнойной палочки
4 Постановка реакции преципитации и проведение имглуно электрофорез а.
4 Исследуемые сыворотки людей
4 Приготовление конъюгатов пероксидазы с антителами против иммуноглобулинов кролика и человека
. Очистка пероксидазы хрена .
. Получение чистых антител к
н ь кролика
. Связывание антител с ферментом. . .
4 Методика выполнения иммуноферментного анализа
4 Методы химического анализа.
4 Статистическая обработка полученных результатов . 5
Глава 5. СЕРОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННЫХ КОМПОНЕНТОВ
СЛИЗИ СИНЕГНОЙНОМ ПАЛОЧКИ.
5.1. Агглютинация штаммов синегнойной палочки антислизевыми сыворотками . .
5.2. Использование иммунодиффузионных методов для изучения антигенных компонентов слизи синегнойной палочки .
Глава 6. ВЫБОР ОПТИМАЛЬНЫХ ПАРАМЕТРОВ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ ИМШОФЕРМЕНТНОГО МЕТОДА НА ОСНОВЕ КОМПОНЕНТОВ СЛИЗИ С ЦЕЛЮ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКИ.ЮЗ
6.1. Выбор оптимальной концентрации препарата слизи и условии его сорбции на твердофазном носителеЮЕ
6.2. Подбор времени инкубации антисыворотки, полученной к антигену слизи, с гомологичным антигеном и антислизевой сыворотки с конъюгатом антиЗЦ кроликаЮО
6.3. Подбор оптимального разведения конъюгата антипц кролика меченого пероксцдазой
хрена. ЮО
Глава 7. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИТЕЛ К Р.АЕтшоЗА В СЫВОРОТКАХ ЖИВОТНЫХ С СИНЕГНОЙНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ
Глава 8. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО МЕТОДА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К СЛИЗИ СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКИ У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМИ И ХРОНИЧЕСКИ, ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЛЕГКИХ.
Глава 9. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ1.С
ВЫВОДЫ
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ГЛП гликолипопротеин
ИФА иммуноферментный анализ
КДО 2кетоЗдезоксиоктоновая кислота
ЖС липополисахарид
МПА мясопептонный агар
МПБ мясопептонный бульон
НАН никотинамидадениндинуклеотид
ОД2 оптическая плотность при 2 нм
РНК рибонуклеиновая кислота
ОФ спектрофотометр
ФБР фосфатный буферный раствор
ЦПХ. н цетижиридинийхлорид
ЖСА желточносолевой агар
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 штаммы синегнойной палочки из
коллекции i
ОЕР ii xi i
I i i i ii i
ВВЕДЕНИЕ


Для выполнения иммунологических и эпидемиологических исследований, а также для изучения систематики микроорганизмов и выяснения других вопросов микробиологического профиля необходи
мо знать серологические свойства микроорганизмов. Знание антигенной структуры особенно важно при разработке серологических тестов лабораторной диагностики инфекций, вызванных теш или другими возбудителями. Синегнойная палочка имеет сложную антигенную структуру. В клеточной стенке этого микроорганизма локализован эндотоксин, обладающий Оантигенной активностью. Белковый компонент эндотоксина по данным . У Р. Синегнойная палочка продицирует ряд внеклеточных продуктов,. А, протеазу, эластазу, внеклеточную слизь. Указанные антигены, очевидно, играют определенную роль в стимуляции иммунного ответа при заболеваниях, вызываемых синегнойной палочкой. Этим, повида. Остановимся на рассмотрении антигенов синегнойной палочки, серологические свойства которых наиболее изучены в настоящее время. I.I. Липополисахарид, таким образом, является структурным компонентом Осоматического антигена и обусловливает его Огрупповую специфичность . Липополисахарид грамотрицательных бактерий обычно построен по схеме липид Абазальная структураОспецифические боковые цепи. Липополисахарид синегнойной палочки сходен по структуре и свойствам с липополисахаридами других грамотрицательных микроорганизмов, однако имеет ряд характерных особенностей. Известно, что в состав липида А синегнойной палочки входит додекановая, 2гидроксидекановая и 3гидроксидекановая кислоты ii, , . Базальная область липополисахарида, представляющая собой его полисахаридную часть, структурно подразделяется на внешнюю часть ядра и внутреннюю область. В ядерной части полисахаридной области липополисахарида синегнойной палочки обнаружены 3даоксиманнооктолузоновая кислота прежнее название 2кетоЗдезоксиоктоновая кислота или ВДО, глюкоза, рамноза, галактозамин, ортофосфаты, пирофосфат, этаноламин, а из гептоз ьаминоДманнозогептоза. Установлено, что в них не содержатся такие сахара как галактоза и манноза i , , vi , i . Химический состав липополисахарида синегнойной палочки изучен довольно полно, однако его структура до конца не установлена. Было проведено хемотипирование типовых штаммов синегнойной палочки, основанное на качественном различии в составе углеводов липополисахарида. К одному и тому не хемотипу были отнесены штаммы синегнойной палочки нескольких 0серотипов. Так, например, штаммы серотипов Зав, 3 , 3 с, 3 схемы i принадлежат к хемотипу У . УШ , . Повидимому, 0антигены разных серологических специфичностей могут иметь идентичный химический состав и вследствие этого данные химического состава не могут быть положены в основу хемотипирования штаммов синегнойной палочки. Для этого необходимо иметь представление о структуре боковых цепей липополисахарида, обеспечивающих специфичность 0антигена. Б настоящее время структура Оспецифических полисахаридных цепей липополисахарида находится в стадии интенсивного изучения В. А.iiv . В г. Международном комитете по систематике бактерий и Международная ассоциация микробиологических обществ утвердили набор стандартных антигенных штаммов ii ii i , который включает серотипов И в его основу положены серотипов схемы . Группирование штаммов синегнойной палочки по их антигенным свойствам в нашей стране впервые осуществил А. В.Черномордик I0, изучивший 0 штаммов синегнойной палочки в реакции перекрестной агглютинации с соответствующими сыворотками. Игл было выявлено различных серологических типов и отмечена
значительная роль термолабильных факторов внутривидовой дифференциации штаммов синегнойной палочки. Н.С. Акатова и Н. Е.Смирнова , провели подробное серологическое изучение культур синегнойной палочки, приняв за основу серотипирования схему, предложенную . Авторы использовали для этих целей набор из агглютинирующих сывороток, приготовленных к штаммам серотипы от ДО ОН, ii тип 2 и типы 3, 4, 5, 6, 7, 3, 4II и 5. С помощью полученного набора сывороток ими было протипировано более культур синегнойной палочки. В настоящее время в нашей стране налажен промышленный выпуск агглютинирующих сывороток для типирования культур синегнойной палочки. В.Я. Чаплинский с соавтор.