Разработка и использование амплификационных тест-систем для выявления возбудителей урогенитальных микоплазмозов

• Автор: Соловьева, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1997
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 167 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ б

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ И

ГЛАВА 1. Микоплазмозы человека и их роль в инфекционной патологии

1.1. Нозологические формы, обусловленные микоплазмами.

1.2. Патогенные свойства микоплазм

1.3. Проблема персистенции микоплазм

ГЛАВА 2. Методы диагностики микоплазменных инфекций

2.1. Микробиологическое выделение микоплазм

2.2. Серологическая детекция микоплазм.

2.3. Метод молекулярных зондов.

2.4. Метод полимеразной цепной реакции ПЦР
2.4.1. Молекулярногенетические основыметода ПЦР. 2.4.2., Применение ПЦРанализа для изучения проб
мы диагностики микоплазмозов.
СОБСТВЕННЫЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
ГЛАВА 1. Материалы и методы.
ГЛАВА 2. Разработка амшшфикационных тестсистем для
выявления патогенных микоплазм человека
2.1. Амплификационная тестсистема для обнаружения i.
2.1.1. Выбор праймеров и оптимальных условий прове
дения ПЦРанализа
2.1.2. Определение чувствительности тестсистемы.
2.1.3. Проверка эффективности тестсистемы на культурах, выделенных от больных.
2.2. Амплификационная тестсистема для выявления ii.
2.2.1. Выбор праймеров и оптимальных условий проведения ПЦРанализа
2.2.2. Определение чувствительности тестсистемы.
2.2.3. Проверка эффективности тестсистемы на культурах, выделенных от больных.
2.3. Создание амплификационной тестсистемы специфичной для .
2.3.1. Выбор праймеров и оптимальных условий проведения ПЦРанализа
2.3.2. Определение чувствительности тестсистемы. ГЛАВА 3. Отработка методов подготовки клинического
материала для анализа в ПЦР
3.1. Подбор оптимальных способов обработки сыворотки крови для анализа в ПЦР
3.2. Подбор оптимальной методики обработки цельной крови
3.3. Подбор оптимальной методики обработки тканей органов
3.4. Подбор оптимальной методики обработки соско
урогенитального тракта.
ГЛАВА 4. Применение ПНРанализа для изучения персистентной инфекции, обусловленной . на экспериментально инфицированных мышах
4.1. Выявление . на ранних сроках инфекции
4.2. Обнаружение перепетирующих микоплазм на поздних сроках инфекции.
4.3. Оценка диагностической эффективности
ПЦРанализа.
ГЛАВА 5. Сравнительная оценка диагностической эффективности различных лабораторных методов обнаружения .i и М.ii.
5.1. Выявление .i в клиническом материале.
5.2. Обнаружение М.ii в клиническом материале
ГЛАВА б. Применение разработанных тестсистем для изучения этиологической роли микоплазм и уреаплазм при хронических инфекциях урогенитального тракта, бесплодии и патологии плода.
6.1. Выявление .i и М.ii у больных с различными нозологическими формами заболеваний.
6.2. Обнаружение .i и МегтепЬапБ у
детей умерших от внутриутробной пневмонии.
ОБСЩЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Согласно современной классификации микоплазмы относятся к семейству Мусор входящему в класс . Семейство сеав подразделяется на 8 родов , , , , , , , . Одним из главных свойств микоплазм является отсутствие клеточной стенки и ее предшественников. Микоплазмы повсеместно распространены в природе. Они обнаружены у человека и других млекопитающих, птиц, рыб, моллюсков, насекомых, растений. Их жизненный цикл и метаболизм находятся в зависимости от клетки хозяина, с которой они тесно связаны. Они персистируют и паразитируют на мембранах эукариотических клеток, на клеточных стенках и внутри растительных клеток. Некоторые в процессе эволюции строго связали свое существование с определенным видом хозяина, приобрели тропизм только к определенной ткани. Многие виды микоплазм являются возбудителями заболеваний человека, животных и растений. Согласно классификации В. Д.Тимакова и Г. Я.Каган микоплазмозы, как заболевания, подразделяются в зависимости от локализации патологических процессов на респираторные, мочеполовые, суставные, связанные со сложнши воспалительными процессами внутренних органов и лейкозами. Кроме перечисленных видов микоплазменных инфекций в последние годы изучают
ся СПИДассоциированные микоплазмозы. Микоплазмы обнаруживают не только у больных, но и у практически здоровых лиц. Микоплазмоносительство ставит под сомнение значимость выявления микоплазм у больных и требует особых доказательств их возможной роли в возникновении и течении заболеваний. Не случайно микоплазш образно определяют как неприметные хищники, сосуществующие с организмом хозяина в мире до той поры, пока этот мир случайно не нарушается 7. Нозологические формы, обусловленные микоплазмами. Человек является естественным хозяином по крайней мере видов микоплазм. Наиболее твердо установлена патогенность М. По данньм ВС6 острые респираторные зоболевания, обусловленные М. Кроме того, микоплазмеиная инфекция часто протекает бессимптомно. Заболевание наблюдается во всех возрастных группах людей, но чаще всего поражает детей старшего возраста 5лет, а также подростков и взрослых до лет , 8. Помимо патологических изменений респираторного тракта М. К числу таких проявлений относятся гематологические и неврологические нарушения, осложнения со стороны сердечнососудистой системы, желудочнокишеч
ного тракта и опорнодвигательного аппарата , 7. Установление диагноза М. В связи с этим необходимы диагностические методы, позволяющие в ранние сроки, с хорошей чувствительностью и специфичностью определять возбудитель. Для вида . Об этом свидетельствуют факты выделения микоплаэмы из синовиальной жидкости и крови больных ревматоидным артритом, способность . В последние годы обсуждается роль . СПИДа. СПИДом у которых развилась саркома Капоши 3. Другие исследователи также обнаруживали . СПИДом , 6, 6. Кроме того, микроб мог вызывать у лиц с иммунодифицитом, не инфицированных ВИЧ, заболевание, начинающееся с гриппозного синдрома и заканчивающееся через несколько недель фатальным поражением множества внутренних органов 3. Заражение . Таким образом, вид . Ii патогенен для человека в полном соответствии с постулатами Коха. Однако настоящее время не установлено является ли . Ii оппортунистической инфекцией или кофактором в патогенезе СГЩа. Виды М. Урогенитальные микоплазмы могут вызвать такие патологические процессы, как кольпит, вульвовагинит, эндоцервицит, эндометрит, сальпингит, еальпингоофорит, хронический неспецифический уретрит, простатит, цистит, пиелонефрит и другие , 8, 2. Микоплазменная и уреаплазменная инфекция может явиться причиной преждевременных родов и абортов, а также патологии плода и заболеваний новорожденных 2, , 2, 7. Вопрос о причастности М. Довольно широко распространено бессимптомное носительство генитальных микоплазм среди клинически здоровых лиц М. Однако от клинически здоровых лиц генитальные микоплазмы выделяются значительно реже, чем от больных и частота выделения зависит от пола, возраста, сексуальной активности, физиологического состяния организма обследуемых.