Разработка биотехнологической схемы получения флуоресцирующих иммуноглобулинов для идентификации холерных вибрионов О139 серогруппы

• Автор: Абрамова, Елена Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 151 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список принятых сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. ХОЛЕРНЫЙ ВИБРИОН СЕРОГРУППЫ ХАРАКТЕРИСТИКА СВОЙСТВ И ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА.
Глава 2. ПРИНЦИПЫ КОНСТРУИРОВАНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВЫХ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Бактериальные штаммы.

3.2. Питательные среды и условия культивирования

3.3. Антигены.

3.4. Экспериментальные животные.
3.5. Реактивы и растворы
3.6. Оборудование и приборы.
3.7. Методы выделения и очистки иммуноглобулинов .
3.8. Получение флуорохромных конъюгатов.
3.9. Изготовление пероксидазных конъюгатов
3 Серологические и иммунохимические методы исследования
3 Статистическая обработка
Глава 4. ПОЛУЧЕНИЕ ГИПЕРИММУННЫХ ХОЛЕРНЫХ АГГЛЮТИНИРУЮЩИХ СЫВОРОТОК К VII .
4.1. Подбор животныхпродуцентов.
4.2. Получение и физикохимическая характеристика антигенов для иммунизации животныхпродуцентов.
4.3. Схемы иммунизации продуцентов
4.4. Иммуногенные свойства антигенов и эффективность различных схем иммунизации .
4.5. Изучение стабильности нативных иммунных кроличьих
сывороток в процессе хранения
Глава 5. ИЗГОТОВЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ К VII
5.1. Сравнительная характеристика эффективности методов фракционирования холерных кроличьих иммуноглобулинов.
5.2. Флуоресцентная метка иммуноглобулинов.
5.3. Изучение активности и специфичности флуорохромных конъюгатов.
5.4. Повышение специфичности холерных флуоресцирующих иммуноглобулинов.
5.5. Стерилизующая фильтрация иммуноглобулинов .
Глава 6. СТАБИЛИЗАЦИЯ СВОЙСТВ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ К VII От.
6.1. Лиофилизация препарата
6.2. Использование протекторов для стабилизации иммуноглобулинов
6.3. Изучение влияния температурного режима и сроков хранения на основные свойства холерных флуоресцирующих иммуноглобулинов
Глава 7. ПРИМЕНЕНИЕ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ДЛЯ ДЕТЕКЦИИ VII .
7.1. Эффективность скрининга чистых культур V прямым методом флуоресцирующих антител
7.2. Обнаружение V в искусственно инфицированных образцах биологического материала и объектов внешней среды.
7.3. Идентификация V скокгае различными методами экспрессанализа с применением флуоресцирующих
иммуноглобулинов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ. ИЗ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


Изучить способность к индукции специфических антител в организме биопродуцента препаратов холерного Оантигена, приготовленных различными способами, и оценить их эффективность для получения сывороток с высоким уровнем активности. Экспериментально обосновать выбор оптимального метода фракционирования кроличьих иммуноглобулинов, не влияющего на их специфическую активность и характеризующегося высоким выходом белка. Получить флуорохромные конъюгаты холерных кроличьих иммуноглобулинов и охарактеризовать их специфическую активность. Отработать рациональный режим адсорбции ФИТЦмеченых иммуноглобулинов с целью повышения специфичности препарата. Отработать оптимальные условия стабилизации кроличьх флуоресцирующих холерных иммуноглобулинов. Определить диагностическую ценность препарата в МФА, а также в других методах экспрессанализа. НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Оантигена холерного вибриона сероварианта, полученных различными способами, показано, что с наибольшей эффективностью в схеме изготовления флуоресцирующих иммуноглобулинов может быть использован препарат, полученный с помощью комбинации методов ультрафильтрации на полых волокнах и гельхроматографической очистки. Впервые разработаны общие принципы и методические приемы изготовления кроличьих флуоресцирующих иммуноглобулинов к V сИо ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Разработана биотехнологическая схема серийного изготовления нового препарата для выявления V сИо1егае в реакции иммунофлуоресценции, определены условия его стабилизации. Подтверждена авторскими исследованиями и комиссионными испытаниями высокая диагностическая эффективность применения препарата для выявления патогенных вибрионов серогруппы методом флуоресцирующих антител Акт о проведении комиссионных испытаний иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих холерных адсорбированных кроличьих сухих от . Составлен проект нормативной документации экспериментальнопроизводственный регламент ЭПР, фармакопейная статья предприятия ФСП, инструкция по применению на иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие холерные адсорбированные кроличьи сухие, одобренный Ученым советом РосНИПЧИ Микроб протокол 5 от . Материалы, представленные в диссертационной работе, получены в процессе реализации исследований, выполненных в рамках плановых тем НИР Совершенствование технологии производства и системы контроля качества медицинских иммунобиологических препаратов, 62 Лг2 Госрегистрации 6 Создание банка антигенов возбудителей ООИ и антител к ним, стандартных по своим физикохимическим и иммунобиологическим характеристикам, 52 Госрегистрации 5. Разработанный препарат используется на курсах первичной специализации врачей и биологов по особо опасным инфекциям и курсах усовершенствования врачей по бактериологии при Российском научноисследовательском противочумном институте Микроб при проведении практических занятий в цикле изучения микробиологии и лабораторного диагноза холеры. Сконструированный препарат Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие холерные адсорбированные кроличьи сухие предназначен для детекции холерных вибрионов Бенгал методом прямой иммунофлуоресценции. Рациональная схема иммунизации кроликовпродуцентов позволяет получать активные холерные сыворотки с минимальным уровнем содержания гетсрологичных антител. Диагностические холерные флуоресцирующие иммуноглобулины могут быть использованы для детекции холерных вибрионов серогруппы в других методах экспрессанализа, включающих слайдагглютинацию, иммуноферментный и дотиммуноанализ. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Эпидемиологическая безопасность на Кавказе. Всероссийской научнопрактической конференции Медицинская микробиология XXI век Саратов, . ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано научных работ. СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения 2 глав обзора литературы 5 глав собственных исследований, включающих описание материалов и методов исследований и экспериментальную часть заключения выводов списка литературы, включающего 1 источник, из них зарубежных .