Протективная активность синтетических пептидных фрагментов белков поверхностной мембраны менингококка серогруппы В и их конъюгатов при менингококковой инфекции

• Автор: Чибискова, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 105 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Необходимость создания вакцины против инфекции, вызываемой менингококком серогруппы В.

1.2. Менингококковые вакцины серогруппы В на основе капсульного полисахарида.

1.3. Комплексные вакцины против менингококка серогруппы В

1.4. Конъюгированные вакцины на основе антигенов поверхностной мембраны менингококка

1.5. Вакцины на основе синтетических пептидов

1.6. Белки наружной мембраны . iiii серогруппы В как антигены для создания вакцинного препарата

1.6.1. Белок 1 класса РогА

1.6.2. Белки 5 класса Ора
1.6.3. Железодефицитный белок .
1.7. Роль клеточного и гуморального иммунитета в защите от
менингококковой инфекции.
Заключение.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Препараты, использованные в работе
2.2. Иммунизация животных
2.3. Оценка протективности пептидов
2.4. Реакция иммунного бактериолиза
2.5. Твердофазный иммуноферментный анализ
2.6. Метод адоптивного переноса лимфоцитов.
2.7. Метод пассивной защиты
2.8. Статистическая обработка полученных результатов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
3.1. Протективная активность пептидных фрагментов белков РогА, ОраВ, рА наружной мембраны менингококка серогруппы В.
3.1.1. Определение иммуногенной и протективной активности пептидных фрагментов белка РогА.
3.1.2. Характеристика пептидных фрагментов белка ОраВ.
3.1.3. Характеристика пептидных фрагментов белкарА.
3.1.4. Зависимость гибели мышей от уровня бактериемии в крови при заражении менингококком.
3.1.5. Протективные свойства пептидов в отношении гетерологичных штаммов менингококка серогруппы В..
3.1.6. Защита мышей от менингококка серогрупп А, В и С с помощью синтетических пептидов
3.1.7. Протективные свойства смеси пептидов.
3.2. Изучение роли клеточного и гуморального факторов в защите мышей от менингококковой инфекции.
3.2.1. Роль антител к синтетическим пептидам в защите от менингококковой инфекции
3.2.2. Роль лимфоцитов в защите от менингококковой инфекции
3.3. Сравнение иммунного статуса мышей после иммунизации пептидами
и животных, переболевших менингококковой инфекцией
3.4. Протективная активность пептидов, конъюгированных с капсульным
полисахаридом менингококка серогруппы А.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ НО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Голландскими исследователями разработана шестивалентная Ввакцина, которая основана на мутанте норвежского вакцинного штамма , состоящая на из белка Рог А ,,. В некоторых европейских странах, в частности, в Греции, представленные в гексавалентной вакцине белки Рог А обнаруживаются лишь у 8 штаммов серогруппы В, циркулирующих в настоящее время, что исключает ее применение в этой стране. Менингококковая новозеландская вакцина МеМ2В, основанная на технологии процесса производства норвежской вакцины, была разработана для остановки эпидемии в Новой Зеландии, вызванной штаммом В4Р1. Ь,4, индуцировала выработку бактерицидных антител, главным образом, специфичных к Рог А 9. В реестре разрабатываемых вакцин 3 содержится описание более вакцинных препаратов, содержащих различные компоненты наружной мембраны менингококка и прошедших разные фазы исследования. Однако, до настоящего времени в практике здравоохранения не существует вакцины, характеризующейся высокой эффективностью против различных штаммов менингококка серогруппы В. Разнообразие вирулентных штаммов менингококка серогруппы В диктует необходимость включения в вакцину большого числа маркеров и содержания других компонентов микробной клетки для обеспечения ее поливалентности. В свете изложенного, в настоящий момент остается актуальной задача поиска новых антигенов . В. Этой проблеме и посвящена настоящая диссертация. Успехи иммунологии и молекулярной биологии последней четверти XX века привели к появлению новых стратегических подходов к созданию вакцин. В том числе была разработана концепция, включающая использование в вакцинных препаратах синтетических пептидов, моделирующих фрагменты белков возбудителя. Достоинствами подобных вакцин является безопасность при получении, отсутствие токсичности и побочных эффектов при вакцинации, а также возможность сфокусировать иммунный ответ на тех консервативных участках структуры возбудителя, которые не варьируют от штамма к штамму. Для конструирования менингококковой Ввакцины, нами было выбрано направление, основанное на включении в создаваемый препарат синтетических пептидных фрагментов основных БИМ менингококков 6,7,8. Установленная ныне аминокислотная последовательность этих белков позволяет синтезировать как В, так и Т комплементарные участки пептидов, которые, кроме того, являются консервативными участками указанных белков, а значит общими для всего вида нейссерий. Актуальность такого подхода к конструированию нового поливалентного вакцинного противоменингококкового препарата несомненна. Цель исследования Цель данного исследования заключалась в выборе синтетических пептидных фрагментов БНМ менингококка серогруппы В, оценке их протективных и иммуногенных свойств и создании на их основе препаратов для профилактики менингококковой инфекции в опытах на животных. Охарактеризовать протективную активность синтетических пептидных фрагментов БИМ РогА, ОраВ и ЫэрА менингококка серогрупны В. Отобрать пептиды, относящиеся к консервативным участкам БНМ серогруппы В и обладающие иммуногенными и протективными свойствами в отношении менингококковой инфекции этой серогруппы. Оценить иммуногенные и протективные свойства выбранных пептидных фрагментов БНМ менингококка серогруппы В в отношении менингококков серогрупп А и С. Исследовать роль клеточного и гуморального факторов при постинфекционном и поствакцинальном иммунитете у мышей, иммунизированных синтетическими пептидами, в защите от менингококковой инфекции. Изучить иммуногенные и протективные свойства синтетических пептидов БНМ менингококка серогруппы В после конъюгации их с капсульным полисахаридом менингококка серогруппы А. Научная новизна. Впервые в эксперименте на животных показана протективная активность синтетических пептидных фрагментов консервативных участков БНМ РогА, ОраВ и ИэрА менингококка серогруппы В в отношении менингококковой инфекции трех основных серогрупп А, В и С. Показано, что напряженность иммунитета, возникающая у мышей при иммунизации синтетическими пептидами, сопоставима с таковой у мышей после заражения их живой вирулентной культурой менингококка серогруппы В.