Получение штамма - суперпродуцента нейтральной протеазы из бактерий рода Bacillus и разработка промышленного способа его культивирования

• Автор: Нафиков, Риф Султанович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 118 с. : ил.

Оглавление

Обзор литературы

Глава 1 Протеазы, продуцируемые бактериями рода i

Глава 2 Диссоциация бактерий рода i

Глава 3 Генетические основы получения штаммов бактерий

рода i продуцентов ферментов

Собственные исследования

Глава 4 Материалы и методы исследований

4.1 Материалы исследований

4.2 Методы исследований

Глава 5 Получение штамма суперпродуцента

нейтральной протеазы из бактерии i ii 4.
5.1 Селекция штамма бактерии рода i продуцента
протеазы
5.2 Изучение продукции протеазы диссоциативными и формами исходного штамма В. ii
и его антибиотикоустойчивых мутантов
5.3 Культуральноморфологические и биохимические свойства штамма В. ii Р1
5.4 Изучение чувствительности штамма В. ii Р
к антибиотикам
5.5 Изучение безвредности штамма В. ii Р1.
5.6 Исследование генетических особенностей штамма В. ii Р1
5.7 Генетическая паспортизация штамма В. ii Р1.
5.8 Изучение влияния ингибиторов на активность
продуцируемого фермента.
Глава 6 Разработка технологии получения нейтральной протеазы на основе штамма В.ii Р1
6.1 Оптимизация питательной среды для культивирования
штамма В.ii Р1
6.2 Подбор параметров культивирования штамма В.ii Р1
6.3 Разработка многоциклического отъмнодоливного процесса культивирования штамма В.ii Р1
Заключение
Список литературы


Изучить генетические особенности селекционированного штамма в сравнении с исходным штаммом. Разработать научные основы технологии культивирования штамма с целью получения промышленных объмов протеазы. Изучить влияние высоких концентраций протеазы на штамм продуцент в процессе культивирования. Получен и запатентован новый штамм В. Р1суперпродуцент нейтральной протеазы, являющийся формой стрептомицинустойчивого мутанта коллекционного природного штамма В. Впервые разработаны научные основы многоциклического процесса культивирования штамма В. Впервые выявлено адаптивное изменение морфологии и физиологии клеток штамма продуцента В. Получен производственный штамм В. Р1 суперпродуцент нейтральной протеазы. Разработана схема получения суперпродуцентов протеазы из природных штаммов бактерий рода i. Показана возможность геномной паспортизации штаммов прдуцентов бактерий рода i. Разработаны способы культивирования штамма В. Р1 для получения промышленных объмов нейтральной протеазы периодический и многоциклический. По материалам диссертации получено два патента Российской Федерации. В. ii Р1, может быть использована для ферментолиза мозговой ткани в производстве препарата Церсбролизат наряду с применяемым в настоящее время. Новый штамм В. Р1 суперпродуцент нейтральной протеазы. Разработанная схема получения штаммов суперпродуцентов протеазы, которая включает получение антибиотикоустойчивого мутанта на основе природного штамма В. форме, проведение гомогенного глубинного культивирования и выделение из популяции формы с наибольшей зоной гидролиза казеина. Штамм В. В. БиЫШз 4 внутрихромосомной перестройкой генетического материала. Технология культивирования штамма В. БиЫШэ Р1 периодическим или многоциклическим способом на стадартизованных по составу питательных средах, являющаяся оптимальной для промышленного получения нейтральной протеазы. Международной научнопрактической конференции памяти Галины Ивановны Гончаровой Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования Москва, , Всероссийской научной конференции молодых учных Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии Уфа, . Диссертационная работа доложена и обсуждена на заседании Учного совета Уфимского НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова филиала Иммунопрепарат ФГУП НПО Микроген М3 и СР РФ протокол 1 от 3. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, получено 2 патента РФ. Объм и структура диссертации Диссертация изложена на 8 страницах, содержит таблиц и рисунков. Она состоит из введения, обзора литературы 3 главы, собственных исследований 3 главы, заключения, выводов. Библиографический список включает 3 источников 4 отечественных и зарубежных. Ферменты органические катализаторы, обладающие большой специфичностью к субстрату, обеспечивающие последовательность биохимических реакций в организме, представляют не только научную, но и большую практическую ценность. Многие из них, особенно протеазы, широко применяются в белковой инженерии и белковом синтезе, в биотехнологии и медицине. Сотни ферментов, относящихся к различным классам, выделяют из культур плесневых грибов, бактерий, дрожжей, однако во многих случаях предпочтительнее использовать для этих целей бактерии, т. Дебабов В. Г., Лившиц В. А., . Среди них наиболее используемым является род i, благодаря низкой патогенности, за исключением В. Чаще всего в каталитических центрах ферментов встречаются аминокислотные остатки. Радикалы аминокислот выполняют здесь ту же функцию, что и кофермент. В зависимости от вида остатка различают 4 группы таких ферментов ссриновыс протеазы, металлопротеазы, цистеиновые протеазы и аспартатныс протеазы В. ., . Протеазы, относящиеся к этим группам, можно разделить по чувствительности к различным ингибиторам . I., . Сериновые протеазы ингибируются фенилметилсульфонилфлуоридом и диизопропилфлуорофосфатом I. Металлопротеазы ингибируются хелатирующими агентами.