Оценка и совершенствование контроля качества новых препаратов для выявления и идентификации возбудителя холеры

• Автор: Касина, Ирина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 140 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Методы биохимической идентификации.

1.2. Использование бактериофагов в лабораторной

диагностике холеры

1.3. Молекулярногенетические методы

индикации и идентификации холерных вибрионов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.1.1. Испытуемые новые и контрольные коммерческие диагностические препараты.

2.1.2. Штаммы микроорганизмов.
2.2. Методы исследования
2.2.1. Разработка Программ медицинских
приемочных испытаний новых и коммерческих МИБП для выявления и идентификации возбудителя холеры
2.2.2. Определение биохимической
активности микроорганизмов
2.2.3. Исследование активности, специфичности и воспроизводимости бактериофагов диагностических холерных эльтор x4 и x
2.2.4. Выявление V. с помощью тестсистемы для выявления ДНК Vii ОI x
методом ПЦР методом полимеразной цепной реакции.
2.2.5. Безопасность работы
2.2.6. Статистические методы оценки результатов исследования
ГЛАВА 3. Идентификация микроорганизмов рода Vii по биохимической активности с помощью микротестсистем.
3.1. Изучение диагностической ценности микротестсистемы для биохимической идентификации вибрионов рода Vii V.
3.2. Изучение диагностической ценности микротестсистемы для ускоренного определения групп вибрионов по Хейбергу МТСХ.
Г ЛАВА 4. Сравнительная оценка качества бактериофагов
диагностических холерных эльтор x и x жидких
ГЛАВА 5. Изучение диагностической значимости тестсистемы для выявления ДНК Vii x методом полимеразной
цепной реакции
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


Впервые научно обоснованы принципы оценки диагностической эффективности бактериофагов диагностических холерных эльтор СТХ и СТХ жидких для лабораторной практики. Предложена усовершенствованная схема определения эпидемической значимости вибрионов эльтор. Разработаны требования к методам контроля специфической активности и специфичности фагов и требования к контрольным штаммам. Разработаны методы и критерии оценки качества новой тестсистемы диагностической для выявления ДНК Vii методом полимеразной цепной реакции на основе двух праймеров, комплементарных нуклеотидной последовательности гену x, ответственного за ведущий фактор вирулентности токсинообразоваиис и трех праймеров, комплементарных нуклеотидной последовательности гену , кодирующего основную субъединицу токсинкорегулируемых пилей адгезии. Показано, что тестсистема обнаруживала V x в дозе 13 м. Использованные нами в работе критерии качества испытуемой тестсистемы позволили доказать возможность одновременного выявления возбудителя холеры, определения его эпидемической значимости и дифференцирования по биовару. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И ВНЕДРЕНИЯ. Работа имеет практическую направленность и посвящена усовершенствованию методов контроля, определяющих качество новых препаратов для диагностики холеры. Сформулированы критерии и разработаны требования к основным показателям качества МИБП при их серийных выпусках. Микротестсистемы для биохимической идентификации вибрионов МТСV, ФСП и определения их групп по Хейбергу МТСХ производства филиала ФГУП НПО Микроген М3 РФ НПО Питательные среды в г. Махачкала, ФСП , протокол Комитета МИБП 8 от г. Бактериофаги диагностические холерные эльтор x и x жидкие производства ФГУЗ РосНИПЧИ Микроб г. Саратов, ФСП , протокол Комитета МИБП 7 от г. Тестсистема для выявления ДНК Vii x 1 методом полимеразной цепной реакции производства ФГУ ЦНИИ Минобороны России г. Киров, составлен проект ФСП, протокол Комитета МИБП 7 от г. Усовершенствованные требования к основным показателям качества новых препаратов для диагностики холеры внесены в утвержденные нормативные документы ФСП и Инструкции по применению. По результатам проведенных испытаний в ФСП и Инструкцию по применению на микротестсистемы для биохимической идентификации вибрионов МТСV внесены изменения, касающиеся методики постановки реакции, дополнительно введены штаммы для контроля чувствительности, включена таблица биохимической характеристики видов, относящихся к роду Vii V. V ii, V. V ivii, V. V i, V. V. i, V. iiii, V. Акт внедрения рекомендаций в Д ФСП и Инструкцию по применению утвержден начальником Управления регистрации и обеспечения качества лекарственных средств ФГУП НПО Микроген М3 РФ г. В ФСП на Бактериофаги диагностические холерные эльтор x и x жидкие уточнены требования к Специфической активности и специфичности фагов и требования к штаммам для контроля. В Инструкцию по применению на бактериофаги для более четкой оценки результатов в схему оценки эпидемиологической значимости вибрионов эльтор рекомендовано внести изменения в схему оцениваемых штаммов помимо разделения на варианты, обобщить в группы. В проект ФСП на тестсистему для выявления ДНК Vii x4 методом полимеразной цепной реакции, внесены изменения, касающиеся определения ее специфической активности и специфичности. Г м. V в концентрации МО4 м. Подобраны тестштаммы, используемые для контроля чувствительности и специфичности препарата. Для повышения чувствительности тестсистемы в течение срока годности рекомендовано разделение праймеров, комплементарных нуклеотидной последовательности гена x и гена . Акт внедрения рекомендаций в НД проект ФСП и Инструкции по применению утвержден начальником ФГУ ЦНИИ Минобороны России г. Внедрение в практику новых микротестсистем для биохимической идентификации вибрионов МТСV и ускоренного определения групп вибрионов по Хейбергу МТСХ позволит расширить диапазон идентификации видов рода Vii семейства Vii.