Особенности транспорта тетрациклина чувствительными и устойчивыми штаммами ESCHERICHIA COLI

• Автор: Алимов, Александр Петрович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 130 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. Механизмы устойчивости бактерий к антибиотикам.

I. Биохимические основы устойчивости

2. Генетические основы устойчивостиII

Глава П. Общая характеристика механизмов антибактериального действия тетрациклинов

Глава Ш. Транспорт антибиотиковтетрациклинов в

клетки чувствительных бактерий.

Глава 1У.Сравнение механизмов устойчивости к тетрациклинам, определяемой плазмидныгли и хромосомными детерминантами.

I. Генетические основы устойчивости к тетра

циклинаы.
2. Устойчивость к тетрациклинам, связанная с
процессом их транспорта
3. Устойчивость к тетрациклинам на основе
изменения аппарата трансляции
4. Белки, связанные с устойчивостью к тетрациклинам, и их функции.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава I. Объекты и методы исследования.
I. Характеристика использованных в работе
микроорганизмов. Условия культивирования.
2. Осмотический шок клеток.
3. Получение сферопластоБ
4. Получение мембранных везикул с нормальной
ориентацией мембраны.
5. Получение мембранных везикул с обратной
ориентацией мембраны.
6. Разделение везикул с разной ориентацией мем
бран с помощью сополимера конканавалина А
и альбумина
7. Определение поглощения Знтетрациклина,
хчСглицина и хСаргинина интактными клетками, клетками после осмотического шока, сферопластами и везикулами с нормальной и
обратной ориентацией мембраны
8. Определение поглощения тетрациклина
флуориметрическим методом
9. Концентрирование белков, освобождающихся
после осмотического шока.
Глава П. Роль неорганических катионов в поглощении тетрациклина чувствительными штаммами . i
I. Транспорт тетрациклина клетками . i
2. Влияние разобщителя карбонилцианкдмхлор
фенилгидразона КФГ на эффект катионов
5. Поглощение тетрациклина сферопластами и клетками . i после осмотического
Глава Ш. Особенности поглощения тетрациклина
клетками устойчивых штаммов . i .
Стр.
I. Поглощение тетрациклина интактными
клетками устойчивых штаммов е. i
2. Сравнение поглощения тетрациклина интактными клетками устойчивого штамма . i 2, клетками после осмотического шока
и сферопластами
Глава 1У.Транспорт тетрациклина в мембранных
везикулах из чувствительного и устойчивого штаммов . i .
I. Поглощение 3Нтетрациклина везикулами с
нормальной ориентацией мембраны, полученными из чувствительного штамма . i
2. Поглощенно тетрациклина везикулами с обратной ориентацией мембраны, полученными ИЗ клеток штамма . i 2 до и
после индукции.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Понимание механизмов, приводящих к увеличению поглощения антибиотиковтетрациклинов бактериями, имеет огромное значение при получении новых высокоактивных производных антибиотиков данной группы, а также для повышения активности уже применяемых тетрациклинов. Кроме того, выяснение детальных механизмов поглощения тетрациклинов клетками и сопряжения транспорта с энергией метаболизма представляет большой интерес для разработки научных основ рациональной антибиотикотерапии. Полученные результаты необходимо учитывать при планировании мероприятий по борьбе с устойчивостью бактерий к тетрациклинам. Глава I. МЕХАНИЗМЫ УСТОЙЧИВОСТИ БАКТЕРИЙ К АНТИБИОТИКАМ I. Устойчивость на биохимическом уровне обеспечивают следующие механизмы Гэйл с соавт. Инактивация лекарственного вещества ферментом ферментами, образуемым устойчивыми метками. Модификация участка, чувствительного к данному лекарственному препарату. Утрата проницаемости клеток для лекарственного вещества. Использование обходного метаболического пути или альтернативного фермента. Увеличение содержания ингибируемога фермента. Повышение концентрации метаболита, конкурирующего с ингибитором. Снижение потребности в продукте ингибируемой реакции. Многие грамположительные и грамотрицательные бактерии продуцируют 3 лактамазы, разрушающие пенициллины и цефалоспорины путем разрыва лактамной связи. Инактивация антибиотика может также достигаться химическим замещением его ключевых функциональных групп. Например, многие аминогликозидные антибиотики инактивируются аденилированием, фосфорилированием и ацетилированием Гэйл с соавт. Навашин с соавт. , . Однако у грамотрицательных бактерий устойчивость к хлорамфениколу иногда вызывается другими механизмами, которые не включают инактивацию антибиотика i, ii , . , , . Вследствие хромосомных мутаций может происходить модификация звена метаболизма, чувствительного к данному антибиотику, что обычно приводит к высокому уровню устойчивости в отношении этого лекарствеиного препарата. Например, модификация белка , входящего в состав зо рибосомной субчастицы, приводит к утрате зо субчастицей способности связывать стрептомицин Гэйл с соавт. Метилирование рибосомальной ГНК субчастиц является причиной устойчивости к аминогликозидному антибиотику касутамицину Франклин, Сноу, . Устойчивость к макролидным антибиотикам обусловлена метилированием аденина рибосомальной РНК субчастицы ферментом, который у . , Vi , . В большинстве случаев главным моментом, определяющим чувствительность микроорганизма к любому антимикробному препарату, является способность этого агента достигать мишени. Устойчивость к широкому кругу антибиотиков, присущая грамотрицателъным бактериям, часто является результатом барьерной функции наружной мембраны. Многие терапевтические агенты проникают в клетки посредством транспортных систем для нормальных метаболитов, являясь аналогами последних. Примером является поглощение циклосерина, проникающего в клетки с помощью транспортных систем для в аланина . , i , . Потеря транспортных систем в результате мутаций приводит к повышению устойчивости к этим соединениям . Гершанович, . Сульфамидные препараты подавляют у бактерий синтез фолиевой кислоты, препятствуя конденсации п аминобензойной кислоты структурного аналога сульфамидов с дигидроптеридином , , конкурентно ингибируя дигидроптероатсинтазу ДГПС. Образуемый при этом сульфамидный аналог дигидроптероата экскретируется в среду. У устойчивых клеток сродство ДГПС, кодируемой плазмидой, к сульфамидам в раз ниже, чем ДГПС, кодируемой хромосомой, и, несмотря на потери предшественника дигидроптероата, плазмидная ДГПС может обеспечивать синтез фолиевой кислоты в количестве, необходимом для роста клетки v, , . Аналогичный механизм устойчивости известен для триметоприма, аналога дигидрофолата, ингибирующего кодируемую хромосомой дигидрофолатредуктазу, фермент , также включающийся в метаболизм фолиевой кислоты , ii , , i, .