Нейраминидаза холерных вибрионов 0139 серогруппы

• Автор: Дуванова, Ольга Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 162 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

Список сокращений

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Vii новый этиологический агент холеры.

1.2. Нейраминидаза некоторые физико химические свойства и возможное биологическое значение.

1.2.1. Распространение нейраминидаз в природе. Локализация. Происхождение

1.2.2. Генетическая детерминированность нейраминидазы у бактерий

1.2.3. Механизм действия нейраминидазы. Субстратная специфичность.

1.2.4. Некоторые физико химические свойства нейраминидаз

1.2.5. Возможное биологическое действие нейраминидаз и связь

с патогенностью бактерий.
Собственные исследования .
Глава 2. Материалы и методы.
2.1. Использованные в работе штаммы бактерий
2.2. Химические реактивы
2.3. Питательные среды
2.4. Подбор оптимальных условий для продукции нейраминидазы.
2.5. Метод получения бактериальных экстрактов.
2.6. Метод получения бактериальных фильтратов
2.7. Методы определения нейраминидазной активности
2.7.1. Качественный метод оценки нейраминидазной активности холерных вибрионов.
2.7.2. Количественный метод определения фермента
2.8. Методы выделения, очистки и характеристики нейраминидазы из штаммов холерных вибрионов серогруппы.
2.9. Получение антисыворотки
2 Метод выявления нейраминовой кислоты с помощью тонкослойной хроматорафии.
2 Электрофоретические приемы исследования.
2 Постановка полимеразной цепной реакции
. Выделение ДНК.
. Амплификация ДНК и учет результатов.
2 Методы введения плазмидной ДНК в клетки.
2 Качественное определение способности холерных вибрионов серогруппы гидролизовать твины ,, , .
2 Изучение взаимодействия препаратов нейраминидазы с макрофагами.
2 Определение фосфатазной активности
2 Определение активности фосфодиэстеразы
2 Определение 5 нуклеотидазной активности
2 Статистическая обработка результатов. Компьютерное обеспечение исследования
Глава 3. Компьютерный анализ нуклеотидной и аминокислотной последовательностей гена нейраминидазы холерного вибриона биотина эльтор.
3.1. Нуклеотидный анализ
3.2. Анализ аминокислотных последовательностей фермента.
Глава 4. Нейраминидаза холерных вибрионов серогруппы
4.1. Обнаружение нейраминидазы у вибрионов, выделенных из клинических образцов и воды поверхностных водоемов.
4.2. Выделение и очистка нейраминидазы из штаммов клинического и водного происхождения
4.3. Изучение некоторых свойств нейраминидаз
4.3.1. Некоторые физико химические свойства
4.3.2. Обнаружение дополнительных ферментативных активностей у нейраминидазы холерного вибриона.
4.3.3. Изучение некоторых биологических свойств препаратов нейраминидазы.
Глава 5. Нейраминидазнан активность и другие свойства у вибрионов различной серопринадлежности
5.1. Ферментативная активность и серопринадлежность вибрионов
5.2. Сравнительное генотипирование штаммов V. сю1егае серогруппы из различных источников
5.3. Мутанты V. с1ю1егае серогруппы, негативные по структурному
гену нейраминидазы
5.4. Характеристика некоторых фенотипических признаков холерных вибрионов серогруппы различного происхождения .
5.5. Изучение способности холерных вибрионов серогруппы гидролизовать твины.
Заключение
Список литературы
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АК аминокислота, аминокислотная последовательность
АМР аденозинмонофосфат
АТР аденозинтрифосфат
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
Км константа Михаэлиса
м.кл. микробная клетка
МУК 2 4 метилумбеллиферил ацетил а нейраминовая кислота
НЕ нейраминидазная единица
НК нуклеиновая кислота, нуклеотидная последовательность
ПЦР полимеразная цепная реакция
п. н. пара нуклеотидов
ПААГ полиакриламидный гель
ЭДТА этилендиаминтетраацетат
ЭДС элективно дифференциальная среда
дальтоны
Н ген нейраминидазы
додецилсульфат натрия
ген токсин корегулируемых пилей адгезии
v ген холерного токсина
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Использование приемов биоинформатики, компьютерной геномики позволило спрогнозировать и экспериментально подтвердить не только некоторые свойства нейраминидазы Vii , но и облегчило достижение поставленной цели по изучению фермента из вибрионов Бенгал. Холера и патогенные для человека вибрионы Ростов на Дону, . Депонирован штамм V. Ьо1егае Аз биовар еког. Особенностью штамма явилось отсутствие в составе его хромосомы гена, определяющего синтез нейраминидазы, и он может быть использован в научно исследовательской работе в качестве штамма для изучения роли фермента в патогенезе холеры. Штамму присвоен номер V. Ьо1егае КМ 8 Государственной коллекции патогенных бактерий Микроб Саратов, . Положения. Холерные вибрионы серогруппы различного происхождения продуцируют нейраминидазу. Нейраминидазы из штаммов холерных вибрионов серогруппы, выделенных из клинических образцов и воды поверхностных водоемов, отличаются по ряду физико химических свойств. Структурная организация гена папН у штаммов V. Ьо1егае и серогруппы различного происхождения различна. Штаммы холерных вибрионов , выделенные из клинических образцов и воды поверхностных водоемов, не являются клональными. Результаты исследований были доложены на научных конференциях молодых ученых Ростовского на Дону государственного научно исследовательского противочумного института в гг. План диссертационной работы утвержден Ученым Советом РНИПЧИ г. Исследование выполнено в рамках плановой научной темы Холерные вибрионы распространение и свойства 5 гос. Ростов на Дону, . Основные положения диссертации отражены в опубликованных работах. Диссертация изложена на 2 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего работы отечественных и 1 зарубежных авторов. Текст иллюстрирован таблицами и рисунками. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Крупнейшая вспышка холеры в странах Индостанского полуострова в годах, обусловленная холерными вибрионами серогруппы, вызвала серьезную озабоченность работников здравоохранения Азии, Африки и Латинской Америки, которые даже высказали предположение о возможном начале новой восьмой по счету пандемии холеры , i , . Все предыдущие пандемии, включая начавшуюся в Азии в году седьмую пандемию холеры, были обусловлены штаммами возбудителя холеры серогруппы. V. не серогруппы вызывали лишь спорадические случаи диарей или небольшие вспышки неэпидемического характера. Обнаружение же вибриона , названного i . Бенгал, чтобы подчеркнуть выделение этого нового штамма V. Бенгальского залива, его высокая контагиозность, сходство с вибрионами эльтор, а таюке быстрое распространение по многим странам мира объясняют повышенное внимание исследователей к этому новому этиологическому агенту холеры . Угроза возникновения новых вспышек холеры продолжает оставаться актуальной проблемой для многих стран мира. Бангладеш и Индии с по годы, и выявили присутствие среди них, по крайней мере, шести различных риботипов. Характер антибиотикоустойчивости штаммов варьировал независимо от их риботипов и x генотипов. Результаты исследования также позволили предположить, что штаммы V. Появление эпидемии клинически неотличимого от холеры заболевания, вызванного холерными вибрионами серогруппы, заставляет переоценить этиологическую значимость холерных не вибрионов и вспомнить высказанное . Холерные вибрионы не серогруппы широко распространены в природе. Их ежегодно обнаруживают в объектах окружающей среды в различных климатогеографических зонах, но наиболее часто в регионах с жарким и умеренным климатом. Известно, что холерные вибрионы не способны вызывать отдельные случаи или групповые вспышки диарей различной степени тяжести без широкого эпидемического распространения. Показано, что эти микроорганизмы способны вызывать заболевания с внекишечиыми проявлениями, протекающие с септицемией, менингитом, отитом, нередко приводящие к летальному исходу i , М. Т., . А., . Некоторые из не не вибрионов могут нести гены x, , а также элемент С. СПИД i С. В гг.