Мутанты возбудителя чумы с пониженными потребностями в факторах роста

• Автор: Аракелян, Ирина Семеновна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Алма-Ата
• Количество страниц: 154 c. : ил

Оглавление Стр.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .

ГЛАВА I. МУТАЦИИ БАКТЕРИИ ПО ФАКТОРАМ ПИТАНИЯ

1.1. Спонтанные и индуцированные мутации .

1.2. Методы получения и определения частоты появления мутантов

1.3. Характер питания возбудителя чумы

1.4. Мутации возбудителя чумы по факторам

питания.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1. Сведения о штаммах .

2.2. Сведения о питательных средах
2.3. Методика получения мутантов с пониженными потребностями в факторах роста и определение частоты их появления .
2.4. Методы изучения свойств мутантов
2.5. Метод статистической обработки материала ГЛАВА 3. МУТАНТЫ ЧУМНОГО МИКРОБА С ПОНИЖЕННЫМИ ПОТРЕБНОСТЯМИ В ФАКТОРАХ РОСТА В ЗАВИСИМОСТИ
ОТ СОСТАВА МИНИМАЛЬНЫХ СРЕД И МЕСТА ВЫДЕЛЕНИЯ ИСХОДНЫХ ШТАММОВ
3.1. Частота появления мутантов чумного микроба из природных очагов сусликового типа
3.2. Частота появления мутантов чумного микроба из природных очагов сурочьего типа . .
Стр.
3.3. Частота появления мутантов чумного микроба из природных очагов песчаночьего типа
3.4. Частота появления мутантов чумного микроба из полевочьего и пищухового типов очагов
3.5. Частота появления мутантов из штаммов чумного микроба, выделенных в природных
очагах чумы некоторых зарубежных стран. .
3.6. Обнаружение диких штаммов возбудителя чумы с пониженными потребностями в факторах роста.
ГЛАВА 4. СВОЙСТВА МУТАНТОВ ЧУМНОГО МИКРОБА С ПОНИЖЕННЫ ПОТРЕБНОСТЯМИ В ФАКТОРАХ РОСТА
4.1. Культуральноморфологические и биохимические свойства.
4.2. Стабильность мутантов чумного мшфоба с пониженными потребностями в факторах роста при многократном пассировании их через организм белых мышей .
4.3. Подавление метионином роста мутантов чумного микроба, зависимых от цистеина и сульфита натрия.
4.4. Отношение мутантов чумного микроба с пониженными потребностями в факторах роста к антибиотикам
4.5. Характеристика вирулентности мутантов чумного микроба с пониженными потребностями в факторах роста
Стр.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ИЗ
вывода.
ЛИТЕРАТУРА


Прямые мутации встречаются у организмов дикого типа. Примером таких мутаций являются наследственные изменения у бактерий, приводящие к их неспособности синтезировать определенные факторы роста, в результате чего появляются ауксотрофные мутанты. Обратные мутации сопровождаются реверсией ауксотрофов к дикому фенотипу. Этим свойством обладают все мутанты, у которых не произошли дедеции. Мутации, восстанавливающие дикий фенотип, не восстанавливая при этом первоначального состояния самого мутантного гена, были обнаружены Стетервантом в году и названы супрессорными дат. Стенту, . Особенность супрессорных мутаций заключается в том, что обусловленные ими ревертанты фенотипически отличаются от организмов дикого типа и истинных ревертантов, обусловленных обратной мутацией, меньшей выраженностью функции. В ранних исследованиях по мутагенезу существование обратных мутаций реверсий использовали как аргумент цротив теории присутствия отсутствия Бэтсона и Пеннета. Впоследствии этот же аргумент служил для доказательства способности рентгеновских лучей вызывать внутригенные изменения. Однако в то время данные о таких реверсиях, установленных только у дрозофил, были весьма скудными. По данным Н. П.Дубинина , доказательством против теории присутствия отсутствия является наличие множественных аллелей, так как ген может иметь целый ряд аллелей, каждый из которых связан с различными его состояниями. Выяснилось, что наблвдаемые реверсии могут быть обусловлены супрессорными мутациями других генов. Отличить истинную реверсию от реверсии, обусловленной супрессорной мутацией, легко лишь в том случае, если мутантный ген и супрессор не тесно сцеплены при скрещивании с диким типом мутантный ген проявится, освободившись от супрессора. Возможность отличать супрессию от истинной реверсии появилась благодаря исследованиям некоторых бактериальных систем на молекулярном уровне. Причем наиболее приемлемым методом, позволяющим генетически отличить мутацию от делеции, служит установление факта реверсии, так как восстановление активности гена доказывает, что здесь нет какоголибо поврездения. При установлении существования реверсии необходимо исключить присутствие возможных супрессоров, как источников ложных реверсий. Доказать, что обратная мутация возникла в результате действия генасупрессора можно только путем скрещивания возникших прототрофов о его диким штаммом и изучения полученных рекомбинантов. Если появление црототрофных колоний обусловлено мутациями за счет геновсупрессоров, то среди рекомбинантов должны быть обнаружены исходные ауксотрофы Алиханян, . ДНК. Изучая образование прямых и обратных мутаций при действии определенного набора мутагенов, можно определить характер замен оснований Фриз, . Так, транзиции, образованные гидроксиламином, взаимодействующим с цитозином, не могут быть ревертированы этим мутагеном, поскольку после замены оснований в мутантной паре уже не будет цитозина. Мутации могут образовываться самопроизвольно. Это означает, что они обнаруживаются в культурах бактерий без искусственного воздействия физических, химических и других факторов. Однако применяемый в таком случав термин спонтанный не означает беспричинный. Доказательства в пользу существования спонтанных мутаций были представлены в е годы. Из них особо следует остановиться на флюктуационном тесте, методе перераспределения культуры и технике реплик. Флюктуационный тест для доказательства спонтанного происхождения мутантов кишечной палочки, резистентных к фагам, разработали i . Эти исследователи предложили и перше методы определения частоты таких мутаций от фагочувствительности к фагоустойчивости. Затем разработал эксперимент, связанный с распределением культуры. Отметив присутствие большего количества резистентных колоний на чашках, в которых первоначально они подвергались перераспределению шпателем, и меньшего на чашках, где посевы не распределялись, сделал вывод о спонтанном мутационном происхождении фагорезистентных клеток.