Молекулярно-биологическая характеристика плазмиды пестициногенности чумного микроба

• Автор: Можаров, Олег Тихонович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 173 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ4

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ . 9

ГЛАВА I. МЕТОДЫ ВВДЕЛЕНИЯ ПЛАЗМВДНОЙ ДНК.9

ГЛАВА П. АНАЛИЗ ПЛАЗМВДНЫХ ДНК С ПОМОЩЬЮ СПЕЦИФИЧЕСКИХ ЭНДОНУКЛЕАЗ, КОНСТРУИРОВАНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ МОЛЕКУЛ ДНК.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА Ш. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .

ГЛАВА 1У. ВЬЩЕЛЕНИЕ ПЛАЗМВДНОЙ ДНК, ДЕТЕРМИНИРУЮЩЕЙ

СИНТЕЗ ПЕСТИЦИНА I

1. Сравнительная эффективность некоторых

методов выделения плазмидной ДНК .

2. Биологическая идентификация препаратов плазмидной ДНК.
ГЛАВА У. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ДНК ПЛАЗМВДЫ
ПЕСГИЦИНОГЕННОСГИ .
1. Определение молекулярной массы плазмиды пестициногенности
2. Изучение нуклеотидного состава плазмидной ДНК
3. Определение числа копий плазмиды пестициногенности на один хромосомный эквивалент
У.ревЫв .
4. Изучение чувствительности ДНК плазмиды пестициногенности к специфическим эндонуклеазам .
5. Некоторые характеристики миниплазмид
чумного микроба 3
ГЛАВА У1. КОНСТРУИРОВАНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ МОЛЕКУЛ ДНК НА ОСНОВЕ РЕПЛИКОНА ПЛАЗМИДЫ ПЕСГИЦИНОГЕННОСГИ, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИХ ДЛЯ КАРТИРОВАНИЯ . . 6
стр.
1. Использование в качестве клонируемой ДНК плазмиды рВй 2 . 6
2. Картирование плазмиды пестициногенности
с использованием гибридной плазмиды 4
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.3
ВЫВОДЫ.6
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


МАК фракционирование происходит не только в зависимости от пространственной структуры молекул, но также от молекулярной массы и соотношения нуклеотидов в молекуле ДНК. Им показано, что плазмидная ДНК с низким содержанием ГЦпар, но высокой молекулярной массой элюируется с колонки МАК при повышении ионной силы раствора. Несколько позже , i, была предложена модификация этого метода разделение плазмидной и хромосомальной ДНК на колонке с кизельгуром, активированным поли ь лизином. Одновременно в ряде лабораторий велись работы по разработке альтернативных методов выделения плазмидной ДНК. В г. . плазмиды из . .ii, а в г. .. Была затем сделана попытка выделения плазмидной ДНК из этих трансконъюгантов , . Нплазмиды значительно отличаются по молярному содержанию ГЦпар от ДНК хромосомы . Одновременно опубликована работа . .iii разные факторы от различных групп энтеробактерий. Из трансконъгогантов выделялась суммарная ДНК по методу . Авторы показали, что этим методом можно выделять плазмиднуго ДНК с мольной долей ГЦ, составляющей и более процентов. Принципиально сходный метод был разработан на основе результатов исследований . I. с соавт. v . . , которые достаточно детально изучили миниклетки . ДНК, РНКполимеразы, ДНКметилазы и фотореактивирующего фермента, но наличие в них ДНКполимеразы I, а также разработали методы получения миниклеток в препаративных количествах. А. плазмиды и ряда плазмид, I . Отсутствие хромосомы и заметного синтеза РНК делает миниклетки удобным объектом для выделения плазмидной ДНК. Действительно, I . м. I, . . с соавт. ДНК плазмид в и , а, вскоре после них, v . . выделил плазмиды Ю9 I . В этот оптимистический период работы с миниклетками было выполнено еще несколько работ по выделению плазмидной ДНК v . . . v . . , I . ДНК в миниклетках . , i, . плазмида и некоторые плазмиды передаются в миниклетки с низкой частотой и не полностью . Рассмотренные выше методы представляют сегодня скорее исторический, чем практический интерес. Вскоре, однако, был сделан выдающийся скачок в методологии выделения и очистки плазмидной ДНК. В г. . ДНК в градиенте плотности хлористого цезия в присутствии интеркалирующего красителябромистого этидия. Несколько позже . Vi . ДНК. ОСформы уменьшает их удельную плотность на 0,5 гсм , а для СССформы это уменьшение составляет всего 0,5 гсм. Метод сразу же завоевал всеобщее признание исследователей, несмотря на дороговизну и относительную уникальность оборудования и реактивов по существу, впервые была получена возможность получать плазмидную ДНК в препаративных количествах в чистом виде. Мейнел, . iv, , vi . Брода, Воронин, . Нельзя сказать, что работа по созданию новых, более совершенных методов выделения и очистки ДНК плазмид на этом остановилась, но, за небольшим исключением, все последующие исследования в этом направлении связаны лишь с усовершенствованием, повышением производительности метода . К настоящему времени опубликовано трудно поддающееся учету количество работ, связанных, так или иначе с выделением ДНК различных внехромосомных элементов наследственности, и почти в каждой из этих работ имеются свои методические особенности. Очевидно, что принципиально невозможно рассмотреть все эти работы, поэтому мы ограничимся лишь некоторыми, имеющими относительно общее значение. I. Направленные на более значительное отделение ДНК плазмид от хромосомальной ДНК в процессе центрифугирования в градиенте концентрации краситель. iv . . i . ., i 0. I . i . ДНК, почти не изменяя таковой СССформ. Это позволяет получить плазмидную ДНК после фракционирования градиента совершенно свободной от примесей линейных форм ДНК.