Микроорганизмы, ассоциированные с оранжерейными орхидными

• Автор: Цавкелова, Елена Аркадьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 161 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Г ЛАВА 1. Биологические особенности тропических орхидей

1.1. Некоторые особенности корневой системы эпифитных орхидей

1.2. Размножение орхидных и прорастание их семян

ГЛАВА 2. Микроорганизмы, ассоциированные с растениями

2.1. Бактерии

2.1.1. Представители ассоциативных бактерий

2.2. Грибы. Микориза орхидных

2.2.1. Представители ассоциативных микромицетов

2.3. Цианобактерии
2.3.1. Цианобактерии доминирующая составляющая консорциумов микроорганизмов
2.3.2. Цианобактерии симбионты растений
ГЛАВА 3. Фитогормоны. Распространение среди микроорганизмов
3.1. Ауксины
3.2. Гиббереллины
3.3. Цитокинины
3.4. Практическое применение фитогормонов
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 1. Объекты и методы исследования
1.1. Орхидеи, взятые для исследований
1.2. Выделение микроорганизмов, ассоциированных с орхидными
1.2.1. Выделение бактериального комплекса орхидей
1.2.1.1. Определение количества бактериальных клеток ризопланы орхидей
1.2.1.2. Получение чистых бактериальных культур
1.2.2. Выделение микобиоты орхидных
1.2.3. Выделение цианобактериального сообщества орхидных
1.2.3.1. Получение чистых культур цианобактерий
1.3. Идентификация микроорганизмов
1.3. .Определение родовой принадлежности бактерий
1.3.2. Идентификация грибов
1.3.3. Идентификация цианобактерий
1.4. Хранение микроорганизмов
1.5. Оценка роста и развития микроорганизмов
1.6. Микроскопирование
1.7. Определение потенциальной азогфиксирующей активности воздушных корней эпифитных орхидей
1.8. Изучение состава капсул и межклеточного матрикса бактерий
1.8.1. Качественный экспрессметод определения углеводной природы капсулы и межклеточного матрикса с 2,3,5трифенилтетразолием
1.8.2. Качественный экспрессметод определения кислой полианионной природы капсулы и межклеточного
матрикса с цетавлоном
1.8.3. Определение содержания белка и углеводов в капсуле и матриксе бактерий
1.8.4. Осаждение внеклеточных полисахаридов из
культуральной жидкости
1.9. Определение количества индолилуксусной кислоты в культуральной жидкости
1 Исследование фитогормонов с помощью тонкослойной хроматографии
. Идентификация индолилуксусной кислоты ИУК и
веществ гибберсллиновой природы
. Идентификация веществ цитокининовой природы
1 Методы биологических проб
. Биотест по определению влияния ауксинов на рост
клеток в фазе растяжения
. Стимулирование корнеобразования у черенков фасоли
. Биотест по определению влияния гибберсллина на рост гипокотилей салата
. Биотест, основанный на задержке пожелтения
срезанных листьев в присутствии цитокининов
1 Симбиотическое проращивание семян орхидных
. Изучение влияния бактериальных кулыур на
прорастание семян орхидных
. Изучение влияния культур микромицетов на
прорастание семян орхидных
1 Среды для культивирования микроорганизмов
1 Математическая обработка результатов ГЛАВА 2. Изучение состава микроорганизмов, ассоциированных с
корнями тропических орхидей
2.1. Особенности локализации микроорганизмов на корнях орхидных
2.2. Выделение и идентификация микроорганизмов, ассоциированных с орхидными
2.2.1. Цианобактерии
2.2.1.1. Определение потенциальной азотфиксирующей
активности чехлаоболочки воздушных корней Рка1аепор1я атаЫНв
2.2.2. Грибы
2.2.3. Бактерии ГЛАВА 3. Образование фитогормонов микроорганизмами,
ассоциированными с корнями тропических орхидей
3.1. Образование фитогормонов микобиотой орхидных
3.2. Образование фитогормонов бактериями
Г ЛАВА 4. Симбиотическое проращивание семян орхидей
4.1. Использование бактериальных кулыур в симбиотическом проращивании семян орхидей
4.2. Использование микромицетов в симбиотическом
проращивании семян орхидей
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Л.Кнудсону Он предположил, что роль гриба может заключаться в расщеплении крахмала и предложил использовать готовые сахара. Этот метод позволил расширить возможности размножения и гибридизации орхидей, что также способствовало понижению цен на эти растения ii, . Таким образом, размножение и разведение орхидей, как мы представляем его сейчас, эволюционировало больше чем столетие. В настоящее время исследуют влияние состава сред и условий культивирования на развитие семян и протокормов орхидей, а также совершенствуют симбиотический метод проращивания семян этих растений. Трудности проращивания семян некоторых видов орхидей объясняются отсутствием информации о веществах, необходимых для их роста и развития. Для решения этой проблемы используют среды, включающие добавки неопределенного состава кокосовое молоко, томатный сок, гомогенат бананов, экстракт симбиотических грибов и активированный уголь , Черевченко, Кушнир, ii, . Абсорбционные свойства последнего избирательны он поглощает различного типа вещества полифенолы, витамины, ростовые гормоны, ингибирующие компоненты, присутствующие в среде после автоклавирования, но не удаляет сахара. Положительные свойства активированного угля также связывают с затемнением среды для наземных видов это особенно важно для роста корневых кончиков и улучшением аэрации. Кроме того, в среды добавляют различные витамины и ростовые вещества. Однако даже смесь ростовых факторов, стимулирующее действие которой обычно заметнее по сравнению с отдельными фитогормонами, часто не имеет такого успешного эффекта для развития протокормов, как оказывает наличие симбионтного гриба или добавок неопределенного состава , vi, . В качестве источника углерода семена тропических эпифитных видов орхидей хорошо используют глюкозу, фруктозу, мальтозу, сахарозу и некоторые другие сахара ii, . В качестве источника азота нитраты и аммонийные соли одинаково подходят для семян и проростков, хотя некоторые виды орхидных неспособны использовать нитраты в течение первых дней. Наилучшим среды для прорастания семян считается 4,8 5,2, хотя границы роста лежат в пределах от 3,6 до 7,6 . Использование агаризованных сред позволило повысить прорастание многих но не всех видов орхидей до Никишина и др. В середине шестидесятых годов XX века научились размножать орхидеи с помощью бесконечного деления кусочка меристематической ткани, взятой из почки, побега или корня, увеличив, таким образом, в сотни и тысячи раз производство природных видов и искусственно полученных гибридов, заметно снизив рыночную цену Э1их растений . Коломейцева, . ГЛАВА 2. Растения в процессе своей жизнедеятельности непрерывно и в большом количестве выделяют во внешнюю среду разнообразные органические вещества водорастворимые углеводы, органические кислоты, летучие метаболиты, высокомолекулярные полисахариды, количество которых достигает от всего углерода, ассимилированного растением при фотосинтезе Умаров, . Интенсивное поступление в ризосферу узкая область в мм почвы вдоль поверхности корней продуктов метаболизма растений создает высокую энергетическую обеспеченность этой зоны. Кравченко, . Среди основных форм взаимодействия между партнерами можно выделить паразитизм, симбиоз, а также ассоциативные взаимоотношения. Понятие симбиоз чаще употребляется как синоним термина мутуализм, что подразумевает длительный пространственный контакт между партнерами и подчеркивает облигатность и обязательную взаимовыгодность симбиоза. Однако на смену нашим представлениям о симбиозе, как о двухкомпонентной системе, приходит понятие многокомпонентной ассоциации, в которой на одном макросимбионте обитают несколько микросимбионтов i, , . В последнее время для обозначения сопутствующих микробных компонентов ассоциаций введен термин i i . Такие минорные составляющие консорциумов играют существенную роль в становлении, развитии и функционировании симбиотических систем. Гетеротрофное питание микромицетов обуславливает их непосредственное участие в разложении растительных и животных остатков, многие из которых с трудом подвергаются распаду бактериями или актиномицетами Горленко, .