Механизмы активации токсических субстанций чумного микроба

• Автор: Соколова, Елена Павловна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 114 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Факторы, влияющие на вирулентные свойства

чумного микроба..

1.2. О токсине чумного микроба.

1.3. Структура и функция мышиного токсина

МТ ii i.

1.4. Структура и функция липополисахарида

ЛПС . i
1.5. Образование комплекса ЛПСпротеин как способ регуляции биологической активности бактериальных
ЛПС i viv.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Глава 2. Материалы и методы
2.1. Использованные штаммы бактерий, химические
реактивы и питательные среды.
2.2. Методы получения препаратов капсульной субстанции
. i
2.3. Методы получения биологически активных
препаратов.
2.3.1. Получение гемолизированных эритроцитов
2.3.2. Получение биологически активных экстрактов
из селезенки свиньи
2.3.3. Получение биологически активных диализатов
из селезенки свиньи
2.4. Метод повышения вирулентности вакцинного
штамма У. реБв ЕУ .
2.5. Методы физикохимического анализа.
2.5.1. Количественное определение белка
2.5.2. Электрофорез в полиакриламидном геле
2.5.3. Гельфильтрация.
2.6. Методы иммуноблоттннга и дотблогтинга
2.7. Методы идентификации биологически активного
вещества.
2. 8. Статистическая обработка данных
Глава 3. Выяснение химической природы биологически активного вещества, присутствующего в организме млекопитающих
и усиливающего вирулентные свойства бактерий чумы
Глава 4. Биологически активное вещество как активатор
токсических субстанций чумного микроба.
4.1. Значение капсульной субстанции в реализации
токсических свойств У. рБв
4.2. Влияние биоактивагора на молекулярную организацию биополимеров капсульной субстанции чумного микроба и проявление е токсичности
4.3. Действие биологически активного вещества на МТ и ЛПС
Глава 5. Изучение возможности образования комплекса
МТЛПС У. рсББ.
5Л. Оценка токсичности МТ и ЛПС У. резня при совместном введении препаратов экспериментальным животным.
5.2. Доказательства образования комплекса МТЛПС.
5.3. Значение нативности химической структуры ЛПС чумного микроба в установлении физикохимических связей с МТ.
5А. Изучение возможности образования комплексов ЛПС У. рсбБб с различными белковыми молекулами и их
функциональная активность
5.5. Изучение возможности образования комплексов МТ с ЛПС различных грамотрицательных бактерий и их
функциональная активность
ЗАКЛЮЧЕНИЕ .
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Детальное изучение химической структуры, генетической организации и достаточно полное биологической активности МТ и ЛПС, к сожалению, не дают возможности отвозить на ряд принципиальных вопросов, а именно изменяется ли токсичность МТ и ЛПС в организме чувствительного животного при развитии инфекции какие биомолекулы и каким образом осуществляют их модификацию следует ли рассматривать МТ и ЛПС чумного микроба как независимо существующие друг от друга структуры или же в условиях i viv между ними возможно образование физикохимической и функциональной взаимосвязи. Из многочисленных подходов, позволяющих дать ответ на интересующие нас вопросы, мы акцентировали внимание на двух направлениях исследований, которые, с нашей точки зрения, имели теоретическое и экспериментальное обоснование. Одно из них основано на общебиологическом принципе регуляции действия эндотоксинов и предполагает модуляцию токсичности бактериальных ЛПС посредством образования комплексов ЛПС с соответствующими биомолекулами Аполлонии А. В., . . , , i . М. . . ., , i . i . . А. Н. Кравцовым с соавторами , о повышении вирулентных свойств бактерий чумы в условиях i vi под влиянием вещества, присутствующего в организме млекопитающих. Молекулярные механизмы, лежащие в основе указанного феномена не изучены. Анализ работы этих авторов с большой долей вероятности позволил предположить, что факт повышения вирулентности может быть связан с усилением токсических свойств бактерий чумы. Однако, молекулярные механизмы, лежащие в основе указанного феномена, не выяснены и требуют дальнейшего изучения. Ответы на указанные вопросы приблизят нас к пониманию природы полного токсина чумного микроба и специфичности патогенетического процесса при чумной инфекции. Изучение возможности активации токсических субстанции ii i ЛИС и МТ биологически активным веществом, присутствующим в орга. МТЛПС. Идентифицировать биологически активное вещество, присутствующее в организме млекопитающих и усиливающее вирулентность чумного микроба. Изучить влияние активатора на капсульное вещество и токсические субстанции чумного микроба МТ, ЛПС. Изучить возможность образования комплекса МТЛПС . . i. Экспериментально доказать образование химических связен между ЛПС и МТ и их влияние на структуру и функцию образованного комплекса. Оценить специфичность взаимодействия ЛИС грамотрицательных бактерий и МТ чумного микроба. Научная новизна. Установлено, что биологически активное вещество, присутствующее в организме млекопитающих и способное повышать вирулентные свойства чумного микроба, представляет собой низкомолекулярное соединение с выраженными полярными свойствами и относится к классу гликолипидов. Доказано, что повышение вирулентности бактерий чумы иод влиянием биологически активного гликолипида связано с активацией токсических субстанций, при которой изменяется молекулярная организация капсульного вещества и ЛИС . Впервые установлено, что МТ и 1 чумного микроба i vi взаимодействуют между собой с образованием комплекса МТЛПС, который обладает высокой токсичностью для экспериментальных животных как для белых мышей, так и для морских свинок. Образование физикохимических связей между МТ и ЛПС сопровождается изменением конформации и биологической активности молекул ЛПС. В модельных экспериментах с использованием бактериальных ЛПС, МТ и ряда белков различного происхождения выяснено, что МТ является регулятором токсической активности некоторых ЛПС грамотрицательных бактерий при максимально специфичной активации ЛПС чумного микроба. Биологически активное вещество, присутствующее в организме млекопитающих и способное повышать вирулентные свойства чумного микроба, представляет собой низкомолекулярное соединение с выраженными полярными свойствами и относится к классу гликолипидов. Повышение вирулентности бактерий чумы под влиянием биологически активного гликолипида связано с усилением токсических свойств . МТ и ЛПС.