Культивирование, уреазная активность и белоксодержащие антигены Helicobacter pylori

• Автор: Вартанова, Нунэ Оганесовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 130 с. : ил.

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 2.1. Общая характеристика i i.

2.1.1. История открытия рода i.

2.1.2. Виды i

2.1.3. Морфологические и физиологобиохимические свойства

рода i

2.1.4. Методы диагностики Н.i

2.1.5. Значение .i в экологии и патологии человека

Глава 2.2. Уреаза .i

2.2.1. Фермент характеристика и свойства

2.2.2. Методы определения уреазной активности микроорганизмов
2.2.3. Идентификация .i с помощью уреазы
Глава 2.3. Культивирование .i
2.3.1. Культивирование на полноценных средах
2.3.2. Анализ известных синтетических сред для культивирования .i
Глава 2.4. Антигены .i
2.4.1. Белки и липопротеины.
2.4.2. Липополисахариды.
Глава 2.5. Заключение по обзору литературы
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Глава 3.1. Объекты и методы исследования
Глава 3.2. Создание коллекции штаммов .i .
Глава 3.3. Разработка количественного метода определения уреазной
активности биоптатов слизистой оболочки желудка и суспензий клеток .i
3.3.1. Разработка метода
3.3.2. Сравнение уреазной активности биоптатов и культур
.i.
3.3.3. Изучение уреазной активности культур .i в разных
фазах роста
Глава 3.4. Разработка новой синтетической среды для культивирования
Н.i
3.4.1. Разработка среды
3.4.2. Влияние концентрации лошадиного гемоглобина на рост
Н.i
Глава 3.5. Получение клеточных и внеклеточных антигенсодержащих препаратов из И.i и их оценка методом
иммуноблоттинга.
Глава 3.6. Исследование бактериологических, биохимических и
иммунологических показателей, связанных с носительством Н.i в группе больных язвенной болезнью
3.6.1. Изучение взаимосвязи между количественной уреазной активностью биоптатов и тяжестью течения
заболевания
3.6.2. Оценка наличия Iантител к .i методом ИФА в сыворотках крови больных язвенной болезнью и бессимптомных доноров.
3.6.3. Расчет скорости выделения ОН ионов пилорическим отделом желудка в случае наличия .i в слизистой оболочке
3.6.4. Расчет потребления гемоглобина хеликобактером в пилорическом отделе среднестатистического желудка
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
6. ЛИТЕРАТУРА
Обозначения и сокращения
ЛГ1С липополисахариды
НР суммарный количественный показатель наличия у пациента Н.ру1оп
8 додецилсульфат натрия ИФА иммуноферментный анализ водородный показатель БСА бычий сывороточный альбумин ЭДТА этилендиаминтетраацетат КОЕ колониеобразующие единицы кЭа килодальтон
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Учитывая, что некоторые высокоспецифичные антигены Н. В доступной литературе описаны такие среды, однако, все они содержат бычий или лошадиный сывороточный альбумин . Более или менее значимый прирост биомассы Н. Очевидно, что до сих пор не найден тот основной компонент синтетической среды, который дал бы возможность культивировать И. Изложенное свидетельствует о том, что для усовершенствования диагностики . Исследование активности уреазы и оценка влияния состава питательной среды на накопление биомассы и образование клеточных и внеклеточных белоксодержащих антигенов . Создание коллекции штаммов . Разработка количественного метода определения уреазной активности биоптатов слизистой оболочки желудка и суспензий клеток . Разработка новой синтетической среды для культивирования И. Получение клеточных и внеклеточных антигенсодержащих препаратов из . Оценка методами ИФЛ и иммуноблоттинга специфических Iантител в сыворотках крови больных язвенной болезнью и бессимптомных доноров с использованием полученных антигенсодержащих препаратов из . С помощью разработанного количественного метода показано, что уреазная активность биоптатов коррелирует с активностью уреазы выделенных их них культур . Уреазная активность культур зависит от фазы роста в фазе замедления она в 1,4 раз выше, чем в стационарной фазе. Сопоставление количественной уреазной активности и тяжести течения заболевания в группе больных язвенной болезнью показапю отсутствие корреляции между этими показателями. Метод дает возможность оценить продукцию хеликобактером гидроксил анионов в желудке и, таким образом, судить об участии бактерий в поддержании кислотнощелочного баланса. Обнаружено, что именно гемоглобин является тем принципиальным компонентом синтетической среды, который дает возможность культивировать . Создана лабораторная коллекция клинических изолятов, насчитывающая штаммов . Разработан количественный метод определения уреазной активности применительно к биоптатам слизистой оболочки желудка и клеточным суспензиям Н. Метод прост в исполнении и дает полезную информацию в течение минут, в отличие от нескольких часов при определении активности уреазы на качественном уровне. В группе из больного язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки данным методом показано наличие И. Создана синтетическая среда для культивирования . Установлено, что антигенсодержащий препарат из культуральной жидкости после выращивания . Разработан количественный высокочувствительный метод определения уреазной активности биоптатов слизистой оболочки желудка и суспензий клеток . Разработана новая эффективная синтетическая среда для культивирования . Культивирование . Экспериментально обосновано предположение о роли Н. Н.i со скоростью выделения протонов слизистой оболочкой желудка. Материалы диссертации доложены на конференции молодых ученых ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН на заседаниях Ученого Совета ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН на VIII Всероссийском съезде эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Москве на заседании Московского отделения Всероссийского научнопрактического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов . Диссертация апробирована на научной конференции отдела микробиологии ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН 4 марта года. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Глава 2. Впервые спиралевидные микроорганизмы в желудке животных были описаны немецким гистологом . В году i . Итальянский анатом i . Тремя годами позже, в г. Н. дал подробное описание свойств спиралевидных микроорганизмов, обнаруженных в желудке животных, включая структуру жгутиков, подвижность, и перечень хозяев. Первые данные об обнаружении спиралевидных бактерий в желудке человека появились в году. Польский гастроэнтеролог i . В году сходные микроорганизмы описал датский гастроэнтеролог Р. К., и также предположил их участие в язвенной болезни iv . Немецкий ученый ii . Среди ранних работ следует отметить труд датского ученого ii . Данные бактерии он назвал i i. Через лет, в году за эти работы он был удостоен Нобелевской премии. В японские ученые i К. Баранская Е. К., .