Корректирующее действие пробиотиков при экспериментальном дисбактериозе

• Автор: Колганова, Татьяна Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 139 с. : ил

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Нормофлора и ее роль в обеспечении колоницационной резистентности организма.

Глава 2. Адгезия как первый этап колонизационного процесса

Глава 3. Нарушения колонизационной резистентности дисбиозы. Модели

дисбактеризов

3.1. Инфекции, вызываемые энтерогеморрагическими ii i.

3.2. Урогенитальные инфекции, как следствие дисбиоза.

Глава 4. Профилактика и лечение дисбиозов

4.1. Использование пробиотиков в терапии дисбиозов

4.2. Низкоинтенсивное импульсное лазерное излучение НИЛИ в терапии инфекционных заболеваний
ЧАСТЬ 2. СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ Глава 1. Материалы и методы
1. Материалы.
2. Методы
2.1. Идентификация бактерий
2.2. Методы исследования бактериальной адгезии
2.2.1. Тест агрегации дрожжей
2.2.2. Тест исследование адгезии к иммобилизированным субстратам
2.2.3. Обогащение культур микроорганизмов клетками, экспрессирующими пили I типа
2.2.4.Радионуклеидное исследование адгезии.
2.2.5. Формалинизация эритроцитов
2.2.6. Исследование адгезии к эритроцитам
2.2.7. Исследование адгезии микроорганизмов к клеткам защечного эпителия.
2.2.8. Исследование связывание протеина i с пероксидазой хрена
2.2.9. Обработка ферментами и РРО
2.2 Обработка НИЛИ.
2.3. Определение антагонистической активности методом отсроченного антагониз
2.4. Моделирование дисбактериоза у животных.
2.5. Исследование транслокации кишечной флоры в органы и ткани.
2.6. Методы работы с ДНК
2.6.1. Выделение плазмидной ДНК.
2.6.2. Обработка ДНК
2.6.3. Методы введения генетического материала в клетку.
2.6.3.1. Кальциевая трансформация.
2.6.3.2. Конъюгация и мобилизация.
2.7. Оценка продукции колицина и чувствительности бактерий к его действию
2.7.1. Тест с верхним агаром
2.8. Методы статистической обработки результатов исследований.
Глава 2. Получение генноинженерных вариантов штамма .i М
2.1. конструирование плазмид и .
2.2. получение штаммов .i М , .i М , .i i, .i i
Глава 3. Антагонистическая активность нормальной микрофлоры по отношению к
патогенным ii i.
Глава 4. Сравнительное исследование адгезивной активности различных групп
пробиотиков.
Глава 5. Исследование влияния на уровень адгезии различных штаммов .i
физикохимических факторов
5.1. Влияние низкочастотного инфракрасного лазерного излучение на уровень адгезии патогенных .i к различным субстратам
5.1.1. Исследование влияния НИЛИ на уровень жизнеспособности
5.1.2. Влияние НИЛИ на уровень адгезии патогенных .i к эритроцитам.
5.1.3. Изменение адгезии патогенных .i под влиянием обработки НИЛИ эритроцитов.
5.1.4. Влияние НИЛИ на уровень адгезии патогенных .i к клеткам защечного эпителия
5.2. Влияние обработки ферментами Аспарагиназой и Полифенол оксидазой на уровень адгезии .i к различным субстратам
5.2.1. Определение бактерицидных свойств ферментов и РРО
5.2.2. Определение эффективной антиадгезивной концентрации и РРО.
5.2.3. Исследование влияния ферментов Аспарагиназы и Полифенол оксидазы на адгезию патогенных .i к эритроцитам
5.2.4. Исследование влияния ферментов и РРО на адгезию патогенных .i к клеткам защечного эпителия
5.2.5. Исследование влияния ферментов и РРО на адгезию .i в опытах Исследования адгезии к иммобилизированным субстратам и радионуклеидном исследовании адгезии.
5.2.6. Исследование влияния и РРО на величину связывания очищенного протеина i с пероксидазой хрена в реакции I
5.3. Влияние комплексной обработки НИЛИ и ферментами и РРО на уровень адгезии .i
5.4. Влияние НИЛИ и ферментов РРО и на адгезивную активность пробиотиков
Глава 6. Исследование защитного действия пробиотиков на модели i viv
6.1. Отработка модели дисбактериоза на мышах
6.2. Моделирование инфекционного процесса, вызванного .i
6.3. Использование пробиотиков для профилактики и лечения инфекции, вызванной .i Н
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Сконструированные плазмиды и СоЩтоЬ содержат детерминанту синтеза колицина Е1 сеа, ген иммунности к нему i, не способны к мобилизации конъюгативными плазмидами не содержат области, стабильно поддерживаются в популяции за счет наличия гена сег и пригодны для использования в качестве факторов, придающих родительскому штамму . М способность к синтезу колицина Е1 и вследствие этого повышенную антагонистическую активность в отношении патогенов. Полученные рекомбинантные штаммы, а так же колисодержащие ПБ в опытах i vi проявляют высокий уровень антагонистической активности в отношении клинических штаммов патогенных . Воздействие НИЛИ блокирует адгезины уропатогенных . Обработка эритроцитов НИЛИ приводит к ингибированию рецепторов, что также выражается в частности снижением адгезии. Патогенные . НИЛИ, чем представители нормофлоры. Ферменты и РРО обладают свойством снижать уровень адгезивности микроорганизмов на различных моделях и экспериментах i vi иммобилизированные субстраты, эукариотические клетки эритроциты и клетки защечного эпителия и др. ПБ значительно менее чувствительны к воздействию ферментов по сравнению с патогенными . Получена адекватная модель дисбактериоза у животных для исследования эффективности ПБ. В качестве маркра наличия дисбактериоза использован штамм . Н7. ПБ обладают протективным действием в отношении клинического штамма . Н7 на модели i viv. Апробация работы. Результаты исследований были доложены на научнопрактических конференциях НПО Биомедицинские технологии Москва, , , , на международной научнопрактической конференции памяти Г. И. Гончаровой Москва, и на заседаниях кафедры микробиологии и биологии медицинского факультета РУДН Москва, , , , . Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 работ. Т.В. Колганова, И. Г. Осипова, М. В. Далин, X. Ватанабе, Е. А. Васильева, В. Л. Чеснокова, В. Ф. Евлашкина, Э. Г. Кравцов, Н. Ю. Абрикосова, О. Ю. Лукьянова. Некоторые механизмы взаимодействия пробиотиков с веротоксинпродуцирующими ii i Н7 сб. Биотехнология, Москва, , , с. Адгезивная активность пробиотиков, применяемых в гинекологической практике И. Г. Осипова, Л. Созаева, В. Ф. Евлашкина, Е. А. Васильева, О. Ю. Лукьянова, Т. В. Чумаева, Т. В. Колганова. Биотехнология Москва, , , с. Т.В. Колганова, X. Ватанабе, М. В. Далин, Е. А. Васильева, И. Г. Осипова, В. А. Лившиц, О. Ю. Лукьянова, В. Ф. Евлашкина К вопросу о механизме защитного действия пробиотиковсб. Биотехнология, Москва, , , с. Т.В. Колганова, Ермолаев, Р. Дж. Дойл. Влияние ферментов аспарагиназы и полифенолоксидазы на адгезивные свойства микроорганизмов БЭБ, , 1, с. Колганова, Т. Джарадат, Т. В. Чумаева, И. Г. Осипова и др. К вопросу о воздействии импульсного инфракрасного лазерного излучения и пробиотиков на штаммы ii i, выделенные от людей с заболеваниями мочевыделительной системы международная научнопрактическая конференция памяти Г. И. Гончаровой, Сб. Москва, , с. Изучение адгезивной активности пробиотиков различных лекарственных форм, применяемых в гинекологической практике Т. В. Чумаева, И. Г. Осипова, Е. А. Васильева, Т. В. Колганова, О. В. Золотарева, С. Э. Саркисов международная научнопрактическая конференция памяти ГИ Гончаровой, Сб. Москва, , с. Т.В. Колганова, Т. Джарадат, Ермолаев, И. Г. Осипова, Е. А. Васильева, М. В. Далин, Р. Дж. Дойл. К вопросу о комплексном воздействии импульсного инфракрасного лазерного излучения и аспарагиназы на штаммы ii i, выделенные при заболеваниях мочевыделительной системы БЭБ, , т. Т. В. Колганова, Т. Джарадат, А. В. Ермолаев, И. Г. Осипова, Е. А. Васильева, М. В. Далин, Р. Дж. Дойл. К вопросу о комплексном воздействии низкочастотного лазерного излучения и полифенолоксидазы на адгезивную способность штаммов ii i, выделенных при заболеваниях мочевыделительной системы у людей БЭБ, , т. Изучение адгезивной активности пробиотиков различных лекарственных форм, применяемых в гинекологической практике Т. В. Чумаева, И. Г. Осипова, Е. А. Васильева, Т. В. Колганова. О.В. Золотарева, С. Э. Саркисов сб. Биотехнология Москва, , , с. Объем и структура работы. Диссертация изложена на стр. Работа иллюстрирована рисунками и таблицами.