Исследование водорослей в симбиотической системе: Paramecium bursaria - Chlorella sp. - вирус PBCV : Сем. Phycodnaviridae

• Автор: Мигунова, Александра Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 123 с. : ил

Содержание
Введение

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Явление тройственного симбиоза в системе i i . V

1.1.1. Взаимоотношения инфузории с ее эндосимбионтом зоохлореллой.

1.1.1.1. Клеточная биология симбиоза растение животное

1.1.1.2. Периалы альные и пищеварительные вакуоли.

1.1.1.3. Инфицирование i i как индукционный процесс.

1.1.1.4. Регуляция численности внутриклеточных водорослей.

1.1.1.5. Метаболические взаимоотношения между симбионтами.

1.1.2. .
1.1.2.1. Сравнительная физиология, биохимия и таксономия
1.1.2.2. Видоспецифическая способность штаммов . формировать стабильный симбиоз
1.1.2.3. Описание зоохлорелл из i i.
1.1.2.4. Маркирование зоохлорелл
1.1.2.4.1. Ююновая изменчивость зоохлорелл
1.1.2.4.2. Механизмы действия ингибиторов роста на клетки зеленых водорослей и на другие эукариотические микроорганизмы.
1.1.2.4.3. Получение и описание множественномаркированных линий . и зоохлорелл
1.1.3. Явление вирусоносительства зоохлорелл в культурах гидр и инфузорий.
1.1.3.1. Вирусы РВСМтипа.
1.1.3.2. Место вируса в симбиозе i i . V
1.1.3.3. Экология вирусов из США, Китая и Европы
1.1.3.4. Физические и химические свойста вирусов V1 типа
1.1.3.5. Редуцирующие агенты и их влияние на V1.
1.1.3.6. Рецепторы вируса.
1.1.3.7. Рецепторы зоохлорелл.
1.2. Серологические методы
1.2.1. Серологические методы исследования симбиотических
ассоциаций
1.2.2. Основные серологические понятия
1.2.3. Иммунизация
1.2.3.1. Выбор лабораторных животных
1.2.3.2. Процесс иммунизации
1.2.4. Методы иммунного анализа.
1.2.4.1. Определение титра антигенов и антител методом
агглютинации
1.2.4.2. Иммунодиффузия в геле
1.2.4.3. Вестернблоттинг.
1.3. Полимеразная цепная реакция с универсальными праймерами УП
Глава II. Материал и методы исследования
И. 1. Объекты исследования
II. 1.1. Клоны инфузорий i i
И. 1.2. Штаммы ., эндосимбионты . i.
II. 1.3. Клоны вирусов зоохлорелл.
II. 1.4. Использованные антисыворотки.
II.2. Методы культивирования.
.2.1. Получение и поддержание коллекционных клонов инфузорий i i.
.2.2. Выделение и культивирование штаммов
П.2.3. Получение и сохранение вирусов.
.3. Проверка штаммов зоохлорелл на чувствительность к вирусам.
.4. Методы определения чувствительности членов тройного симбиоза к
температуре.
И.4.1. Определение влияния температуры на рост зоохлорелл.
И.4.2. Определение влияния температуры на размножения инфузорий
.4.3. Определение влияния температуры на репликацию вируса
II.5. Серологические методы.
.5.1. Иммунизация кроликов
.5.2. Получение сыворотки.
.5.3. Иммунизация кур.
.5.4. Получение сыворотки из желтков куриных яиц
.5.5. Определение титра сыворотки.
.5.6. Метод двойной диффузии по Оухтерлони
.5.7. Иммуноблогтинг
.6. Генотипирование коллекционных штаммов зоохлорелл с помощью полимеразной цепной реакции ПЦР.
.6.1. Выделение ДНК из клеток зоохлорелл
.6.2. Амплификация фрагментов ДНК с использованием полимеразной цепной реакции ПЦР с универсальными праймерами
.6.3. Электрофорез ДНК
.7. Статистическая обработка результатов
Глава III. Результаты исследований и обсуждение.
III. 1. Экотипы симбиотической системы i i .
V vii
III. 1.1. Экологическое распространение тройного симбиоза i i . V
1.1.2. Влияние температуры на рост и размножение членов тройного симбиоза в системе i i . V.
1.1.3. Возможности существования вируса V типа в природе вне клетки зоохлореллы
1.2. Серологическая характеристика зоохлорелл.
1.3. Генотипирование коллекционных штаммов методом амплификации фрагментов ДНК с использованием полимеразной цепной реакции ПЦР с
универсальными праймерами.
Заключение
Выводы
Список литера гуры
Приложение
Введение


Поэтому естественный отбор среди зоохлорелл должен работать в направлении образования клонов специализированных форм с очень устойчивыми сочетаниями признаков приспособления к клеткам хозяина. Вероятно, прародительская форма изучаемого нами симбиоза содержала единый тип симбионтов, но в результате дивергенции в процессе эволюции могли формироваться разные формы зоохлорелл, отличающиеся по экологическим показателям например, температурная зависимость, что оказалось важным для расширения ареала обитания. Изучение симбиотической системы i i . V важно по ряду причин. Вопервых, слабо исследованы свойства симбиотических хлорелл генетика, физиология, серология и принципы географического распространения изучаемой симбиотической системы. Их анализ может расширить существующие представления о биологическом разнообразии и географическом распространении водорослей рода . Для этого необходимо было создание коллекции зоохлорелл. Вовторых, такая коллекция могла бы быть использована для проведения работ по проверке трансдуцирующей способности вируса, а также для работы по получению искусственных симбиотических ассоциаций, по реконструкции симбиотических отношений, и в других работах, связанных с изучением тройного симбиоза. Втретьих, предметом нашего исследования является сложная иерархическая высокоспецифичная система. Для существования в природе вируса необходимо предварительное развитие симбиотических зоохлорелл, стабильно существующих в природе лишь в симбиозе с инфузорией. Это предполагает необходимость в наличии стабильных экологических условий для существования системы в целом. А это позволяет использовать симбиотическую систему, а точнее, вирус как индикатор чистоты водоемов Квитко и др. Изучение системы тройного симбиоза i i V ведется нами с года. Данная работа является продолжением дипломной работы, в ходе которой были показаны четкие различия между зоохлореллами чувствительными к вирусам симбионтами Р. УФоблучению, к антибиотикам и ингибиторам роста, а также была получена коллекция множественномаркированных шгаммои зоохлорелл Чернышева, . Целью настоящей работы является изучение закономерностей географического распространения зоохлорелл компонентов системы i i . V и уточнение их систематического положения. Vтипа в коллекционных клонах инфузории и в природных пробах воды для определения географических раниц распространения изучаемого симбиоза, а также пополнение коллекции вирусов, зоохлорелл и инфузорий i i. Глава I. Явление тройного симбиоза в системе i i . Симбиозы между растениями и животными исследуются более века. Современный интерес к симбиозам определяется и популярностью теории симбиогенеза происхождения организмов путем комбинации или соединения двух или многих существ, вступающих в симбиоз. Этот термин был введен ботаником К. С. Мережковским, который в году предположил, что клеточные органеллы образовались путем внутриклеточного симбиоза. Симбиоз сосуществование клеток и тканей организмов принадлежащих к разным таксонам, которые согласованно размножаются, в результате чего появляется единый, стабильный симбиотический организм. Эта ситуация отличается от паразитических и других патологических ассоциаций, когда взаимодействие между генетически различными клетками приводит к нарушению равновесия в пользу одного организма. Симбионт находится во внутриклеточной среде, определяемой геномом хозяина. Для предотвращения отторжения симбионт должен обладать механизмом препятствующим восприятию его хозяином как чужеродного организма. Оба члена симбиоза должны адаптировать свои физиологические функции взаимовыгодным образом. Растительноживотные симбиозы широко распространены. Функции хозяина могут осуществлять животные от до , а в роли симбионтов обычно выступают фотосинтезирующие организмы цианобактерии, зеленые водоросли, диатомовые, динофлагелляты , . Известны симбиозы эукариотических водорослей с моллюсками, плоскими червями, кишечнополостными, простейшими и грибами лишайники. Зоохлореллы чаще других водорослей встречаются в симбиозах. Рис. Сотни симбиотических зеленых водорослей зоохлорелл в индивидуальных периальгальных вакуолях заполняют клетку инфузории i i. Фотография К. В. Квитко. Увеличение х .