Выявление циркуляции Yersinia pseudotuberculosis среди сельскохозяйственных животных в Саратовской области и создание диагностических препаратов на основе мембранных белков

• Автор: Иващенко, Сергей Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 157 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространение псевдотуберкулезной инфекции среди

людей и сельскохозяйственных животных.

1.2. Факторы патогенности псевдотуберкулезного микроба .

1.3. Вирулентность псевдотуберкулезного микроба.

1.4. Чувствительность псевдотуберкулезного микроба к

антибактериальным препаратам

1.5. Бактериологический метод диагностики псевдотуберкулеза .

1.6. Иммунологические и генетические методы диагностики
псевдотуберкулеза.
1.7. Антигенные свойства белков псевдотуберкулезного
микроба.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы
2.1.1. Бактериальные штаммы.
2.1.2. Экспериментальные животные.
2.1.3. Оборудование.
2.1.4. Химические реактивы
2.1.5. Растворы.
2.1.6. Питательные среды
2.1.7. Диагностические препараты
2.2. Методы исследований
2.2.1. Бактериологический метод диагностики.
2.2.2. Иммунологические методы диагностики
2.2.3. Методы определения биохимических свойств псевдотуберкулезного микроба, его подвижности и способности к гемолизу.
2.2.4. Методы определения вирулентности выделенных культур ii i
2.2.5. Метод определения чувствительности ii i к антибактериальным препаратам .
2.2.6. Использование пектинов для изучения поверхностных углеводов ii i .
2.2.7. Электрофорез
2.2.8. Способ получения формалинизированных эритроцитов животных.
2.2.9. Способ выделения мембранных белков псевдотуберкулезного микроба.
2.2 Способ получения танизированных эритроцитов животных.
2.2 Создание эритроцитарного псевдотуберкулезного антигенного диагностикума на основе мембранных белков
2.2 Получение гипериммунных сывороток к мембранным белкам псевдотуберкулезного микроба
2.2 Выделение фракции иммуноглобулинов из сывороток крови иммунных животных
2.2 Способ адсорбции неспецифических иммуноглобулинов
2.2 Способ получения люминесцирующих псевдотуберкулезных иммуноглобулинов.
2.2 Статистические методы обработки результатов экспериментов
2.3. Результаты исследований
2.3.1. Бактериологическое исследование.
2.3.2. Серотипирование выделенных культур ii
i
2.3.3. Изучение подвижности, культуральных и
биохимических свойств выделенных культур ii i.
2.3.4. Определение патогенности выделенных культур
ii i.
2.3.5. Определение антибиотикочувсгвительности
выделенных культур псевдотуберкулезного микроба.
2.3.6. Изучение углеводов клеточной стенки ii
i при помощи лектинов
2.3.7. Изучение белкового спектра выделенных
культур ii i
2.3.8. Изучение чувствительности и специфичности экспериментального эритроцитарного псевдотуберкулезного антигенного диагностикума на
основе мембранных белков
2.3.9. Испытание экспериментального эритроци
тарного псевдотуберкулезного антигенного диагностикума.
2.3 Получение гипериммунных сывороток к
препарату мембранных белков ii
i
2.3 Изучение чувствительности и специфичности
иммуноглобулинов люминесцирующих псевдотуберкулезных к мембранным белкам.
2.3 Испытание иммуноглобулинов люминесци
рующих псевдотуберкулезных к мембранным
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК ИС1ЮЛЬЗОВА 1НОЙ
ЛИТЕРАТУРЫ.
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
БВМ белки внешней мембраны
ДИА ДОТиммуноанализ
ЗПВ забуфсрная псптониая вода
ИФА иммуноферментный анализ
КББ карбонатнобикарбонатный буфер
Кз коллоидное золото
КзЛИ конъюгат лектина бацилл с коллоидным золотом
ЛИ конъюгат лектина бацилл
ЛГ1С липополисахарид
м. к. микробные клетки
МПА мясопептонный агар
МПБ мясонеитонный бульон
МФА метод флуоресцирующих антител
ПААГ полиакриламидный гель
ПЖА полужидкий мясопептонный агар
ПЛПС протеи нол ипополисахарид
ПЦР полимеразная цепная реакция
РБЛ реакция бактериального лизиса
РДП реакция диффузной преципитации
РКА реакция коагглютинации
РИГА реакция непрямой гемагглютинации
РСК реакция связывания комплемента
РТНГА реакция торможения непрямой гемагглютинации
ТИФА твердофазный иммуноферментный анализ
ФБР фосфатнобуферный раствор
ФИТЦ флуоресцеинизотиоционат
I i i
I иммуноглобулины
фосфатно солевой буфер
плазмида кальцийзависимости
ii i
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Основные положения работы доложены и обсуждены на научных конференциях профессорскопреподавательского состава и аспирантов СГАУ им. И.Вавилова по итогам научноисследовательской и учебнометодической работы за и гг. Экологические аспекты эпизоотологии и патологии животных Воронеж, г. Современные проблемы науки в АПК Пенза, г. Московской ветеринарной академии Москва, г. Международной научной студенческой конференции Студент и научнотехнический прогресс Новосибирск, г. Инфекции, обусловленные иерсиниями иерсиниоз, псевдотуберкулез, и другие актуальные инфекции С. Публикации. Основные положения диссертации изложены в 6 научных работах и 2 методических рекомендациях. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, грех разделов, заключения, выводов и библиографического списка использованной литературы. Диссертационная работа содержит 7 страниц машинописного текста, 8 рисунков, таблиц и библиографический список литературы из 7 наименований. Псевдотуберкулез широко распространенное в Российской Федерации заболевание. Особенно благоприятен для развития псевдотуберкулезного микроба климат северных регионов России Сибири, Урала, Дальнего Востока и СанктПетербурга1,2,3 Сомов Г. П. и др. Дзюбак В. Ф. и др. Завьялов М. В. и др. Климов В. Т. и др. Количество болеющих исевдотуберкулезом в России составляет в среднем человек на 0 тысяч населения. При этом заболеваемость среди детей от 3 до лет в раза выше, чем среди взрослых Ющенко Г. В., . Имеются также сообщения о случаях заболевания псевдотуберкулезом людей из Ближнего Белоруссии, Украины, Казахстана, Армении, Киргизии, Грузии, Молдовы и др. Асаналиев И. И. и др. Нерсесов В. А. и др. Евтодиенко В. Г. и др. Дальнего 1 Зарубежья ДеПои Г. Щ а. Уакопеп М. Коо ТУ. Макто Б. В последнее время сложилось устойчивое мнение о повсеместном распространении псевдотуберкулезной инфекции. Эго подтверждается способностью псевдотуберкулезного микроба сохраняться и активно размножаться в почве, пресной воде, пресноводных, морских организмах и особенно на пищевых продуктах, в частности овощах и корнеплодах, которые представляют серьезную опасность для здоровья человека Сомов Г. П. и др. Ющенко Г. В., Тимченко . Ф. и др. Пушкарева В. И. и др. Инфекции, обусловленные иерсиииями иерсиниоз, псевдотуберкулез, и лр. Матер, междунар. С.Петерб. НИИЭМ им. Пастера. С.Пб. Иерсиниозы микробиол. Тез. Всесоюзн. НИИЭМ СО РАУГН Владивосток, . Дальневосточная скарлатинообразная лихорадка псевдотуберкулез человека Под ред. Г.П. Сомова Владивосток, . Заражение людей возбудителем псевдотуберкулеза чаще всего происходит при употреблении в пищу инфицированных продуктов при дозе заражения не менее 9x8 м. Кузнецов В. Г., . В средних широтах такая величина микробной массы достигается при хранении овощной продукции на овощехранилищах в течение зимневесеннего периода Сомов Г. П. и др. Ющенко Г. В., . В основном микробное загрязнение овощей и корнеплодов происходит в период их выращивания на полях и огородах, при непосредственном контакте с почвой Кузнецов В. Г., и, в меньшей степени, в период хранения в овощехранилищах, где их обсеменению способствуют переболевшие псевдотуберкулезом синантропные грызуны серые крысы и мыши Сомов Г. П., . Относительно низкая высеваемость псевдотуберкулезного микроба от диких грызунов Сомов Г. П. и др. Кузнецов В. Г., , а также редкие сообщения о высоких титрах специфических псевдотуберкулезных антител у синантропных, диких птиц Мотеюиас Л. И. и др. Савицкий Б и др. Кусенков А. Н., и представителей охотничьей фауны Мотсюнас Л. И. и др. Определяющим для распространения микроба на овощных полях является ежегодное поступление на них огромного количества органических веществ с животноводческих комплексов и птицефабрик Ющенко Г. В., . Публикации о распространении псевдотуберкулеза среди сельскохозяйственных животных и птицы в России и за ее пределами немногочисленны. Имеются лишь отдельные сообщения о выделении возбудителя от крупного рогатого скота Хакимов I I и др. Тихонов В. К., . Барков и др. Барков и др.