Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Klebsiella, конструирование на их основе биопрепарата

• Автор: Бульканова, Елена Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Ульяновск
• Количество страниц: 162 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Характеристика бактерий рода i

1.2. Патогенность.

1.3. Резервуар и распространение инфекции.

1.4. Устойчивость к физикохимическим факторам

1.5. Лабораторная идентификация клебсиелл.

1.6. Бактериофаги и их применение в лабораторной практике.

1.6.1. Взаимодействие бактериофагов с клеткойхозяином

1.6.2. Фагоидентификация бактерий и фаготипирование.

1.6.3. Реакция нарастания титра фага РНФ
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы и методы исследований
2.1.1. Материалы
2.1.2. Методы.
2.2. Результаты исследований
2.2.1. Выделение бактерий рода i из объектов
ветеринарного надзора и патологического материала
2.2.2. Поиск бактериофагов клебсиелл и селекция клонов фагов
2.2.3. Характеристика фагов бактерий рода i
2.3. Разработка технологических параметров изготовления и
контроля индикаторных фагов клебсиелл
2.4. Разработка схемы ускоренной идентификации бактерий
рода i
2.5. Разработка оптимальных условий постановки реакции
нарастания титра фага.
2.5.1. Определение количественного показателя РНФ, имеющего
диагностическое значение
2.5.2. Установление оптимального времени, обеспечивающего наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями
2.5.3. Разработка схемы постановки РНФ для индикации бактерий
рода. i в объектах ветеринарного надзора
2.5.3.1. Исследование водопроводной воды, контаминированной бактериями рода i с помощью РНФ
2.5.3.2. Исследование комбикорма, контаминированного бактериями рода i с помощью РНФ
2.5.3.3. Исследование проб фекалий, контаминированных бактериями рода i с помощью РНФ
2.5.3.4. Исследование мяса, контаминированного бактериями рода i с помощью РНФ
2.5.3.5. Исследование фекалий больных диареей телят на присутствие бактерий i . с использованием РНФ.
2.6. Изучение эффективности сконструированного фагового
биопрепарата.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ.
Список условных сокращений
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
МПА мясопептонный агар
МПБ мясопептонный бульон
ОКИ острые кишечные инфекции
РНФ реакция нарастания титра фага
ЦНС центральная нервная система
м.к.мл количество микробных клеток в 1 мл
МППБ мясопептонный печеночный бульон
ИФА иммунофсрментный анализ
РИА радиоиммунологический анализ
ПЦР полимеразная цепная реакция
ДДС дифференциальнодиагностические среды
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Все виды клебсиелл хорошо растут на простых мясных средах в широком диапазоне температур от 4 до С, оптимальная температура С при 7,2. Непременной особенностью клебсиелл считают пышный рост и образование на плотных питательных средах больших, выпуклых, частично сливающихся колоний слизистой консистенции. На агаре Эндо образуют часто красные и розовые колонии с металлическим блеском или без него, на агаре Плоскирева, в зависимости от степени ферментации лактозы, образуют красные, розовые или бесцветные колонии, на среде Левина темносиние с металлическим блеском колонии. Кроме слизистых колоний, некоторые авторы отмечают наличие у клебсиелл гладких колоний, состоящих из бескапсульных бактерий, рассматривая их как формы, и указывают на существования форм с маленькими конусообразными колониями и неравномерно складчатой поверхностью i, . мукоидныя, капсульныя, без Оантигена немукоидные, капсульная, без Оантигена мукоидная, бескапсульная, без Оантигена немукоидная, бескапсульная, без Оантигена. Известны случаи образования форм клебсиелл под воздействием неблагоприятных факторов внешней среды, например, некоторых антибиотиков, блокирующих синтез клеточной стенки бактерий , . В жидких средах рост капсульных вариантов сопровождается равномерным помутнением, слизистым осадком и пленкой на поверхности бульона. Бескапсульные формы бактерий образуют гранулированный осадок с чистой и незамутненной надосадочной жидкостью. Культивирование бактерий на МПБ приводит к образованию пристеночного кольца. У фимбриеобразующих штаммов в течение нескольких дней на поверхности МПБ образуется поверхностная пленка. В опытах с культурами клебсиелл были испытаны синтетические питательные среды для культивирования и идентификации энтеробактерий. Отмечаются их преимущества перед традиционными средами, которые имеют простой химический состав, стабильны при длительном хранении, а также не требуется проводить пересева на другие среды для идентификации выделенных культур бактерий Фафонова, . По ферментативным свойствам клебсиеллы являются активными представителями энтеробактерий и утилизируют многие субстраты. Были обозначены ферментативные характеристики и составлен перечень тестов для дифференциации К. К. x. Наиболее характерные признаки представлены в таблице 1. Тест или субстрат К. К. i К. Примечание кислотообразование газообразование при С. Основным дифференциальным признаком является то, что клебсиеллы используют цитраты в качестве единственного источника углерода. Ферментируют большое число углеводов с выделением газов, в том числе лактозу, глюкозу, сахарозу. В тестах с индолом, с метиловым красным, в реакции ФогесаПроскауэра, а также способности расти на среде Симонса с цитратом, отмечены различные вариации. По лизиндекарбоксилазе положительные, по орнитиндекарбоксилазе отрицательные. Некоторые виды гидролизуют мочевину. Растут на средах с цианистыми солями. Протеолитическая активность клебсиелл выражена в слабой степени не образуют сероводород и индол за исключением К. С, а также используют гидроксил бензойную кислоту в качестве единственного источника углерода. Существуют трудности отличия штаммов . , которые очень медленно разжижают желатину. Решающее значение в этих случаях может иметь тест на уреазу бактерии . Основные тесты для дифференциации близких по ферментативной характеристике энтеробактерий от клсбсиелл представлены в таблице 2. Таблица 2. Основные признаки дифференциации . Тест или субстрат . . x . К. гЫпозс1егота значительно отличается от остальных представителей клебсиелл низкой ферментативной активностью и имеет определенное сходство с шигеллами. Для их отличия существует ряд тестов табл. Существенные признаки отличия это отсутствие ферментации салицина, адонита, инозита, эскулина. Однозначные результаты дают также тесты на цитрат Кристенсена, ацетат реакция шигелл отрицательная и проба со специфическим шигеллезным бактериофагом Хоменко, Киселева, орек, .