Взаимодействие цитокина ФНО с некультивируемыми и вегетативными формами сальмонелл

• Автор: Томова, Александра Сашова
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : 6 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список принятых сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1. Некультивируемые формы патогенных бактерии.

2. Рекультивация некультивируемых форм патогенных

бактерии в вегетативные форм

3. Бактерии, цитокины, инфекционный процесс.

3.1. Влияние цитокинов на скорость

бактериального роста

4. Общие аспекты биологии и истории ФНОа.

4.1. Роль цитокина ФНОа во взаимодействии
макро и микроорганизма
Глава II. Материалы и методы.
1. Среды, штаммы бактерии.
2. Лабораторная модель индукции
некультивируемого состояния НС БлурИипипит.
3. Биологическая модель инфекционного процесса
4. уоблучение лабораторных животных
5. Выделение РНК из клеток.
5.1. Выделение суммарной РНК из культуры
клеток селезенок лабораторных мышей
5.2. Выделение РНК суспензии клеток сальмонелл.
5.3. Очистка РНК от ДНК
5.4. Получение кДНК гена ФИО.
5.5. ПЦР.
5.6. Электрофорез в агарозном геле.
6. Количественное определение ФИО на линии
чувствительных клеток Ь9.
7. Иммобилизация ФНО на ЭСА агарозе.
8. Фиигерпринтирование к ДНК по РНК
9. Протеомный анализ
ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЦИТОКИНА ФИО С НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫМИ И ВЕГЕТАТИВНЫМИ
ФОРМАМИ САЛЬМОНЕЛЛ.о ТОМОВА .. о ДИССЕРТАЦИЯ.
. Связывание сальмонеллы с рекомбинантным
белком ФНОспсйсерЦСД, иммобилизированном на целлюлозе.
Глава III. Результаты и обсуждение.
1. Взаимодействия ФНО с НФ . ii
i vi и i viv.
2. Взаимодействие ФНО с ВФ . ii i vi
3. Взаимодействие ФНО с ВФ .ii
I viv
4. Динамика размножения бактерий в органах инфицированных животных при
повышенной продукции.
5. Исключение посреднической роли
эукариотических рецепторов при взаимодействии
ФНО с клетками сальмонелл i viv
6. Доказательство прямого связывания ФНО
с бактериальной клеткой i vi
с помощью иммобилизации ФНО
7. Экспрессия бактериальных генов при добавлении
ФНО в среду инкубации клеток.
8. Экспрессии белков при добавлении ФНО
вереду роста бактерий
9. Доказательство прямого связывания сальмонелл с рекомбинантным белком ФНОспейсерЦСД, иммобилизированном на целлюлозе и идентификация бактериального
белка, участвующего в этом взаимодействии.
Заключение.
Выводы.
Благодарности
Список литературы


Бактерии тоже выработали механизмы защиты или избегания действия факторов хозяина НС, споры, антигенная мимикрия, формы, экранирование клеточной стенки бактерии, продукция факторов, инактивирующих защиту хозяина. Повидимому, эволюционная адаптация привела к тому, что бактерии для собственного выживания способны регулировать продукцию определенных факторов защиты хозяина или даже использовать некоторые из них, например, цитокины, для собственной выгоды. Многие бактерии синтезируют молекулы, способные подавлять продукцию цитокинов клетками хозяина холерный токсин, токсин i. Цитокины чувствительны к деградации бактериальными иротеазами. Незадолго до начала нашей работы стали появляться данные о том, что некоторые микроорганизмы могут напрямую использовать определенные цитокины как ростовые факторы i М. Так, например, было установлено, что добавление ИЛ в культуральную среду усиливает скорость роста клеток ii i. Оказалось, что ИЛ2, ИЛ3 и ГМКСФ являются ростовыми факторами для ii . Рекомбинантный ИЛ6 рИЛ6 увеличивает рост i vi. Трансформирующий ростовой фактор и ФНО стимулируют рост i i в макрофагах и моноцитах человека. В связи с этим встал вопрос, как такие факторы иммунной системы организма, как цигокны, могут активизировать жизнедеятельность патогенных бактерии Влияют ли цитокины на бактерии в НС ФОРМАМИ САЛЬМОНЕЛЛ, о ТОМОВА . . о ДИССЕРТАЦИЯ, о ВВЕДЕНИЕ. НС в ВС и способна вызывать инфекционный процесс .ii, связанных с действием цитокина ФНО i vi и i viv. ФНО на рекультивацию НФ и на размножение бактериальных клеток i vi. ФНО на рекультивацию НФ и на размножение бактериальных клеток i viv. ФНО с клетками сальмонелл i viv. ФНО на уровень экспрессии бактериальных генов i vi. ФНО на продукцию белков в клетках сальмонелл при добавлении цитокина ФНО в среду инкубации. Выявить механизм взаимодействия цитокина ФНО с бактериальной клеткой i vi. ФОРМАМИ САЛЬМОНЕЛЛ, о ТОМОВА . . о ДИССЕРТАЦИЯ, о ВВЕДЕНИЕ. Научная новизна. Впервые показана способность бактерий . ФНО в процессе своей жизнедеятельности. Впервые показан феномен рекультивации некультивируемых форм . ФНО в среду роста или при заражении лабораторных животных соответственно. Установлено увеличение количества микробных клеток в органах инфицированных животных при повышенном содержании цитокина ФНО, как вследствие его экзогенного добавления, так и при индукции его повышенного синтеза в организме мышей при облучении. Установлена повышенная экспрессия определенных бактериальных генов . ФНО i vi, связанных с транскрипцией, метаболизмом бактерий, с регуляторным механизмом i и синтезом мембранных белков. При сравнительном протеомном анализе показана дифференциальная продукция белков при инкубации культуры клеток . ФНО i vi. При помощи генетической конструкции, содержащей ген ФИО, доказано прямое взаимодействие цитокина ФНО с бактериальными клетками . . ФОРМАМИ САЛЬМОНЕЛЛ. ТОМОВА А. С. о ДИССЕРТАЦИЯ, о ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Микробиологам давно было известно, что количество бактерий, высевающихся на чашки из образцов, взятых из естественных источников, значительно ниже того, что можно определить прямым микроскопическим анализом. В конце х годов было разработано несколько методов, позволяющих определять количество жизнеспособных клеток в популяции бактерий без их культивирования на питательных средах. Эти методы позволили количественно подтвердить несоответствие в разных способах оценки титра бактерий и продемонстрировать, что многие из таких некультивирумых клеток в действительности являются живыми и способными к активному метаболизму Романова Ю. М., К. i . Окружающая среда, в которой могут существовать многие патогенные бактерии вне организма хозяина, может сильно ограничивать рост клеток. Это бывает связано с неоптимальными для размножения бактерий физикохимическими характеристиками температурой, , осмотическим давлением, концентрацией ионов металла, а также с низкой концентрацией питательных веществ, необходимых для синтеза органических веществ клетки.