Бруцеллезные бактериофаги. Оптимизация технологии производства и способов применения в лабораторной диагностике бруцеллеза

• Автор: Ляпустина, Лариса Вениаминовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 212 с.

ВВЕДЕНИЕ .

Глава 1 Характеристика бактериофагов, используемых для бактериоло

гической диагностики особо опасных зоонозных инфекций обзор литературы

1.1 Чумные диагностические бактериофаги

1.2 Сибиреязвенные диагностические бактериофаги

1.3 Бруцеллезные диагностические бактериофаги

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2 Материалы и методы исследования

Глава 3 Характеристика своцртв штаммов бруцеллезных бактериофагов,

используемых для лабораторной диагностики бруцеллеза Глава 4 Экспериментальное получение бруцеллезных бактериофагов с

новым спектром литической активности

4.1 Определение оптимальных условий воздействия мутагенов на бру целлезные бактериофаги
4.2 Изменение спектра литичсского действия бруцеллезных бактериофа гов под влиянием химических мутагенов
4.2.1 Характеристика свойств мутантных линий бруцеллезных бакте
риофагов
4.2.2 Свойства мутантных линий бруцеллезных фагов при длительном хранении
4.3 Использование химических мутагенов для получения Ябруцеллез
ных бактериофагов
Глава 5 Изучение структуры ДНК бруцеллезных бактериофагов
5.1. Выделение ДНК бруцеллезных бактериофагов
5.2. Рестрикционный анализ ДНК бактериофагов бруцелл
Стр.
Глава 6 Разработка технологических схем экспериментальнопроизвод ственного получения бактериофагов диагностических бруцеллезных жидких
6.1 Экспериментальное обоснование выбора питательных сред для раз множения бактериофагов
6.2 Изучение возможности использования синтетической питательной среды для размножения бактериофагов
6.3 Экспериментальное обоснование выбора метода размножения бакте риофагов
6.4 Экспериментальное обоснование выбора штаммов размножения бак териофагов
6.4.1 Одиночный цикл размножения бруцеллезных бактериофагов
6.4.2 Изучение возможности использования вакцинных штаммов бру целл для репродукции бактериофагов
6.5 Подбор консервантов, препятствующих микробной контаминации препаратов бруцеллезных бактериофагов
6.6 Стандартизация свойств экспериментальнопроизводственных серий бруцеллезных диагностических бактериофагов
6.7 Определение условий хранения и сроков годности жидких форм пре 2 паратов бруцеллезных диагностических бактериофагов
Глава 7 Оптимизация технологии репродукции бруцеллезных бакте 1 риофагов
7.1 Оптимизация условий размножения бруцеллезных бактериофагов Тб,
7.2 Оптимизации условий репродукции бруцеллезного бактериофага 9 Вк
Глава 8 Разработка оптимальных условий стабилизации бруцеллезных 3 диагностических бактериофагов
8.1 Подбор криопротекторов для проведения лиофильного высушивания
Стр.
бруцеллезных бактериофагов
8.2 Потеря в массе при высушивании в лиофилизированных препаратах 0 бруцеллезных бактериофагов
8.3 Оценка возможности использования различных режимов лиофилиза 2 ции для стабилизации свойств бруцеллезных бактериофагов
8.4 Определение оптимальной концентрации консерванта для получения 1 лиофилизированных форм бруцеллезных бактериофагов
8.5 Жизнеспособность бруцеллезных фагов в сухих препаратах при хра 2 нении в различных температурных режимах
8.6 Специфическая активность и специфичность сухих препаратов бру 4 целлезных диагностических бактериофагов
Глава 9 Разработка ускоренных методических приемов и новых спосо 7 бов идентификации и дифференциации бактерий рода с использованием бактериофагов
9.1 Совершенствование методики постановки пробы с бактериофагами 8 путем использования бумажных носителей
9.1.1 Получение препаратов бруцеллезных бактериофагов на бумажных 8 дисках
9.1.2 Апробация фаговых препаратов на дисках для определения фаго 4 чувствительности штаммов бруцелл
9.2 Получение градиентных препаратов бруцеллезных бактериофагов на 5 бумажном носителе
9.2.1 Способ количественной и качественной оценки чувствительности 7 штаммов бруцелл к действию бруцеллезных бактериофагов
9.3 Влияние различных условий хранения на активность фаговых препа 9 ратов на бумажных носителях
9.4 Разработка способа постановки пробы с бактериофагом для межви 1 довой дифференциации штаммов возбудителя бруцеллеза
Стр.
9.5 Разработка теста ускоренной дифференциации бруцелл эпидемиче 5 ски значимых видов с использованием бактериофагов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


Материалам диссертации были представлены на областной научной конференции молодых ученых РостовнаДону, на рабочем совещании Проблемы и перспективы развития диагностики бактериальных инфекций Оболенск, на межгосударственной научнопрофилактической конференции Актуальные вопросы профилактики чумы и других инфекционных заболеваний, посвященной 0летию открытия возбудителя чумы Ставрополь, на научнопрактической конференции Эпидемиологические аспекты краевой патологии Ставрополья Ставрополь, на научнопрактической конференции лет противочумной службы Кавказа Ставрополь, на научнопрактической конференции, посвященной 0летию образования противочумной службы России Саратов, на V и VI итоговых научных конференциях молодых ученых и студентов Ставрополь, , на второй международной конференций, посвященной летию института им. Современный эпидемический потенциал природных очагов чумы, посвященной летию суверенитета Республики Казахстан и летию Талдыкорганской противочумной станции Талдыкорган, на юбилейной научнопрактической конференции Эпидемиологическая безопасность на Кавказе. Итоги и перспективы, посвященной летию Ставропольского научноисследовательского противочумного института Ставрополь, . Публикации. Основные результаты диссертации изложено в опубликованных работах, из них в журналах рекомендуемых ВАК Российской Федерации для публикации основных научных результатов докторских диссертаций 6, патентов
Структура диссертации. Диссертация изложена на 2 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, восьми глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 2 источника на русском языке и на иностранных языках. Материалы исследований иллюстрированы таблицами и рисунками. В истории микробиологии исследование феномена бактериофагии занимает особое место. Простота культивирования, короткий период генерации, высокий выход потомства и возможность точного количественного учета способствовали успешному изучению как структуры фаговых частиц, так и их применению для проведения генетических исследований. Использование химиотерапевтических препаратов и антибиотиков, появление антибиотикорезистентных форм микроорганизмов обусловило интерес к
применению препаратов бактериофагов в профилактических и лечебных целях. Наиболее широкое применение бактериофаги получили в бактериологической диагностике бактериальных инфекций, при проведении идентификации и дифференциации выделяемых штаммов микроорганизмов, а в ряде случаев для их индикации в объектах окружающей среды Гольдфарб Д. М., Габрилович И. М., Адамс М. В настоящее время в практике эпидемиологического обследования широко используется фаготипирование, основанное на специфическом фаголизе бактерий. Этот подход позволяет распознавать подлинный источник инфекции и дает возможность проследить иногда очень сложный путь возбудителя от источникадо восприимчивого организма Габрилович И. М., . Изучение бактериофагов возбудителей зоонозных особо опасных инфекционных заболеваний проводились параллельно с изучением самих микроорганизмов и послужило основой для их типирования в зависимости от чувствительности к тем или иным бактериофагам, а также обеспечивало возможность проведения более быстрой идентификации и дифференциации выделяемых штаммов микроорганизмов. Первые штаммы чумного бактериофага были выделены дЭреллем из экскрементов крыс, пойманных в очагах чумы Южного Вьетнама, в г. В нашей стране впервые чумной бактериофаг был изолирован Покровской М. П. при изучении штаммов чумного микроба, выделенных от сусликов на Северном Кавказе. В г. Р. из сточных вод города Лейдена выделил фаг, который оказывал литическое действие на штаммы чумного, дизентерийного и кишечного микробов. Во время спорадических случаев чумы в Париже многолетние исследования почвы, сточных вод реки Сены по выделению чумных бактериофагов . А. Ле дали положительных результатов. И только через несколько лет был получен бактериофаг из крови крысы, выловленной в канализационных коллекторах города. Фаг лизировал бульонную культуру чумного микроба в течение ч. При эпидемии чумы в Дакаре v . X.i, очесанных с крыс во время эпидемии чумы. Марьина Ю. Н. в Ростовской области изолировала чумной бактериофаг из органов сусликов, павших от чумы. От зараженных чумой сурков, находящихся в глубокой спячке, Гайский получил несколько штаммов чумных фагов. Черкасова К. И. , Бибикова А. Д. сообщали о поражении бактериофагом некоторых культур чумного микроба, выделенных в полевых условиях.