Гемагглютинирующие свойства хантавирусов и получение специфического диагностикума

• Автор: Кушнарева, Татьяна Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 146 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Антигенная и молекулярногенетическая характеристика

хантавирусов.

Глава 2. Современные методы лабораторной днаг ностики

хантавирусных инфекций.

Глава 3. Классические серологические реакции в изучении

хантавирусов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 4. Материалы и методы

4.1. Штаммы хантавирусов, используемые в работе.
4.2. Сыворотки крови, используемые в работе.
4.3. Источники и методы получения гемагглютинирующих антигенов
4.4.Методы, используемые при исследовании антигенов и антител.
4.5. Статистическая обработка результатов исследования
Глава 5. Изучение гемагглютинирующих свойств хантавирусов, циркулирующих на юге Дальнего Востока России.
5.1. Условия выявления гемагглютининов у штаммов хантавирусов.
5.2. Факторы, влияющие на гемагглютинирующие свойства хантавирусов
5.3. Некоторые свойства гемагглютининов штаммов хантавирусов
Глава 6. Способ получения высокоактивных гемагглютинирующих антигенов хантавирусов.
6.1. Процедура получения гемагглютинирующих антигенов вирусов Хантаан, Сеул и Пуумала.
6.2. Сравнительное изучение специфической активности антигенов вируса Хантаан, полученных из разных источников и разными методами.
6.3. Оценка функциональной активности штаммов вируса Хантаан
возбудителя заболевания ГЛПС в Приморском крае.
Глава 7. Диагностические возможности РТГА
при хантавирусной инфекции
7.1. Использование функциональноактивных штаммов хантавирусов для повышения диагностической эффективности РТГА при ГЛПС.
7.2. Изучение динамики формирования антигемагглютининов у больных ГЛГ1С с разной тяжестью заболевания.
7.3. Использование РТГА для дифференциальной диагностики ПН 1, обусловленной вирусами Хантаан и Сеул.
7.4. Изучение антигенных взаимосвязей штаммов хантавирусов
с помощью кинетической РТГА
Заключение.
Выводы.
Литературный указатель.
Список основных сокращений
ГЛ геморрагическая лихорадка с почечным синдромом
ХПС хантавирусный пульмональный синдром
вирус Хантаан
вирус Сеул
вирус Пуумала
МФА непрямой метод флюоресцирующих антител
ИФА иммуноферментный анализ
РГА реакция гемагглютинации
I А реакция торможения гемагглютинации
КРТГА кинетическая реакция торможения гемагглютинации
ИАГА иммунная адгезия гемагглютинации
реакция нейтрализации
ГА гемагглютинины
АЕ активная единица антигена
штамм функциональноактивный штамм
штамм низкофункциональный штамм
С ГГ средняя геометрическая титров антител
I иммуноглобулины класса М
I иммуноглобулины класса
ПЭГ полиэтиленгликоль
ПМ полевая мышь
ВАМ восточноазиатская мышь
КП красная полевка
КСП красносерая полевка
ДВ дальневосточная полевка
РП рыжая полевка
СК серая крыса
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Долгое время многочисленные попытки изолировать этиологический агент ГЛПС как в России, так и зарубежом заканчивались безрезультатно в связи с отсутствием адекватных методов индикации возбудителя i viv и i vi. Н. . с соавторами первому удалось обнаружить с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции МФА специфический антиген возбудителя ГЛПС при обработке криостатных срезов легочной ткани полевой мыши сыворотками крови от людей, перенесших ГЛ. Позже от полевой мыши был выделен штамм вируса, который по названию места отлова был назван вирусом Хантаан 8 и как нрототипный штамм зарегистрирован в международном каталоге арбовирусов. Работы корейских исследователей явились отправным моментом при разработке методов изоляции штаммов хантавирусов и изучения их свойств, а также чувствительных и специфичных методов серодиагностики инфекции ГЛПС. В году С. . с соавторами сообщил об успешной адаптации вируса Хантаан к клеткам А9 тип II, альвеолярные эпителиальные клетки карциномы легкого человека. Однако, в связи с длительным процессом репликации максимальное накопление при низкой множественности дней и низкими показателями накопления вируса ЮМО6 БОЕмл исследователи были вынуждены продолжать поиск более подходящей системы. Чувствительной биологической системой, по сообщениям . В. i с соавторами и С. . с соавторами , оказалась перевиваемая культура клеток почек африканских мартышек V клон Е6, поскольку хантавирусы накапливались в ней быстрее и в более высоких титрах, достаточных для изучения антигенной структуры штаммов хантавирусов и проведения молекулярно генети ческих исследований. Морфологическое сходство между хантавирусами и отдельными представителями семейства буньявирусов было показано . В. i с соавторами , . . i с соавторами и Т. с соавторами . Однако, в отличие от других буньявирусов хантавирусы, согласно данным М. . i с соавторами , обладают выраженным полиморфизмом, с округлой или овальной формой морфологических структур. Характерной особенностью хантавирусинфицированных клеток, как отмечено рядом исследователей Донец М. А. с соавт. Т. При анализе вирусной РНК штамма Хантаан 8, культивированного в клетках VЕб, С. . с соавторами было показано, что геном хантавируса, подобно буньявирусам, состоит из трех сегментов одноцепочечной РНК отрицательной полярности. , средний , малый , имеют молекулярную массу 2. Дальтон кДа соответственно. Анализ фингериринт образцов показал, что олигонуклеотидный состав каждого сегмента РНК уникален, а олигонуклеотидные карты хантавирусов не имеют сходства с картами и рибосомальных РНК хозяйских клеток. Как другие вирусы с отрицательной одноцепочечной РНК, хантавирусы имеют РНКполимеразу, связанную с вирионом. Установлено, что 3 конец , М и сегментов РНК серологически классифицированных представителей родов, составляющих семейство Буньявириде, консервативен, и последовательность нуклеотидов 3 конца у всех членов в пределах одного рода одинакова. Секвенирование 3конца , М и , проведенное С. . с соавторами , , установило отличие по нуклеотидной последовательности штамма Хантаан 8 от других известных буньявирусов. Позже, аналогичные результаты были получены . i с соавторами , а для вируса Сеул, . с соавторами , для вируса Пуумала, М. . i М. А. с соавторами , для вируса Проспект Хилл, V. Е. iiv с соавторами для вируса Син Номбре и . . i с соавторами для вируса Тула. Кодирующая стратегия вышеперечисленных вирусов по таким показателям, как гуанинцитозин содержание, встречаемость динуклеотида цитозингуанин, использование редких кодонов, была исследована Ю. М. Пиконоровым с соавторами с помощью компьютерного анализа с использованием пакета программ , . При этом было установлено, что при средней протяженности , М и сегментов в , и нуклеотидных оснований на долю областей, кодирующих вирусные белки, приходится . С. . сегмент имеет длину 6. Да.