Характеристика изменений патогенного потенциала микроорганизмов-симбионтов в протозойно-бактериальных ассоциациях

• Автор: Красноперова, Юлия Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Оренбург
• Количество страниц: 289 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение.
Глава 1. Биологическое значение ассоциативных взаимоотношений микроорганизмов Обзор литературы

1.1. Характеристика микробных ассоциаций.

1. 2. Особенности морфологических и физиологических свойств i ii

1.3. Экологоэпидемиологическая характеристика инвазии

В. ii.

Глава 2. Материалы и методы исследований.

2. 1. Характеристика культур, используемых в работе

2. 2. Среды культивирования

2. 3. Лабораторные животные

2. 4. Методика изучения микробиоценоза кишечника.
2.5. Методы выявления В.ii
2. 6. Исследование нуклеотидных последовательностей генов,
определяющих продукцию факторов патогенности.
2. 7. Определение биологических свойств микроорганизмов
2. 8. Методика культивирования микросимбионтов в ассоциации
2. 9. Определение вирулентности ассоциативных симбионтов
2. . Определение структурных компонентов клеточной
оболочки ассоциантовбластоцист
2 Постановка кератоконъюнктивальной пробы
2. . Методы статистического анализа
Глава 3. Характеристика биологических свойств микросимбионтов в протозойнобактериальных ассоциациях толстой кишки человека.
3.1. Изучение взаимосвязи между особенностями строения
клеточной поверхности и вирулентностью штаммов В.ii
3. 2. Оценка характера изменений микробиоценоза кишечника
при бластоцистной инвазии.
3.3. Характеристика показателя вирулентности .i в рамках ассоциативного симбиоза с бластоцистами в условиях кишечного
биотопа.
Глава 4. Анализ динамики численности ассоциативных микросимбионтов В. ii и .i в процессе взаимоадан гации при совместном культивировании.
4. 1. Изменение численности эшерихий и высоковирулентных штаммов бластоцист
4. 2. Изменение численности эшерихий и умеренновирулентных v
штаммов бластоцист.
4. 3. Изменение численности эшерихий и авирулентных штаммов
бластоцист
4.4. Результаты изучения взаимодействия бактерий .i с
цистами В. ii. 3 .
Глава 5. Изучение встречаемости нуклеотидных последовательностей
генов патогенности, обеспечивающих поддержание численности
популяции .i в ассоциации с В. ii i vi
5. 1. Определение нуклеотидных последовательностей генов контролирующих синтез фимбрий , Р и 1 типа
5.2. Обнаружение нуклеотидных последовательностей еаеА гена в различных фенотипических группах .i до и после
сокультивирования с бластоцистами.
5. 3. Изучение генетических детерминант токсинообразования в различных фенотипических группах .i до и после сокультивирования с бластоцистами.
5. 4. Сравнительный анализ частоты встречаемости нуклеотидных последовательностей генов патогенности .i при ассоциативных симбиотических взаимоотношениях с В.ii до и после
сокультивироваиия.
Глава 6. Исследование факторов патогенности ii i и i ii в алгоритме ассоциативного симбиотического взаимодействия до и после сокультивироваиия.
6. 1. Анализ биологических свойств .i и высоковирулентных бластоцист до и после совместного культивирования.
6. 2. Анализ биологических свойств .i и умереиновирулентных бластоцист до и после совместного
культивирования
6. 3. Анализ биологических свойств .i и авирулентных
бластоцист до и после совместного культивирования.
Глава 7. Оценка патогенности микросимбионтов .i, полученных
после совместного культивирования с ассоциантами .ii i viv
7.1. Сравнительный анализ уровня экспрессии факторов
патогенности и количества генов патогенности в геноме .i.
Заключение
Выводы
Список литературы


Тогда как человек, являясь участником биоценоза нашей планеты, в свою очередь, представляет собой среду обитания для огрокгного количества видов микроорганизмов. Он представляется открытой системой, в которую постоянно извне поступают разнообразные микробы, в то же время, он сам служит источником их поступления в окружающую среду Ардатская, Дубинин, Минушкин, . Основным общепринятым индикаторным микробиоценозом организма человека является нормальная микрофлора кишечника Бондаренко, Воробьев и др. В связи с этим, в настоящее время, вопрос о роли простейших в поддержании численности и вирулентности бактериальной популяции, об изменении биологических свойств микробовассоциантов и самих простейших, в условиях кишечного микробиоценоза, остается открытым. Особенности морфологических и физиологических свойств. В году xi впервые описывает и зарисовывает, в соответствии с требованиями номенклатуры, кишечного паразита i ii. Он относит бластоцист к несовершенным грибам класса i под названием i i, . Несмотря на то, что появлялись сообщения о возможной этиологической роли В. Согласно принятой классификации В. Наличие псевдоподий и бинарного деления определяет бластоцист в подтип i, подотряд i отряд i i,. Не наблюдая множественное деление, предложили отнести данные микроорганизмы к типу ix, новому самостоятельному подтипу . Однако i считал, что . Первые молекулярные анализы,, которые старались прояснять филогению . Они изучали часть последовательности рРНК меньшей субъебдииицы , и не обнаружили связи i с одним из представителей эукариот. Согласно современной классификации данные микроорганизмы представляют собой условнопатогенные простейшие . Многие исследователи придерживаются мнения о том, что В. Но . Исследования, направленные на анализ филогении простейших бластоцист, показывают существующее большое генетическое разнообразие среди данных паразитов i . Различными авторами в результате использования методов , иммуноблоттинга, ИФА, электрофоретического кариотипирования, и были описаны многочисленные морфологически сходные изоляты . Ii . Они показали значительную разнородность, как генетическую, так и антигенную, между изолированными бластоцистами. Данные различия настолько существенны, что авторы предлагают выделение различных видов. Установлено что, генотип . А8, В6 и С1 , . Однако изучение генома бластоцист находится в начальной стадии. Антигены бластоцист были изучены при помощи , , , иммуноблоттинга . В.ii. Указанные штаммы разделены на четыре серологические группы у людей обнаружены бластоцисты 1ой и 2ой, у свиней 3ей и 4ой, у обезьян 1ой, 2ой, 3ей и 4ой групп i, . Авторы не выявили четкой взаимосвязи между антигенной структурой паразита и степенью проявления кишечного бластоцистоза , v . Напротив, . Данная информация позволяет предположить, что различия между серологическими группами бластоцист могут быть связаны с особенностями развития и течения вызываемого ими заболевания. Генетическое и антигенное разнообразие В. В.ii представляет собой полиморфный эукариотический микроорганизм , , i . Знание морфологии В. Vi . Одни исследователи устанавливают диагноз бластоцистоз, обнаруживая в фекальном материале вакуолярные и амебоидные формы . Получение культур и методы концентрации увеличивают чувствительность обнаружения бластоцист , , . Для диагностики бластоцистоза широко используется микроскопия нативных препаратов , , . Кроме того, успешно применяются различные методы окрашивания такими реактивами как гематоксилинэозин, железный гематоксилин, акридин оранжевый и т. Возбудитель бластоцистоза имеет своеобразное строение настоящая клеточная стенка у него отсутствует, но имеется мембрана, с которой тесно связаны цитоплазма и крупное центральное тельце вакуоль, занимающее до объема клетки , , , , . Внешняя поверхность мембраны представляет собой фибриллярный слой неодинаковой толщины и плотности. У клеток выделенных из фекалий ее толщина варьирует от 0, до 0,5 мкм . Авторы показали наличие во внешней части мембраны пор диаметром , нм, в то время как во внутренней наблюдались интегрированные белки и каналы со сходным расположением.