Разработка новой технологии получения O-антигена холерного вибриона для производства профилактических препаратов

• Автор: Нижегородцев, Сергей Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 145 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ МАСШТАБИРУЕМОГО КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ И ОЧИСТКИ АНТИГЕННЫХ КОМПОНЕНТОВ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Методологические основы баромембранного разделения биологических жидкостей

1.2. Оборудование для концентрирования и очистки антигенных компонентов бактериальных клеток
1.3. Характеристика Оантигена холерного вибриона и методы его выделения, концентрирования и очистки в производстве профилактических и диагностических препаратов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. АППАРАТУРНОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ ПО ВНЕДРЕНИЮ МАСШТАБИРУЕМЫХ УЛЬТРАФИЛЬТРАЦИОННЫХ МЕТОДОВ В ПРОИЗВОДСТВЕ ХОЛЕРНЫХ ВАКЦИН
3.1. Разработка стенда для концентрирования культуральной жидкости холерного вибриона с использованием ультрафильтрационных модулей
3.2. Создание схемы обвязки ультрафильтрационных модулей для проведения процессов диализа и диафильтрации концентратов Оантигена
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ СХЕМЫ ПОЛУЧЕНИЯ ОАНТИГЕНА ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ УЛЬТРАФИЛЬТРАЦИОННОГО ОБОРУДОВАНИЯ
4.1. Разработка и оптимизация методических приемов концентрирования культуральной жидкости холерного вибриона для получения полуфабриката Оантигена
4.2. Использование ультрафильтрационных модулей для ускоренного диализа и диафильтрации концентратов Оантигена
4.3. Технологичность и экономическая эффективность использования ультрафильтрационных модулей для проведения процессов концентрирования и диализа Оантигена
ГЛАВА 5. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ОАНТИГЕНА И ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ХОЛЕРНОЙ ВАКЦИНЫ, ПОЛУЧЕННЫХ С ПОМОЩЬЮ УЛЬТРАФИЛЬТРАЦИИ И ТРАДИЦИ
ОННОЙ ТЕХНОЛОГИИ
5.1. Сравнительный анализ физикохимических свойств и серологической активности Оантигенов, полученных различными способами
5.2. Иммунобиологические свойства бивалентной химической таблетированной холерной вакцины, полученной с использованием новых технологических приемов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Внедрение метода диализа и диафильтрации Оантигена холерного вибриона на этапе его освобождения от сульфата аммония, позволяет, благодаря большой площади полых волокон в ультрафильтрационном волоконном аппарате существенно сократить время на проведение процесса диализа и исключить рутинные малоэффективные регламентные методы. Образцы таблетированной холерной вакцины в количестве трех серий, полученных по новой технологии, прошли испытания в Национальном органе контроля МИБП ГИСКе им. Л.А. РосНИПЧИ Микроб г, одобренные Ученым советом и согласованные директором ГИСК им. Л.А. Тарасевича г. Разработанные технологии внедрены в производство, для чего составлены и утверждены стандартные операционные процедуры на каждом этапе использования нового оборудования. Разработана, сконструирована и внедрена производственная установка из шести ультрафильтрационных половолоконных аппаратов для масштабируемого концентрирования культуральной жидкости холерного вибриона, содержащей Оантиген. На основании данных о физикохимических и биохимических свойствах растворов Оантигена предложена оптимальная схема ультрафильтрационного концентрирования культуральной жидкости холерного вибриона в раз для последующего выделения препарата Оантигена. Разработана и смонтирована установка для масштабируемой диализной диафильтрации раствора Оантигена после осаждения сульфатом аммония с использованием ультрафильтрационных аппаратов. Препараты Оантигена, полученные по новой технологии, соответствуют требованиям действующей нормативной документации, обладают большей серологической активностью и в своем составе сохраняют набор ферментов холерного вибриона. Использование ультрафильтрационного метода в производстве холерных вакцин технологично и экономически эффективно за счет уменьшения количества расходных материалов, снижения энерго и трудозатрат. Экспериментальнопроизводственные серии вакцины, полученные с помощью ультрафильтрации, при контрольной проверке по показателям качества соответствовали действующим требованиям фармакопейной статьи предприятия и регламенту производства на Вакцину холерную бивалентную химическую таблетированную. Апробация работы. VIII Российской научнопрактической конференции по проблеме Холера РостовнаДону, г. РНИПЧИ Микроб в , и годах. Диссертационная работа рассмотрена и одобрена на межлабораторной конференции в институте Микроб. Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 7 опубликованных научных работах. Структура и объм работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырх глав собственных исследований, заключения, выводов и списка основной использованной литературы. Объм диссертации 5 страниц машинописного текста, включающего рисунков 9 таблиц. Список литературы содержит 3 источника, в числе которых отечественных. ГЛАВА 1. В процессе разделения растворов с помощью полупроницаемых мембран, если размеры пор меньше размеров макромолекул, через мембрану преимущественно проходит растворитель. При этом концентрация растворнного вещества в пограничном слое у поверхности мембраны увеличивается. Повышение концентрации происходит до тех пор, пока под действием возникающего градиента концентраций растворнного вещества между поверхностью мембраны и объмом раствора не установится динамическое равновесие. Явление образования у поверхности мембран пограничного слоя, в котором концентрация растворнного вещества больше, чем в основном объме раствора, получило название концентрационной поляризации , 7. Влияние концентрационной поляризации на динамические характери стики мембран отрицательно, так как при этом вследствие увеличения осмотического давления раствора снижается движущая сила процесса разделения. Кроме этого возможно выпадение в осадок и осаждение на мембране трудно растворимых солей, гелеобразование высокомолекулярных соединений, что влечт за собой чистку или замену мембраны . При разделении растворов применяются ячейки с хлорсеребряными микроэлектродами, расположенными на строго определнном расстоянии, от поверхности мембраны. К недостаткам измерения концентрационной поляризации микроэлектродами относится влияние самих микроэлектродов на поток, сложность их изготовления и необходимость экранирования металлических частей.