Электрофоретические и антигенные свойства полипептидов сальмонелл и идентификация их геномов полимеразной цепной реакцией

• Автор: Зайнуллин, Ленар Ильгизарович
• Шифр специальности: 03.00.07, 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 157 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Основные биологические свойства

возбудителей сальмонеллеза

1.2. Антигенная структура и химический состав сальмонелл

1.3. Протеомный анализ и его значение

1.4. Методы изучения генома. Современное состояние.

1.5. Лабораторная диагностика сальмонеллезов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы

2.2. Результаты собственных исследований.
2.2.1. Анализ полипептидов
различных штаммов сальмонелл методом дискэлектрофореза в ПААГДСН
2.2.2. Изучение антигенных свойств белков различных штаммов сальмонелл
методом иммуноблоттинга
2.2.2.1. Изучение состава и свойств антигенных комплексов изолированных клеточных
структур сальмонелл жгутики, клеточная стенка
2.2.3. Исследование геномов сальмонелл
2.2.3.1. Разработка модифицированного способа выделения ДНК сальмонелл
для молекулярногенетических исследований
2.2.3.2. Подбор праймеров для индикации
представителей рода методом ПЦР
2.2.3.3. Выявление гипервариабельных областей генома сальмонелл методом ПЦР,
с использованием произвольных праймеров
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4. ВЫВОДЫ.
5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
6. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ.
7. ПРИЛОЖЕНИЯ.
ДНК
д
кД
МПА
п.н.
ПЦР
РА
ФСБТ
ЭДТА






i
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
дезоксирибонуклеиновая кислота додецилсульфат натрия дальтон
иммуноферментный анализ
килодальтон
липополисахарид
мясопептонный агар
мясопептонный бульон
пар нуклеотидов
полиакриламидный гель
полимеразная цепная реакция
полимеразная цепная реакция с произвольными
праймерами
реакция агглютинации
рибонуклеиновая кислота
фосфатносолевой буфер с твином
этилендиаминтетрауксусная кислота ii двухмерный метод разветвленной ДНК i пара оснований п.н.
xi i ix смесь дезоксири
бонуклеозидтрифосфатов
фемтограмм 5 грамм
i i i лигазная цепная реакция нанограмм 9 грамм
i i оптическая плотность
i i полимеразная цепная реакция
пикограмм грамм
iii i произвольная амплификация полиморфных локусов ДНК, ПППЦР
i iii амплификация со сдвигом цепи
ДНК зависимая ДНКполимераза из i раствор трисгидроксимстиламинометана с добавлением НС1 до требуемого
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Состав основной полисахаридной последовательности Оспецифичсскис цепи у весьма стабилен, но такие модификаторы, как ацетильные группы, остатки сахаров, образующие ветви, присутствуя не у всех молекул полисахарида, определяют микрогстсрогснность ЛПС даже у одной бактериальной клетки. Число олигосахаридных последовательностей в разных молекулах ЛПС может значительно варьировать. Так, у . ЛПС совсем лишены Оцепей. Оантигенные цепи выступают над поверхностью внешней мембраны бактериальной клетки, образуя ворсинки до 0 нм длиной . Основная специфичность Оантигена в серологических реакциях обусловлена присутствием на концах полисахаридных цепочек, формирующих отдельные антигенные факторы, определенных полиозидов дидезоксигексоз. Таким образом, антигенное разнообразие, обусловленное различиями структуры Оцспей, дает бактериям определенные селективные признаки. Синтез ядра ЛПС происходит независимо от синтеза Оспецифических цепей. При синтезе ядра мембранным носителем выступает липид А, который затем остается в составе ЛПС. Липид А, входящий в состав полноценных, не мутантных, молекул ЛПС не обладает антигенностью. Однако, в реакциях с Ямутантами или при использовании очищенных препаратов липида А антитела к нему образуются , . Токсичность ЛПС большинства грамотрицательных бактерий определяется липидом А, при этом она проявляется только после разрушения клеток эндотоксин , . Биосинтез ЛПС постоянно протекает в бактериальной клетке. Возникающие компоненты, взаимодействуя друг с другом и с двухвалентными катионами, образуют липополисахариднобслковые комплексы разной степени агрегации в зависимости от функции комплекса в данный период . В соответствии с содержанием тех или иных Оантигенов сальмонеллы делят на серологические группы, при этом отдельные антигенные факторы обозначаются арабскими цифрами. Одним из компонентов Оантигена является Уиантиген. У1антиген расположен поверхностно, имеет белковополисахаридный химический состав содержит белка, углеводов. Изолированный У1антиген термостабилен, не разрушается даже при многочасовом гидролизе при 0С в 1 М уксусной кислоте. Наиболее полное его развитие происходит при температуре С . VIантиген полимер Ыацетиламиногексуроновой кислоты. Присутствие его на поверхности бактериальных клеток препятствует их агглютинации специфическими Осыворотками, т. Оинагглютинабсльными. К их числу относится Мантиген слизистый антиген, обнаруженный . у слизистых штаммов . В, . . , . Цит. Е.С. Станиславскому, . Мантиген кислый полисахарид, его основным структурным компонентом является коланиковая кислота. Он не растворим в воде, разрушается под воздействием кислоты и этанола и обладает слабыми антигенными свойствами. Позднее описан еще один соматический антиген, названный Тантигеном от слова i. Первый Тантиген Т был обнаружен у . В и . Тантиген Т2 у . Подавляющее большинство представителей рода подвижны, органами их движения являются жгутики. По расположению жгутиков сальмонеллы относятся к перитрихам , у них они расположены равномерно по всей поверхности микробной клетки. Нить жгутика образована белкомфлагеллином, содержание которого может достигать 2 от массы бактерии. Молекулярная масса флагеллинов колеблется в пределах кД . Флагсллин обладает антигенными свойствами, как уже отмечалось, его называют жгутиковым или Нантигеном. Нантиген сальмонелл, белковый по химической структуре, термолабильный 0С, разрушается фенолом и спиртом , но устойчив по отношению к формалину. Нантиген определяет, как известно, типовую специфичность многих энтеробак Ряд авторов отмечают, что изолированные и тщательно очищенные жгутики не обладают токсичностью для животных, и могут с успехом использоваться в диагностических целях ,. Таким образом, антигенная структура сальмонелл имеет мозаичное строение и определяется наличием вариаций антигенных детерминант, которые приводят к некоторым закономерным изменениям антигенного состава штаммов.