Усовершенствование средств диагностики и идентификации возбудителя сибирской язвы

• Автор: Буерова, Светлана Васильевна
• Шифр специальности: 03.00.07, 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 175 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о возбудителе сибирской язвы

1.2. Химический состав и антигенная структура возбудителя сибирской язвы

1.3. Лабораторная диагностика возбудителя сибирской язвы

1.4. Современное состояние и перспективы совершенствования иммуноферментиого анализа

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

2.2. Сравнительный анализ полипептидного состава экстрактов клеток возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий
2.2.1. Изучение полипептидного профиля возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бак терий в различных системах 1ААГ
2.2.2. Анализ электрофореграмм полипептидного спектра возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий, окрашенных азотнокислым серебром
2.3. Выявление и выделение специфических антигенов возбудителя сибирской язвы
2.3.1. Разработка способов экстракции соматических антигенов Вас. атЬтасБ
2.3.2. Выявление специфических антигенных структур Вас. апзгасв методом иммуноблотинга
2.3.3. Выделение и очистка специфического соматического антигена возбудителя сибирской язвы с Мм кД
2.3.4. Определение активности и специфичности сибиреязвенного
антигена с Мм кД
2.3.5. Определение протективной активности сибиреязвенного антигена с Мм кД
2.4. Выделение РаЬфрагментов иммуноглобулинов сыворотки крови и получение иммунопероксидазных конъюгатов на их основе
2.4.1. Сравнительная характеристика методов выделения и очистки иммуноглобулинов в сыворотки крови
2.4.2. Разработка технологии выделения РаЬфрагментов ммуноглобулинов в
2.4.3. Получение иммунопероксидазных конъюгатов на основе Ра1У2фрагментов антител и их сравнительная характеристика
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ИФА иммуноферментный анализ
РА реакция агглютинации
ПЦР полимеразная цепная реакция
АГ антиген
реакция нейтрализации
РИГА реакция непрямой гемагглютинации
РДП реакция диффузионной преципитации
МПА мясопептонный агар
МПБ мясопептонный бульон
ДПК дипиколиновая кислота
ИПК иммукопероксидазный конъюгат
ДСН додеци л сульфат натрия
ПААГ полиакриламидный гель
ПА протсктивный антиген
АЭ антигенэкстракт
АТЭ антигентермоэкстракт
БМВ белки внешней мембраны
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


А. , говоря об эволюции возбудителя сибирской язвы, представляют ее состоящей как бы из нескольких фаз от типичных сапрофитов к типичным паразитам и затем снова к сапрофитам на фоне иммунологического пресса и изменившихся условий внешней среды. Таким образом, по мнению авторов, происходит своего рода сапрофитизация циркулирующих сибиреязвенных штаммов. Их вирулентность связывают с наличием капсулы, которая детерминируется плазмидой рХ МД. Утрата этой плазмиды, как доказано многочисленными экспериментами i . А. и др. Степанов А. С. и др. В. i . Ivi В. i . В связи с этим, i . Вас. Основа типирования. Типирование базируется на биологических характеристиках инкапсулирование, продукция токсина, антигенные и иммуногенные свойства. ХО 1 и рХ и их генетические характеристики. Стандарт типирования. Тип 1. Вирулентный штамм Вас. Хи рХ, патогенен для человека и животных. Тип 2. Вакцинный штамм Вас. Х, но отсутствует плазмида рХ, используется для производства вакцин. Тин 3. Авирулентный штамм Вас. Х, но отсутствует плазмида рХ. Обладает патогенностью и легальностью для экспериментальных животных. Тип 4. Невирулентный штамм Вас. Отсутствуют обе плазмиды рХ и рХ. Непатогенен. Данное типирование основано первоначально на выявлении плазмид, поэтому эту классификацию можно назвать как типирование плазмидных мутантов. Васильев П. Г. на основании новых данных о биологии возбудителя сибирской язвы разработал концепцию о таксономии вида Вас. ВА2 . или полуслизистой консистенции как на I I в атмосфере воздуха, так и на бикарбонатном сывороточном агаре в атмосфере ССЬ. ВАЗ Вас. ВА4 являются невирулентными, не образуют капсулу ни при каких условиях, формируют на питательных средах вне зависимости от наличия в них бикарбоната натрия, в атмосфере воздуха и С шероховатые колонии , , , . С учетом новой классификации сибиреязвенного микроба автором разработаны схемы специфической индикации и идентификации . На основании данных ПЦР и фингерпринтинга установлено, что штаммы Вас. I. Результаты означают, что клоновая популяция является только началом проявления признаков независимой изменчивости. Это, возможно, отражает то, что облигатный патоген Вас. Напротив, эти факты могут также указывать и на то, что эволюция микроорганизма из предшественника, подобного Вас. Как показывает анализ литературных данных, за многолетнее изучение Вас. Однако, наука продолжает искать подтверждения уникальности Вас. Морфология. Вас. Граму красится положительно. Вегетативные клетки могут быть с капсулой и без нее. Споры заключены в хорошо выраженный экзоспориум. В неокрашенных мазках, приготовленных из крови и тканей животных, больных или погибших от сибирской язвы, бациллы имеют форму гомогенных прозрачных палочек со слегка закругленными концами, лежащими поодиночно или соединенными в короткие цепочки. Число клеток в цепочке у высоковирулентных штаммов, как правило, не превышает трех, а у низковирулентных их может быть больше. Но данным А. Вас. слоем, в котором содержится от 5 до всего клеточного белка. Он выполняет различные функции, включая сохранение формы клетки, молекулярную фильтрацию, а также служит местом фиксации макрофагов. Этот слой является фактором вирулентности, защищает патогенных бактерий от инактивации комплементом, способствует связи бактерий с молекулами хозяина и повышает их способность соединяться с макрофагами. Компонентами слоя являются два поверхностных белка ЕА1 и . Соответствующие им гены представлены на хромосоме . Сибиреязвенная бацилла имеет дифференцированный нуклеоид дискретного характера Дунаев Г. В., Дунаев Г. В., Белоконов И. И., . При исследовании авторами вегетативных клеток штаммов 2ой вакцины Цинковского и СТИ1, четко контурированный нуклеоид находился в бациллах на всех фазах их развития. В бациллах обнаружены ДНК и РНК, первая содержится в нуклеоиде, вторая в цитоплазме. Молекула ДНКхромосомы двухцепочечная, замкнута в кольцо и упакована в виде волокнистого тяжа.