Контаминированность объектов ветеринарного надзора возбудителем листериоза и биологические свойства выделенных культур листерий

• Автор: Алимов, Марат Азатович
• Шифр специальности: 03.00.07, 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 152 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 Современные методы индикации листерий

2.2. Идентификация и типирование культур ii

2.3. Контаминированность продуктов и кормов листериями

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы исследований

3.2. Результаты собственных исследований

3.2.1. Оптимизация ПЦР для анализа проб из объектов ветеринарного надзора.

3.2.2. Сравнительная оценка эффективности различных пита

тельных сред и условий культивирования при выделении ii .
3.2.3. Определение сроков выживания лисгсрий в мясных и молочных продуктах
3.2.4. Исследования по выявлению ii в объектах внешней среды.
3.2.5. Анализ кормов на содержание ii
3.2.6. Исследования контаминации ii растительных продуктов и сырья..
3.2.7. Результаты анализа на содержание ii
молока и молочных продуктов
3.2.8. Определение контаминации листериями мяса и мясопродуктов
3.2.9. Биологические свойства выделенных культур листерий
3.2.9.1 Результаты изучения культуральноморфологических и
биохимических свойств изолятов.
3.2.9.2 Определение вирулентности и агглютинабельности выделенных изолятов
3.2.9.3 Изучение опасности контаминированных листериями объектов для лабораторных животных
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
5. ВЫВОДЫ.
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
8. ПРИЛОЖЕНИЯ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БМВД белковоминеральная витаминная добавка
БХ бульон Хоттингера
ГУВ Главное управление ветеринарии
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
КОЕ колониеобразующие единицы
лу лимфатический узел
млд минимальная летальная доза
М.к. микробная клетка
МПБ мясопептонный бульон
МЛА мясопептонный агар
ПСГК полусинтетическая среда из гидролизата казеина
ПЦР полимеразная цепная реакция
п.н. пара нуклеотидов
п.о. пара оснований
ТСБ триптозносоевый бульон
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Наиболее эффективным и доказательным является бактериологическое выделение листерий И. А. Бакулов, Э. Н. Шляхов с соавт. Б.И. Антипов и др. Бактериологическая диагностика предусматривает микроскопические исследования исходного материала, посевы на питательные среды, биопробу на лабораторных животных и идентификацию выделенных культур. Учитывая особенность листерий размножаться при 4С, был предложен метод холодного обогащения . . . .. , . . , В. i, . . , . . , . . , И. А. Бакулов, Д. А. Васильев, . Данная методика предполагает помимо обычного высева исследуемого образца в бульон и агар и тсрмостатирование при , хранение части исследуемого материала в холодильнике при 4С в течение 23 месяцев. Несмотря на то, что инкубация при 4С способствует обогащению листериями, данный метод не удовлетворяет требованиям практики изза длительности. Хотя для выращивания листерий пригодны обычные питательные среды, многие авторы . , . iii, И. Л. Бакулов К. Негода с соавт. В.А. Никитина с соавт. А.М. Алимов, . . Котылев, М. П. Бутко, Л. Я. Телишевская, М. И. Трусова, рекомендуют питательные среды более сложного состава. Для предотвращения роста посторонней микрофлоры, особенно при исследованиях продуктов, кормов и объектов внешней среды предложены элективные питательные среды. В качестве селективного фактора использовали теллурит калия, который подавляет рост многих грамотрицательных бактерий и редуцируется листериями в теллурии, имеющий черный цвет, в связи с чем колонии имеют черный цвет О. В. Кривоносова с соавт. .. Гукасян, В. М. Трифонов, М. П. Бутко, . i, . , . В качестве селективного фактора при индикации листерий испытан широкий спектр химических веществ и антибиотики . i . . , В. , В. , . , . . .. . . . .. , . i, . За последние годы разработаны ряд селективных сред для выделения листерий . i, . i . В. i . А.М. Алимов с соавт. Данную среду рекомендуют применять в жидкой и плотной формах, что позволяет проводить обогащение и выделение культуры листерий. . с соавт. Они, используя данную методологию, из 0 образцов фекалий овец выделили 6 культур листерий. Традиционными методами из этих проб было выделено только культур. Селективные факторы в той или иной степени могут ингибировать и рост листерий, поэтому принципиально важной стала разработка методики выделения листерий с использованием эскулина и цитрата железистого аммония М. Е. Мс i, К. i, . . , . . , . .. i , . i, . . , . V . Добавление эскулина в качестве единственного источника углевода и цитрата железистого аммония в качестве индикатора гидролиза углеводов позволяет дифференцировать . .. i с соавт. В настоящее время в качестве обогатительного бульона за рубежом применяют различные варианты триптиказосоевого бульона с дрожжевым экстрактом и селективным компонентом, включающим акрифлавин, налидиксовую кислоту и циклогексимид . .VV. i , В. i, . . , . При выделении листерий обычно проводится непосредственный посев исследуемого клинического образца на селективный агар и обогащение материала в селективном бульоне при С в течение часов с последующим высевом на селективный агар. Для выделения листерий из сильно загрязненных объектов используют процедуру так называемого вторичного обогащения на бульоне V2 или бульоне Фразера Е. Т. , . . , И. С. Таргаковский с соавт. Схема вторичного обогащения в среде V2 получила наибольшее распространение для выделения листерий прежде всего из мясных продуктов. Бульон Фразера используется для выделения листерий из более широкого спектра продуктов питания и образцов окружающей среды. Среда рекомендована Комитетом Международной организации для обогащения при выделении .