Индикация и идентификация Chlamydia psittaci с помощью полимеразной цепной реакции

• Автор: Вафин, Рамиль Ришадович
• Шифр специальности: 03.00.07, 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 120 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Таксономическое положение хламидий

1.2. Биологическая характеристика хламидий.

1.2.1. Морфология и цикл развития.

1.2.2. Химический состав

1.2.3. Геномика.

1.3. Лаборагорная диагностика хламидиоза.

1.3.1. Бактериоскопические и вирусологические методы

1.3.2. Серологические методы

1.4. Молекулярногенетическая диагностика инфекционных болезней
1.5. Полимеразная цепная реакция.
1.6. ПЦРдиагностика хламидийных инфекций
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Штаммы хламидий.
2.2. Сыворотки и патологический материал.
2.3. Эпизоотологическое обследование.
2.4. Выделение и идентификация возбудителя.
2.5. Серологические реакции
2.6. Очистка и концентрирование хламидий.
2.7. Выделение ДНК.
2.8. Полимеразная цепная реакция.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Оценка эпизоотического состояния зверосовхоза Вятский Кировской
области РФ в отношении хламидиоза пушных зверей
3.2. Лабораторная диагностика хламидиоза лисиц в зверосовхозе Вятский Кировской области РФ.
3.2.1. Вирусологические исследования.
3.2.2. Серологические исследования.
3.2.3. Молекулярногенетические исследования.
3.3. Совершенствование молекулярногенетической индикации
и идентификации возбудителей хламидиоза
3.3.1. Разработка способа выделения ДК хламидий
3.3.2. Полимеразная цепная реакция ПЦР со специфичными праймерами для индикации СЫ.рвЖаа.
3.3.3. Выявление возбудителя хламидиоза в патологическом материале
при помощи ПЦР со специфичными праймерами.
3.3.4. Произвольная амплификация полиморфных локусов ДНК ЯАРОРСЛ для идентификации штаммов СЫ.ряНасп.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Цель исследований изучить генетические аспекты индикации и идентификации хламидий и на этой основе усовершенствовать средства диагностики хламидиоза животных. В соответствии с целью работы для решения были выдвинуты следующие задачи. ДНК. Научная новизна. Разработан новый метод выделения ДНК хламидий, обеспечивающий получение препаратов нуклеиновых кислот возбудителя высокой степени чистоты и нативности, пригодных для молекулярногенетических исследований. Подобран регламент выполнения полимеразной цепной реакции с препаратами ДНК хламидий. Отобран праймер для произвольной амплификации полиморфных локусов ДНК, позволяющий идентифицировать штаммы хламидий. Практическая ценность. РФ. Выделенные при этом штаммы микроорганизмов идентифицированы как хламидии. Разработан фенольнодетергентный метод выделения ДНК хламидий, позволяющий получать чистые, нативные и концентрированные препараты нуклеиновых кислот возбудителя. Определена специфичность и чувствительность полимеразной цепной реакции с использованием очищенной ДНК штаммов хламидий. Разработан эффективный вариант ПЦР с универсальным праймером, который позволяет идентифицировать штаммы хламидий, выделенных от разных видов животных. Апробация работы. Ежегодных итоговых заседаниях ученых советов Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана гг. Научнопрактических конференциях но проблемам ветеринарии и зоотехнии Казань и г. Международной научной конференции, посвященной летию образования зооинженерного факультета Казань, г. Научнопрактической конференции Актуальные проблемы биолог ии и ветеринарной медицины мелких домашних животных Киров, и . Научнопрактической конференции Актуальные вопросы ветеринарной медицины домашних животных Екатеринбург г. Научнопрактической конференции Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития Саратов, г. IX и X международных ветеринарных конгрессах Москва, и г. Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 2 методические рекомендации. ДНК хламидий. ПЦР со специфичными и универсальными праймерами для индикации и идентификации хламидий. Объем н структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 0 страницах компьютерного текста текстовый редактор i , стиль i , размер шрифта пт, интервал полуторный и включает введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований 3 главы, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения и указатель литературы всего 0 источников, в том числе 2 иностранных и 6 ссылок на сайты I. Диссертация иллюсфирована 8 таблицами и 7 рисунками. Прилагаются документы, подтверждающие научнопрактическую ценность работы. После открытия возбудителей группы пситтакозалимфогранулемыграхомы ПЛТ, возникла необходимость определенного таксономического обозначения этих микроорганизмов. Для этого предлагались различные термины бедсонии, гальпровии, миагаванеллы, хламидозоон, неориккетсии, парариккетсии, кокетсии и другие. В году американский ученый пересмотрел все имеющиеся названия возбудителей 1руппы ПЛТ и предложил выделить их в самостоятельный порядок и включить в единый род i. По мере изучения хламидий возникла необходимость определить их место в систематике. Возбудители данной группы инфекционных болезней имеют ряд свойств, характерных для вирусов облигатный внутриклеточный паразитизм способность проходить через фильтры, задерживающие бактерии образование внутриклеточных включений. Исходя из этого, первоначально хламидии считали крупными атипичными вирусами , , 5. Дальнейшие исследования показали сходство хламидий с бактериями содержат две нуклеиновые кислоты ДНК и РНК, способ размножения на определенном этапе происходит путем деления, чувствительны к сульфаниламидам и антибиотикам, имеют клеточную стенку, грамотрицательны и т. Международной ассоциации Микробиологических обществ отнесла хламидии к бактериям отряда i, семейства i, рода i. Внутри рода хламидии были разделены на два вида i. i.