Оптимизация условий масштабируемого культивирования туляремийного микроба в технологиях получения протективных антигенов

• Автор: Шепелев, Иван Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.07, 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 133 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1.Биотехнологические аспекты культивирования и получения биологически активных компонентов патогенных бактерий

1.2.Питательные среды и условия культивирования возбудителя туляремии

ГЗ.Основныс антигенные компоненты туляремийного микроба

ГЛАВА 2.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. КОНСТРУИРОВАНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И ОПРЕ

ДЕЛЕНИЕ АДЕКВАТНЫХ ФИЗИКОХИМИЧЕСКИХ УСЛОВИЙ ДЛЯ МАКСИМАЛЬНОГО ВЫХОДА БИОМАССЫ И АНТИГЕННЫХ КОМПОНЕНТОВ ТУЛЯРЕМИЙИОГО МИКРОБА
3.1. Подбор и конструирование питательных сред для мак симального выхода биомассы туляремийного микроба
3.2. Оптимизация условий культивирования туляремийно го микроба для максимального выхода Скомплекса.
ГЛАВА 4. БИОКИНЕТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ КУЛЬТУР
ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА В ПРОЦЕССЕ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ КЛЕТОК
4.1. Характеристика биомассы туляремийного микроба. полученной в условиях глубинного культивирования по
ГЛАВА 5.
биологическим и иммунохимическим показателям.
4.2. Разработка способов выделения и очистки антигенных компонентов туляремийного микроба.
ИЗУЧЕНИЕ Г1РОТЕКТИВНОСТИ, ИММУНО И БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ СКОМПЛЕКСА ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА.
5.1. Изучение биохимических и иммунохимических свойств С комплекса туляремийного микроба.
5.2. Анализ иммуногенности Скомплекса туляремийного микроба
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Эти данные на фоне многочисленных поисков общих антигенов, которые были найдены в последнее время практически у всех взятых на исследование грамотрицательных микроорганизмов, дают дополнительные объяснения появлению в печати разрозненных сообщений об эффективности туляремийной вакцины для повышения устойчивости к гетерологичным инфекциям, у которых клеточное звено играет существенную роль в специфическом иммунитете Ко5ке1а Р. Нсгуа Е. Илюхин В. И. и др. Так, сотрудниками института Микроб в опытах на белых мышах было установлено формирование под влиянием иммунизации живой туляремийной вакциной перекрестного иммунитета против чумы Васенин А. С., Вейнблат В. И., Самойлова Л. В., . Накопленные данные о синтезе антигенных структур возбудителя туляремии свидетельствуют о существенной роли компонентного состава питательных сред и условий культивирования в формировании и количественном накоплении отдельных поверхностных структур клетки, обладающих протсктивной активностью. Прежде всего, к таким структурам относится гликопротеидный Скомплекс С от слизистый Жемчугов В. Е. и др. В связи с этим, изучение уровня синтеза и условий культивирования, способствующих максимальному накоплению Скомплскса, является актуальной научнопрактической задачей. Не меньшее значение имеет разработка схемы и выбор современных методов биосепарации при получения Скомплекса в его наиболее очищенном и иммунологически активном состоянии. Цель исследования. Создать оптимальную схему глубинного культивирования туляремийного микроба для получения протективного антигенного Скомплекса, разработать методы его выделения и очистки, изучить иммунологическую эффективность. Определить оптимальный состав питательных сред и физикохимических условий глубинного культивирования туляремийного микроба для получения максимального выхода биомассы и протективного Скомилекса. Изучить биокннетичсскис особенности культур туляремийного микроба в процессе глубинного культивирования i основе анализа биологических и физикохимических данных, а также расчта формализованных показателей. Разработать эффективный способ глубинного культивирования и оптимальный алгоритм проведения процесса выращивания вакцинного штамма туляремийного микроба для получения биомассы и протективного Скомплекса. Разработать оптимальную биотехнологическую схему получения и очистки протективного Скомплскса туляремийкого микроба из клеточной массы и культуральной жидкости, а также и методы его количественного определения. Изучить антигенные, биохимические, физикохимические и электронномикроскопические особенности препаратов Скомплекса. Провести сравнительный анализ препаратов, полученных из биомассы вакцинного и вирулентного штаммов туляремийного микроба. Оценить протективную активность Скомплекса в отношении высоковирулентных штаммов возбудителя туляремии голарктической и неарктической расы. Провести сравнительный анализ влияния иммунизации Скомплексом и живой туляремийной вакциной на показатели клеточного звена иммунитета у лабораторных животных. Научная новизна исследования. Впервые изучены биокинетические свойства культур вакцинного штамма туляремнйного микроба и особенности синтеза им протективного Скомплекса при глубинном выращивании в сложных многокомпонентных питательных средах, послужившие основой для разработки оптимального алгоритма проведения процессов культивирования. Впервые, на основании комбинации методов изоэлектрической преципитации и баромембранного разделения биологических молекул, разработан способ получения Скомплекса туляремийного микроба из клеточной массы и культуральной жидкости. Впервые, с использованием иммунноэлекгронной микроскопии с антителами к Скомплексу, мечеными коллоидным серебром показано, что данный антиген представляет собой надоболочечную структуру клеток возбудителя туляремии. Впервые показано, что Скомплскс интенсивно синтезируется культурами туляремийного микроба на сложных но составу питательных средах, обогащенных факторами роста и обеспечивающих высокую скорость размножения популяции возбудителя. Впервые проведен полный биохимический и и.