Влияние серотонина на свойства возбудителя чумы, индуцированный апоптоз и пролиферацию иммунокомпетентных клеток

• Автор: Клюева, Светлана Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.07, 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 159 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. БИОГЕННЫЕ АМИНЫ НЕЙРОГОРМОНЫ И ИХ РОЛЬ В

МЕХАНИЗМЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ПРО И ЭУКАРИОТ

1.1. Роль биогенных аминов в регуляции жизнедеятельности прокариот

1.2. Биогенные амины в иммунопатогенезе инфекционных болезней

1.3. Модулирующее действие биогенного амина серотонина на процессы формирования адаптивного иммунитета

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.2. Методы исследования

2.2.1. Микробиологические методы исследования
2.2.1.1. Культивирование микроорганизмов в присутствии серотонина
2.2.1.2. Приготовление бактериальных взвесей и смешанных культур
2.2.1.3. Морфометрия бактериальных клеток, колоний чумного микроба
2.2.1.4. Электрофоретическое разделение цслыюклеточньтх лизатов исследуемых культур в полиакриламидном геле БЭБ РАвЕ
2.2.1.5. Определение содержания ДНК в микробных клетках
методом проточной цитометрии
2.2.1.6. Проточноцитофлу ори метрический мониторинг экспрессии антигенов К рейМя, детектируемых коммерческим препаратом иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих чумных адсорбированных
2.2.2. Иммуносерологические методы исследования РНГА, РТНГА, ТИФА, иммуноблопгтинг
2.2.3. Иммунологические методы
2.2.3.1. Выделение иммунокомпетентных клеток из крови и органов биомоделей
2.2.3.2. Выделение суммарной фракции лейкоцитов из крови человека и биомодельных животных
2.2.3.3. Определение апоптотических и пролиферирующих
эукариотических клеток
2.2.3.4. Цитофлуориметрический мониторинг состояния хроматина и лизосомального аппарата лейкоцитов крови, клеток перитонеального экссудата
2.2.3.5. Определение напряженноеги иммунитета
2.2.4. Статисгичсские методы
ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ СЕРОТОНИНА НА СКОРОСТЬ РОСТА, ПЕРЕРАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПО КЛЕТОЧНОМУ ЦИКЛУ СОДЕРЖАНИЕ ДНК, МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ЧУМНОГО МИКРОБА В УСЛОВИЯХ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НА ПЛОТНЫХ И ЖИДКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
3.1. Влияние серотонина на динамику роста, морфометричсскис показатели У реяИн ЕУ НИИЭГ и его изогенных производных с различным плазмидным составом на плотных и жидких питательных средах в условиях культивирования при С и С
3.2. Проточноцитофлуориметрический мониторинг относительного содержания ДНК в клетках У. ре.ЕУ НИИЭГ и его изогенных производных с различным плазмидным составом в условиях культивирования при С на питательных средах в присутствии серотонина
3.3. Изучение возможности применения серотонина для выделения чумного микроба бактериологическим методом из исследуемого материала, контаминированного посторонней микрофлорой
ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ СЕРОТОНИНА НА ЭКСПРЕССИЮ
ПОВЕРХНОСТНЫХ АНТИГЕНОВ И ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ БЕЛКОВ У I С РАЗЛИЧНЫМ ПЛАЗМИДНЫМ СОСТАВОМ
4.1. Изучение влияния серотонина на экспрессию поверхностных антигенов капсульного антигена чумного микроба Ф1, активатора плазминогена клетками У. i V НИИЭГ и его изогенного производного . i КМ6 в процессе культивирования в жидкой питательной среде
4.2. Изучение влияния культивирования на питательных средах с серотонином на электрофоретический профиль белков . i
ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ СЕРОТОНИНА НА РАЗВИТИЕ
ИНДУЦИРОВАННОГО ИЕРСИНИЯМИ АПОПТОЗА И ПРОЛИФЕРАЦИЮ ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ КЛЕТОК I VI
5.1. Изучение i vi модулирующего действия серотонина на развитие индуцированного У. i апоптоза и пролиферацию лейкоцитов крови биомодели мыши
5.2. Изучение в модельной системе i vi влияния серотонина на развитие индуцированного V i, У i,
.ii апоптоза и пролиферацию лейкоцитов крови человека
ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ I VIV ВЛИЯНИЯ СЕРОТОНИНА НА
ПРОЦЕССЫ ПРОЛИФЕРАЦИИ И АПОПТОЗА, РЕАКТИВНОСТЬ КЛЕТОК ИММУНОФАГОЦИТАРНОЙ СИСТЕМЫ БИОМОДЕЛЕЙ В УСЛОВИЯХ ВАКЦИНАЦИИ У I V НИИЭГ, КАПСУЛЬНЫМ АНТИГЕНОМ ЧУМНОГО МИКРОБА
6.1. Изучение i viv влияния серотонина на процессы 4 пролиферации и апоптоза эукариотических клеток в условиях вакцинации У. i V НИИЭГ
6.2. Влияние серотонина на состояние ядерного хроматина и 8 лизосомального аппарата иммунокомпетентных клеток биомоделей
в условиях иммунизации У i V НИИЭГ
6.3. Изучение влияния серотонина на состояние ядерного хроматина и лизосомального аппарата лейкоцитов крови, клеток перитонеального экссудата экспериментальных животных в условиях иммунизации капсульным антигеном чумного микроба ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


На данный момент также отсутствуют какиелибо сведения о возможности применения серотонина в схеме лабораторной диагностики чумы для повышения эффективности выделения возбудителя чумы из исследуемого материала как контаминированиом, так и не контаминироваином сопутствующей микрофлорой. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ изучить влияние серотонина на рост, электрофоретический профиль белков, экспрессию поверхностных антигенов чумного микроба, а также индуцированный аноптоз и пролиферацию иммунокомпетентных клеток. Изучить влияние серотонина на скорость роста, перераспределение по клеточному циклу относительное содержание ДНК, морфометрические характеристики . V НИИЭГ , , и его изогенных штаммов . КМ8 , , , . Оценить возможность применения серотонина для повышения эффективности выделения возбудителя чумы бактериологическим методом из исследуемого материала, кон гаминированного сопутствующей микрофлорой. Изучить влияние серотонина на экспрессию диагностически значимых поверхностных антигенов капсульного антигена чумного микроба Ф1, активатора плазмииогена и электрофоретический профиль белков . Провести сравнительный анализ влияния серотонина на развитие индуцированного . С применением проточной цитофлуориметрии изучить i viv влияние серотонина на процессы аиогттоза и пролиферации им му некомпетентных клеток, состояние ядерного хроматина и лизосомального аппарата лейкоцитов крови, перитонеальных макрофагов биомодели мыши , нелинейные белые мыши в условиях иммунизации . V НИИЭГ, а также различными препаратами капсульного антигена чумного микроба Ф1. Впервые установлено, что серотонин стимулирует накопление биомассы . V НИИЭГ и бесплазмидного штамма У. КМ8 на ранних стадиях развития культур, индуцирует но данным проточной цитофлуориметрии увеличение числа клеток с интенсивной ДНКфлуоресценцией для К i V НИИЭГ в 2 раза, для i КМ8 в 1,8 раза. Получены новые сведения о влиянии серотонина на выделение чумного микроба из исследуемого материала, контаминироваиного посторонней микрофлорой. Показана эффективность применения серотонина на начальном этапе бактериологического исследования на чуму. С применением серотонина разработан способ выделения i бактериологическим методом из исследуемого материала, контаминироваиного сопутствующей микрофлорой, включая объекты внешней среды, позволяющий сократить до ч сроки биологического накопления возбудителя чумы и увеличить число колониеобразуюгцих единиц чумного микроба. Показано влияние серотонина на экспрессию видоспецифических антигенов чумного микроба капсульного антигена чумного микроба Ф1, активатора плазминогена, детектируемых с помощью коммерческих препаратов иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих чумных адсорбированных. Обнаружено увеличение процентного содержания клеток с повышенной интенсивностью свечения. Впервые выявлен ингибирующий эффект серотонина на синтез чумным микробом полипептида с молекулярной массой кДа, участвующего в формировании поверхностного заряда клетокипроявлении адгезивных свойств, в условиях культивирования на агаре Хоттингера 7,2 при С в течение ч. Впервые i vi и i viv с применением проточноцитофлуориметрического метода цитологического анализа установлено непосредственное участие серотонина в механизмах модуляции индуцированного У i и капсульным антигеном чумного микроба Ф1 апоптоза, изменений состояния ядерного хроматина и лизосомального аппарата лейкоцитов крови, перитонеальных макрофагов биомодсли. Серотонин в конценграции М в первые 6 ч замедляет i vi развитие индуцированного У i апоптоза лейкоцитов крови интактных биомоделей, что создает благоприятные условия для роста и размножения чумного микроба в организме хозяина и связано с влиянием антигенов, синтезируемых при С, в первую очередь капсульного антигена Ф1. В иммунном организме модулирующее действие серотонина проявляется лишь через ч и имеет противоположную направленность. Впервые получены новые данные о влиянии биогенного амина серотонина на развитие апоптоза лейкоцитов крови человека, индуцированного различными представителями рода ii У. У. i, У ii. Серотонин оказывает модулирующее действие на распределение лейкоцитов по клеточному циклу, изменяя соотношение в крови клеток, находящихся на стадиях апоптоза и пролиферации. Характер выявленных изменений зависит от вида иерсиний и их серовара.