Антигенная изменчивость дериватов полиовирусной вакцины

• Автор: Яковенко, Мария Леонидовна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 177 с. : ил.

1. ВВЕДЕНИЕ

Цель и задачи исследования

Научная новизна и практическая ценность работы

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Общие сведения о молекулярной организации полиовируса

2.1.1. Структура генома. И

2.1.2. Структура вириона.

2.2. Цикл репродукции полиовируса

2.2.1. Проникновение в клетку

2.2.2. Трансляция геномной РНК и протеолиз полипротеинапредшественника.

2.2.3. Репликация геномной РНК.

2.2.4. Сборка вирионов.
2.3. Особенности взаимодействия полиовируса с рецептором
2.3.1. Белок СО 5, структура и функции в клетке
2.3.2. Рецептор СО 5, взаимодействие с полиовирусом
2.4. Характеристика антигенных сайтов полиовируса.
2.4.1. Выявление и характеристика мутантных штаммов полиовируса, устойчивых к нейтрализации моноклональными антителами
2.4.2. Премирование и индукция иммунного ответа синтетическими пептидами, соответствующими определенным участкам капсидных белков полиовируса.
2.4.3. Определение локализации агтигенньх детерминант полиовируса на основании рентгеноструюурного анализа
2.5. Существование в природе ограниченного числа серотипов полиовируса.
2.6. Механизмы молекулярной эволюции полиовирусов
2.6.1. Механизмы изменчивости генома мутационная и рекомбинационная изменчивость.
2.6.2. Механизмы фиксации генетических изменений.
2.7. Полиовирус как этиологический агент полиомиелита.
2.7.1. Патогенез полиовирусной инфекции
2.7.2. Иммунный ответ на полиовирусную инфекцию
2.7.3. Заболеваемость полиомиелитом
2.8. Живая полиовирусная вакцина
2.8.1. Получение вакцинных штаммов для ОПВ.
2.8.2. Генетические детерминанты аттенуации вакцинных
штаммов
2.9. Молекулярная эпидемиология полиомиелита
2.9.1. Циркуляция диких штаммов полиовируса
2.9.2. Вакциннородственные штаммы полиовируса.
2 Программа глобальной ликвидации полиомиелита
. Эпидемиологический надзор за полиовирусами.
. Методы эпидемиологического надзора.
2 Природная антигенная изменчивость полиовирусов
. Антигенная изменчивость полиовирусов дикого
. Антигенная изменчивость вакциннородственных
полиовирусов.
Постановка задачи.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Коллекция исследованных вакциннородственных штаммов полиовируса.
3.2. Выделение полиовирусных изолятов.
3.3. Иммунологические методы исследования полиовирусных
изолятов
3.3.1. Межтиповая дифференциация определение серотипа
полиовирусного изолята
3.3.2. Внутритиповая дифференциация имунноферментный анализ с поликлональными антителами.
3.3.3. Определение профилей реактивности ОПВдериватов с моноклональными антителами.
3.3.4. Реакция нейтрализации для выявления антител к полиовирусу
3.3.5. Реакция кросснейтрализации с кроличьими поликлональными сыворотками
3.4. Молекулярногенетический анализ полиовирусных изолятов
3.4.1. Выделение тотальной РНК
3.4.2. Обратная транскрипция
3 Амплификация фрагментов вирусного генома методом
3.4.4. Электрофорез.
3.4.5. Секвенирование ДНК.
3.4.6. Анализ нуклеотидных и аминокислотных последовательностей с использованием компьютерных методов
4. РЕЗУЛЬТАТЫ.
4.1. Характер фиксации мутаций в исследованных участках геномов полиовирусных изолятов.
4.1.1. Мутации в антигенных районах капсидпых белков ОПВдериватов
4.1.2. Мутации, вне антигенных районов капсидпых белков ОПВдериватов.
4.2. ОПВдериваты профили реактивности с моноклональными антителами
4.2.1. Профили реактивности вакциннородственных штаммов серотипа 1 с моноклональными антителами.
4.2.2. Профили реактивности вакциниородствснных штаммов серотипа 2 с моноклональными антителами.
4.2.3. Чувствительность разных иммунологических методов, разработанных для характеристики антигенных свойств ОПВдериватов,
к изменениям в антигенных эпитопах.
4.3. Эффективность нейтрализации антигенноизмененных полиовирусных изолятов поликлональными сыворотками
5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
5.1. Механизмы генетической изменчивости полиовирусов и
антигенная изменчивость ОПВдериватов .
5.2. Особенности фиксации мутаций в АгО Iдериватов
5.3. Факторы фиксации мутаций в АгО ОПВдериватов
5.3.1. Антигенная изменчивость и способность ОПВдериватов уходить изпод иммунного ответа.
5.3.2. Антигенная изменчивость и различные процессы жизненного цикла вируса.
5.4. Биологические последствия антигенной изменчивости ОПВдериватов
5.5. Молекулярноэпидемиологическое значение антигенной
изменчивости ОПВдериватов
6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ВС Участвует в перестройке мембранных структур клетки и образовании мембранных везикул, в которых происходит синтез вирусной РНК . Входит в состав репликативного комплекса i , . В Вовлечен в процессы блокирования клеточного секреторного транспорта белков i, , перестройки мембранных структур клетки v , , изменения проницаемости плазматической мембраны . С Входит в состав репликативных комплексов i i, i , , . Необходим для синтеза РНКцепей , , участвует в образовании мембранных везикул , , и связан с вирусиндуцируемыми мембранными структурами vi , i , . Обладает РНКсвязывающей i , i , , АТРазной и азной активностями i , i i, i i, , способностью ингибировать протсолитичсскую активность 2Арго и ЗСрг0 . Влияет на процессы раздевания и сборки вируса i i, V . ЗАВ Ассоциирован с вирусиндуцируемыми мембранными везикулами ii , , , . Усиливает проницаемость плазматической мембраны , , . Взаимодействует с белками 3 и ЗР1, регулируя их ферментативную активность , , . Xi , . В комплексе с белками и взаимодействует с регуляторными элементами 5 и ЗНТО i , Xi , . ЗА Необходим для эффективного синтеза РНК i , . Ассоциирован с вируснндуцируемыми мембранными структурами . Усиливает проницаемость плазматической мембраны , . Блокирует транспорт клеточных белков из эндоплазматнческого ретикуллума в аппарат Гольджи, тем самым, возможно, ограничивая иммунный ответ на полиовирусную инфекцию i, . ЗВ Является терминальным белком V, ковалентно присоединен к 5концу вирусной геномной РНК и РНК . Взаимодействует с Xi . Участвует в протеолитическом процессинге полипротеинапредшественннка , . Входит в состав репликативного комплекса i , . В комплексе с белком ЗАВ i , Xi , и клеточным полицитидилсвязывающим белком 2 . ЗНТО, может способствовать циркуляризации РНК при репликации i, . Связывается с iэлементом репликации 2 i . Стимулирует процессы уридилирования V , , сборки вирусных частиц . Вовлечен в протеолитичсскнй процессинг полипротеинапредшественника Напесак , , . Участвует в подавлении клеточной транскрипции , ii , , , i , , и трансляции i , i , , , подавлении иммунного ответа на вирусную инфекцию v , . Обладает способностью связываться с iэлементом репликации 2 i , . Запускает программу апоптоза . РНКзависимая РНК полимераза далее, РНКполимераза также обладает хелнказной активностью . Вовлечена в уридилирование белка V , , . V1, V2, V3 и V4 рис. Третичные структуры белков V1, V2 и V3 топологически схожи полипептидная цепь формирует сердцевину , рбочонок , окруженный дополнительными структурными элементами рис. Интересно отметить, что для одинаковых капсидных белков, у полиовирусов трех серотипов прослеживается общность структуры не только сердцевин, но и концсвых участков и большинства петелевых районов . Схожесть сердцевин диктуется самой спецификой укладки полипептидной цепи в рбочонок, однако сходство менее упорядоченных районов свидетельствует о важности поддержания их специфической конформации на различных этапах жизненного цикла вируса, таких как взаимодействие с рецептором, раздевание, сборка вириона i . Необходимо также отметить, что в центре сердцевины белка V1, так называемом гидрофобном кармане, отмечено присутствие лиганда, представляющего собой молекулу жирной кислоты рис. Е i , . Связывание этого лиганда может влиять на стабильность интактной вирусной частицы. Используемые в качестве антивирусных препаратов специфические лиганды, при попадании в гидрофобный карман, препятствуют конформационным изменениям вириона, необходимым для эффективного проникновения вируса в клетку , . В противоположность белкам V1, V2 и V3, белок V4 имеет менее упорядоченную конформацию. Регулярным структурным элементом является короткий двуцепочечный антипараллельный слой вблизи конца , i , , . V4 ковалентно связан с остатком миристиновоЙ кислоты . Структурные протомеры каждый из которых образован белками V1, V2, V3 и V4 в составе непрерывной оболочки вириона скомпонованы следующим образом рис. ДЕ . Сконцевые участки и большинство соединяющих цепи петель в составе V1, V2 и V3 декорируют внешнюю поверхность вирусной частицы рис.