Функции цистеин-богатых белков гордеивирусов

• Автор: Елина, Наталия Эдгардовна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 144 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Взаимодействия растений с патогенами

Умолкание генов.

Умолкание генов механизм регуляции, характерный для

эукариот.

Инициация ЛБ, функции днРНК.

Системное распространение 8.

Стадии ПТУ Г
Общая схема деградации РНК в ходе ЛБ
Клеточные белки, принимающие участие в КБ.
Роль ИЗ у различных организмов
Супрессия умолкания генов вирусспсцифическими белками.
Супрессия ЛБ свойство вирусов, инфицирующих различные
организмы
Вирусы растений, способные подавлять ПТУГ
Обнаружение вирусных супрессоров ПТУГ
Супрессор ПТУГ потивирусов.
Супрессоры ПТУГ кукумовирусов
Супрессоры ПТУГ полеровирусов
Супрессоры ПТУГ клостеровирусов
Супрессор ПТУГ пеклу вирусов.
Супрессор ПТУГ Хвируса картофеля
Супрессоры ПТУГ томбусвирусов
Белок оболочки супрессор ПТУГ кармовирусов.
Супрессоры ПТУГ геминивирусов
Супрессоры ПТУГ тоспо и тенуивирусов.
Разнообразие супрессоров ПТУГ вирусов растений.
Супрессия ПТУГ и дальний транспорт вирусов
Гордеивирусы.
Организация генома представителей рода ivii
Цистеинбогатые белки гордеивирусов
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Реактивы.
Ферменты и наборы
Векторы для клонирования и бактериальные штаммы
Трансформация бактериальных клеток . i плазмидной ДИК
Выделение плазмидной ДНК из клеток . i.
Экспрессия рекомбинантных белков в клетках . i.
Трансформация бактериальных клеток . i плазмидной ДНК.
Выделение плазмидной ДНК из клеток А i.
Электрофорез в агарозном геле
Извлечение фрагментов ДНК из агарозы.
Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами.
Дсфосфорилирование плазмидной ДНК
Затупление концов фрагментов ДНК.
Лигирование фрагментов.
Секвенирование ДНК.
Амплификация фрагментов ДНК с помощью
полимеразной цепной реакции ГТЦР
Транскрипция i vi
Иммунодетекция белков
Приготовление тотальных препаратов РНК.
Блотгибридизация РНК
Растительный материал
Инокуляция растений
Агроинфильтрация.
Детекция в растениях . i
Иммуноферментный анализ.
Получение рекомбинантных плазмид.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Изучение влияния экспрессии белка ПЛВМ на развитие инфекции
Замена белка ВМЯ на соответствующий белок ПЛВМ приводит к
фенотипу v
Изучение влияния экспрессии гена ПЛВМ на накопление вирусных
белков и РНК ВШМЯ
Развитие вирусной инфекции ВШМЯ, несущего делецию гена
Белок НсРго вируса картофеля комплсмснтирует функцию дальнего
транспорта белка ВШМЯ.
Белок НсРго усиливает симптомы инфекции ВШМЯ
Белок НсРго подавляет развитие фенотипа v
Экспрессия белков ВШМЯ и ПЛВМ в геноме Хвируса картофеля
Способность белков ВШМЯ и ПЛВМ подавлять ПТУГ при
перекрестной защите
Способность белков ВШМЯ и ПЛВМ подавлять ПТУГ при
временной экспрессии генов в клетках . i
Мутагенез белка ПЛВМ
Экспрессия мутантных белков ПЛВМ в геноме Хвируса картофеля
Изучение влияния мутаций в белке ПЛВМ на его способность
подавлять ПТУГ.
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Несмотря на то, что исследованию специфической деградации РНК в последние годы уделяют большое внимание и многие аспекты этого явления уже достаточно хорошо изучены, остается неизвестным, чем обеспечивается распознавание последовательностей, предназначенных для деградации. Установлено, что необходимым условием для во всех организмах является наличие двунитевой РНК днРНК, которая может как индуцировать , так и выступать в качестве промежуточного продукта на определенных стадиях этого процесса V V, . Необходимость наличия днРНК для эффективного развития подтверждается в ряде экспериментов, в ходе которых растения трансформировали последовательностями, несущими инвертированные повторы, а их транскрипты имели комплементарные участки, т. РНК . i . . , . В таких растениях эффективно развивалось умолкание генов. В контрольных экспериментах, когда растения трансформировали последовательностью гена в прямой или обратной ориентации, явление умолкания генов возникало не всегда . С другой стороны, как уже упоминалось, ГГГУГ может быть вызвано трансгенами, кодирующими ген в прямой или обратной ориентации v . i . Предполагается, что в таких случаях транскрипты некоторых генов, например, гена хапконсинтазы или нитрит редукгазы, несут в себе комплементарные последовательности, т. РНК . . с помощью однонитевых РНК онРНК, обогащенных участками днРНК, противоречивы i . i . Образование днРНК на основе онРНК может также происходить с участием эндогенной РНКзависимой РНК полимеразы РзРп растений . i . РНК, образующаяся в ходе репликации вирусов, может также вызывать . Эта разновидность называется вирусиндуцированным умолканием генов ВИУГ. С помощью рекомбинантных вирусов, несущих участки или целые последовательности клеточных генов, можно вызывать ВИУГ этих генов у растений . Таким образом, последовательность трансгена, транскрипт которой содержит протяженные участки днРНК изза того, что этот трансген содержит инвертированные повторы, является фактором инициации . Вирусы, имеющие двунитевую репликативную форму, также способны индуцировать . Кроме того, может быть вызвана последовательностью, несущей непротяженные участки днРНК, например, трансгенов, кодирующих ген в прямой или обратной ориентации. Экспериментальные данные указывают на то, что в последнем случае развивается не всегда, а если развивается, то с меньшей эффективностью, чем в первом случае. В связи с этим, факторы инициации , т. . Vi . i, . РНК, необходимая для инициации , может также вызывать метилирование последовательное гей ДНК. Так, у табака, несущего последовательность вироида веретеновидности клубней картофеля, репликация этого вироида вызывает метилирование последовательности трансгсна . Потеке и потивирусы . . РНК . . РНКзависимому метилированию ДНК. Т.к. РНК может вызывать как ПТУ Г, так и РНКзависимое метилирование ДНК в растениях, предполагают, что процессы транскрипционного и посттранскрипционного умолкания генов связаны i . Вне зависимости от способа синтеза днРНК на основе онРНК, до сих пор неизвестно, как клетка распознает чужеродную последовательность, предназначенную для деградации. Высказывают предположения, что для этого необходимо, чтобы количество РНК, несущих чужеродную последовательность, превысило некий пороговый уровень. Это предположение согласуется с данными о том, что часто подвергаются трансгенные локусы, транскрибирующиеся с высокой эффективностью. В случае вирусной инфекции количество вирусспецифических РНК также превышает некий пороговый уровень, что приводит к i , i . . Для инициации также важна степень гомологии последовательностей, но она может быть различной в разных случаях . . . i .