Контроль трансляции РНК нуклеопротеидных комплексов, участвующих в межклеточной транслокации вирусного генома

• Автор: Козловский, Станислав Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Дальний транспорт вирусов

Межклеточный транспорт вирусов

МЕЖКЛЕТОЧНЫЙ ТРАНСПОРТ ВТМ

Транспортный белок ВТМ общие

представления

Внутриклеточная локализация ТБ ВТМ

Транспортный белок ВТМ модифицирует

плазмодесмы инфицированных клеток
Взаимодействие ТБ ВТМ с нуклеиновыми
кислотами
ФосФорилирование ТБ ВТМ
Взаимодействие ТБ с цитоскслетом гипотеза внутриклеточного транспорта.
Функциональные домены Т1 ВТМ
МЕЖКЛЕТОЧНЫЙ ТРАНСПОРТ ТГЬ
СОДЕРЖАЩИХ ВИРУСОВ
Тройной блок генов
Внутриклеточная локализация белков.
кодируемых первой ОРТ ТГЬ
Взаимодействие белков, кодируемых первой ОРТ ТГБ, с плазмодесмами
Связывание и гидролиз НТФ белками
продуктами первой ОРТ ТГБ ТБП
РНКсвязывающая активность белков
продуктов первой ОРТ ТГБ ТБ1
Сравнение белков, кодируемых первой ОРТ ТГБ
у различных групп вирусов функциональные домены Iбелков
Белки, кодируемые второй и третьей ОРТ ТГБ
Роль белка оболочки в межклеточном транспорте
ТГБсодержащих вирусов транспортная форма потексвирусов
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Выделение плазмидной ДК
Рестрикция ДНК
Транскрипция i vi
Выделение препарата Хвируса картофеля
Экспрессия рекомбинантных белков
Хроматографическая очистка Тиск
рекомбинантных белков на i2нитрилотриацетатной агарозе
Выделение препаратов различных фракций из
гомогената листьев . и .i
1. Получение препарата фракции клеточных
2. Получение препарата растворимой
цитоплазматической фракции
Фоефорилирование i vi
Электрофорез РНК в агарозном геле
Электрофорез РНК в ПААГ
Трансляция в бесклсточной белоксинтезирующей системе
Трансляция i vi в лизате рстикулоцитов
кролика
Трансляция i vi в экстракте зародышей
пшеницы
Электрофоретический анализ белков в
денатурирующем полиакриламидном геле
Получение РНПкомплексов
Анализ РНП на нитроцеллюлозных фильтрах
Обработка РНКазами РНПкомплексов
Выделение и заражение протопластов
Определение вируса в протопластах методом
иммуноферментного анализа.
Заражение растений вирусными РНК и РНП
комплексами.
Иммунопреципитация
Иммуноэлектронная микроскопия комплексов
ХВКТБ1 ХВК
РЕЗУЛЬТАТЫ
. Фосфорилирование ТБ ВТМ переводит
комплекс РНК ВТМТБ ВТМ в транслируемую форму
2. Транспортный белок ТБ 1 Хвируса картофеля активирует трансляцию РНК ХВК в составе вирусных частиц i vi
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Взаимодействие ТБ с цитоскслетом гипотеза внутриклеточного транспорта. Внутриклеточная локализация белков. . и . Одной из интересных проблем современной вирусологии растений является механизм межклеточного транспорта вирусной инфекции. В момент заражения растения вирусом только небольшое число клеток оказывается инфицированным. Для развития инфекции необходимо, чтобы вирус перемещался от пораженных клеток к здоровым. Межклеточный ближний транспорт вирусной инфекции в растениях осуществляется преимущественно через плазмодесмы ПД, а перенос вирусного инфекционного материала на большие расстояния т. Долгое время считалось, что межклеточный транспорт вирусов это генетически пассивный процесс, теперь совершенно очевидно, что он обусловлен транспортной функцией вирусного генома и осуществляется при помощи одного или нескольких вирусспецифических транспортных белков ТБ. Именно транспортные белки играют ключевую роль в переносе вирусного генома внутри инфицированной клетки к плазмодесмам, далее в распространении вирусной инфекции через ПД по клеткам паренхимы и, в случае некоторых вирусов, в транспорте вирусного генома по сосудам флоэмы i . Таким образом, функционирование транспортных белков является необходимым условием развития инфекционного процесса. Очевидно, что прогресс в исследовании вирусных ТБ, их взаимодействий с вирусными нуклеиновыми кислотами и различными вирусными и клеточными белками открывает широкие перспективы для создания новых методов борьбы с вирусными инфекциями растений. Одним из объектов настоящей работы является ТБ вируса табачной мозаики ВТМ массой кДа. Предполагается, что межклеточный транспорт ВТМ через плазмодесмы происходит в форме рибонуклсопротеидных комплексов РНП, в состав которых входят РНК ВТМ и ТБ ВТМ iv i, . В нашей лаборатории было показано, что комплекс РНК ВТМТБ ВТМ является нетранслируемым i vi и неинфекционным в изолированных протопластах, будучи, однако, инфекционным по отношению к целому растению i v . Это позволяет предположить, что именно в процессе транслокации через плазмодесмы в изолированных протопластах этот этап отсутствует происходит конверсия РНПкомплексов из нетранслируемой формы в транслируемую. Было высказано предположение v . IIкомплексов в транслируемое состояние может быть связан с фосфорилированием транспортного белка. В отличие от ВТМ, межклеточный транспорт Хвируса картофеля осуществляется тремя неструктурными белками, кодируемыми тройным блоком частично перекрывающихся генов ТБГ v . Кроме того, межклеточный транспорт ХВК и других потексвирусов зависит от белка оболочки, т. ХВК участвуют четыре вирусспецифических белка. Геномная РНК потексвирусов транспортируется через плазмодесмы в виде вирионов . ТВ 1 белок, кодируемый первым геном ТБГ . Можно предположить, что РНК ХВК в составе вирусных частиц подобно РНК ВТМ в комплексе с ТБ ВТМ нетранслируема i vi.