Оптимизация производства вакцины герпетической культуральной инактивированной сухой, на новом клеточном субстрате перевиваемой линии клеток Vero B.

• Автор: Бархалёва, Оксана Александровна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 126 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Инфекции вызываемые вирусами герпеса простого.

1.2. Вакцины вирусные, профилактические и лечебные.

1.3.Стандартизация и методы контроля качества вирусных вакцин .

Глава И. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

2.1. Материалы.

2.2. Методы

3. Результаты исследования и обсуждение

3.1. Получение рабочего банка клеток Уего В и его аттестация.

3.2. Восстановление культуры клеток Уего В после криоконсервации
3.3. Адаптация ВГП типа 1 штамм УС, ВГ типа 2 штамм ВЫ
к перевиваемой линии клеток Уего В, получение штамм, запаса
3.4. Исследование нуклеотидной последовательности ВГП типа 1 шт. УС и типа 2 шт. ВН ПЦР анализом
с последующим сиквенсом продуктов амплификации
3.5. Получение маточного и посевного запаса ВГП типа 1 шт. УС
и типа 2 шт. ВН на перевиваемой культуре клеток Уего В
3.6. Разработка технологии получения и контроль вакцины против вируса герпеса на перевиваемой
линии клеток Уего В
3.6.1. Определение содержания ДНК клеточного субстрата
в герпетической вакцине.
3.6.2. Изучение специфической активности вакцины Витагсрпавак
3.6.3. Определение специфической активности вакцин герпетических методом ИФА.
3.7. Сравнительное лабораторное изучение вакцин
герпетических, полученных на разных клеточных субстратах
3.7.1. Биохимические показатели качества вакцин
3.7.2. Специфическая активность вакцин
3.7.3. Содержание бактериальных эндотоксинов.
3.8. Сравнительное клиническое изучение вакцин
против вируса герпеса простого
ВЫВОДЫ .
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ВОЗ в процессе отбора и изучения различных гетероплоидных клеточных линий рекомендовала для производства вирусных вакцин клетки Усго культура клеток почек африканской зеленой мартышки. В России эта линия клеток аттестована как перевиваемая линия клеток Уего В для производства вирусных вакцин, однако вакцина против герпеса простого 1 и 2 типов ВИТАГЕРПАВАК является, первой для производства которой были использованы клетки Уего В. В связи с этим, перед нами была поставлена цель научно обосновать, оптимизировать и стандартизировать технологию получения инактивированной культуральной вакцины против герпеса простого 1 и 2 типов при использовании нового субстрата перевиваемой линии клеток Уего В, а так же разработать метод контроля специфической активности вакцины с применением иммуноферментного анализа ИФА. В клинических испытаниях при вакцинотерапии различных форм рецидивирующей герпетической инфекции в сравнении с вакциной Герповакс на культуре клеток куриных эмбрионов подтвердить хорошую переносимость, безопасность и лечебную эффективность вакцины Витагерпавак, приготовленной на новом клеточном субстрате перевиваемой линии клеток Уего В. НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. Впервые показана возможность применения аттестованной Национальным органом контроля МИБП ГИСК им. Л.А. Тарасевича перевиваемой линии клеток Уего В в условиях отечественного вакцинного производства. Получен и аттестован в соответствии с международными требованиями к субстратам для приготовления вирусных вакцин рабочий производственный банк перевиваемой линии клеток Уего В. Проведена адаптация путем последовательного пассирования штаммов ВГП к культуре перевиваемых клеток Уего В без потери основных свойств вируса. В шифрованных сравнительных клинических испытаниях подтверждена хорошая переносимость, безопасность и лечебная эффективность вакцины Витагерпавак, приготовленной на новом клеточном субстрате клетках Уего В, не уступающая таковой вакцине, полученной на первичнотрипсинизированных клетках куриного эмбриона. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Научно обоснована возможность применения гетероплоидных клеток Уего В для производства вирусных вакцин без изменения основных свойств вируса. Впервые в РФ, совместно со специалистами НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, проведено молекулярногенетическое изучение производственных штаммов вируса герпеса простого типов 1 и 2, адаптированных к перевиваемой линии клеток Уего В. Экспериментально доказана целесообразность применения метода ИФА для оценки специфической активности и стандартности вакцины против герпеса простого. В условиях клинического шифрованного опыта впервые показана безопасность, хорошая переносимость и лечебная эффективность вакцины против ВГП 1 и 2 типов Витагерпавак, полученной на перевиваемой линии клеток Уего В, не уступающая таковой вакцине производимой на культуре псрвичпотрипсинизированных клеток куриного эмбриона. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Разработана и стандартизована технология производства вакцины герпетической культуральной инактивированной сухой Витагерпавак на новом клеточном субстрате перевиваемой линии клеток Уего В. На препарат оформлена и утверждена Росздравнадзором нормативная документация Фармакопейная статья, Инструкция по применению. Получено Регистрационное удостоверение М3 РФ, Аттестат производства. На предприятии ЗАО ФИРМАВИТАФАРМА налажено серийное производство вакцины, к настоящему времени выпущено более серий. Все разработки и результаты исследований, представленные в работе, послужили обоснованием для внедрения вакцины Витагерпавак в медицинскую практику. ЛИЧНЫЙ ВКЛАД АВТОРА. Работа выполнена на базе ЗАО ФИРМАВИТАФАРМА и в лаборатории арбовирусных инфекций, риккетсиозов и ВИЧинфекции ГИСК им. Л.А. Тарасевича при непосредственном участии автора диссертации создание рабочего банка клеток Уего В, адаптация штаммов ВГП типа 1 шт. УС и типа 2 шт. В И к культуре клеток Уего В, получение вирусной биомассы и серий вакцины. Формирование Программы клинических испытаний, подготовка серий вакцины к клиническим испытаниям. Модификация метода определения специфической активности вакцины с использованием метода ИФА.