Характеристика геномов рекомбинантных штаммов вируса гриппа типа А различной репродукционной активности

• Автор: Фураева, Валентина Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 127 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение. 5

Насть I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. 9

Глава I. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТРУКТУРНЫХ

КОМПОНЕНТОВ ВйРИОНА ВИРУСА ГРИППА И ИХ

СВОЙСТВ 9

Глава 2. СТРУКТУРА ГЕНОМА ВИРУСА ГРИППА И ЕГО

СВЯЗЬ С ШОЛОГИЧЕСШИ СВОЙСТВАМИ

2.1. Доказательства фрагментарности генома

вируса гриппа

2.2. Кодирующая пункция индивидуальных фрагментов РНК вируса гриппа

Глава 3. ИЗМЕНЧИВОСТЬ ВИРУСОВ ГРИППА ПРИ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ РЕКОМБИНАЦИИ.
3.1. Наследование биологических признаков вируса гриппа при генетической рекомбинации
3.2. Генетическая детерминация биологических
свойств вируса гриппа
3.2.1. Генетическая детерминация признака
патогенности вируса гриппа. . . .
3.2.2. генетическая детерминация признака высокой репродукционной активности
.РА штаммов вируса гриппа .
Часть П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава I. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Вирусы.
1.1. Накопление вирусов на куриных эмбрионах .
1.2. Определение инфекционной и гемагглютинирующек активности вируса.
Стр.
1.3. Определение антигенной структуры гемагглютинина и нейраминщазы.
1.4. Определение токсигенности вируса для мышей
1.5. Получение рекомбинантов с измененной репродукционном активностью
1.6. Концентрация и очистка вируса.
1.7. Электрофорез вирионных белков в полиакриламидном геле ПААГ
1.8. Выделение РНК.
1.9. Электрофорез одноцепочечных вирионных РНК
в полиакриламидном геле ПААГ
Глава 2. Е0Р МОДЕМ И МЕТОДА ОЦЕНКИ НАСЛЕДОВАНИЯ ШОТОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ВИРУСА ТРИППА ПРИ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ РЕКОМБИНАЦИИ.
2.1. Электрофоретический анализ одноцепочечных вирионных РНК штаммов вируса гриппа
2.2. Сравнительная характеристика полипептвдного состава вгоусов гриппа 8 и
АТехас.
Глава 3. МОЛЕКУЛЯРНОШОЛОПТЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ
РЕКОМБИНАНТОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ПРИ СКРЕЩИВАНИИ.
ВИРУСОВ ГРИППА 8 И АТЕХАС . . .
3.1. Биологические, свойства родительских и рекомбинантных штаммов
3.1.1. Антигенная специфичность гемагглютинша и нейраминидазы
3.1.2. Иншеюхионная и гемагглютинврующая активность в куриных эмбрионах . . .
3.1.3. Токсигенность для белых мышей. . . .
3.2. Электрофоретический анализ РНК родительских
к рекомбинантных штаммов вируса гриппа. . .
3.3. Корреляция мевду структурой генома рекомбинантов и наследованием ш признаков рд и Тм, присущих исходным родительским вирусам.
Глава 4. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ДЕТЕШИНАЦИЯ ПРИЗНАКА РА . . .
4.1. Анализ геномов высокорепродуктивных рекомбинантов из скрещивания вируса гриппа Арда наш с эпидемическими штаммами
АЛенинград НЗН2 и АГфа НШ1. .
4.2. Передача признака РА в двух последовательных опытах генетической рекомбинации вирусов гриппа А.
4.3. Получение низкорепродуктивных вариантов вируса тршпа и изучение их геномов
Пасть 1П.
Заключение.
Практические рекомендации
Выводы.
Список литературы


Широкое применение в вакщшопрофилактике гриппа рекомбинантных штаммов с высоким уровнем репродукционной активности в куриных эмбрионах, используемых для приготовления инактивированных вакцин к вирусных диагностикумов, обусловило необходимость установления оптимального набора генов, необходимых для реализации признака репродукционная активность, учитывая, что сведения по этому вопросу в литературе разноречины ,9,3 . В работе предпринята попытка изучить характер наследования при генетической рекомбинации признака высокой репродукционной активности штаммов вируса гриппа в куриных эмбрионах. В качестве модели были использованы высокорепродуктивные рекомбинанты, а также низкопродуктивные клоны вируса гриппа, полученные в лаборатории генетики, руководголой Н. Цель и задачи исследования. РА и Тм со структурными особенностями геномов рекомбинантов. Научная новизна и практическая значимость работы, основные положения, выносимые на защиту. На модели оригинального набора рекомбинантных штаммов вируса гриппа А был изучен характер наследования рекомбинантными штаммами признаков токсигенности для мышей Тм и высокой репродукционной активности в куриных эмбрионах РА. В результате генотипирования набора рекомбинантов, наследующих НА и ыа от слаботоксигенного родительского штамма были получены данные, подтверждающие влияние генов, кодирующих поверхностные белки вируса гриппа на уровень токсигенной активности изученных рекомбинантов. Тм. При выяснении генетической детерминация признака РА в куриных эмбрионах штаммов вируса гриппа нами впервые была прослежена последовательная передача вышеуказанного признака в двух последовательных опытах генетической рекомбинации. При этом удалось выявить достаточно четкую корреляцию между приобретением рекомбинантами способности к повышенной репродукции в куриных эмбрионах и наследованием ши Мгена от высокорепродуктивного родительского штамма. Анализ геномов набора рекомбинантов с антигенным профилем НЮТ и НЗИ2, проведенный дополнительно к вышеуказанным Экспериментам, позволшг нам четко показать, что необходимым условием для проявления штаммами высокой репродукционной активности в куриных эмбрионах является наличие в их геномах Мгена от высокорепродуктивного родительского вщэуса. Выявление коррелятивной связи между Мгеном от высокоурожайного родительского штамма в геномах рекомбинантов и признаком РА может быть использовано при отборе высокорепродуктивных рекомбинантов в практике лабораторных исследований и особенно при подготовке штаммов, предназначенных для производства инактивированных гриппозных вакцин и вирусных диагностикумов. Апробация работы. ЛИЙЭМ им. Пастера Минздрава РСФСР г, а также представлены на выставке научнотехнического творчества молодежи НТТМ Петроградского района г. Ленинграда, кроме того, результаты исследований были доложены на заседании отдела молекулярной биологии и генетики вирусов г. ОРЗ ВНИИ гриппа Минздрава СССР г. Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 печатных работы. Оформлено и внедрено 2 рационализаторских предложения. Выполненная работа является частью плановой тематики научноисследовательских работ ВНИИ гриппа Минздрава СССР, посвященной молекулярнобиологическому изучению вирусов гриппа Аз государственной регистрации 0. Часть I. Глава X. Вирусы гриппа типов А, В и С относятся к семейству ортомиксовирусов, вклгачащему в себя РЖ содержащие вирусы позвоночных , . Мы рассмотрит. Кроме того, вирусы гриппа типа А более полно изучены по сравнешпо с вирусами гриппа типов В и С. Типичные вйриош вируса гршпа А представляют собой частицы круглой или продолговатой формы, диаметром 0 нм, содержащие примерно 1 РНК, 7 углеводов, липидов и белков ,5 . В составе вириона вируса гриппа обнаруживаются следующие структурные полипептиды три полипептида полимеразнотранскриптазного комплекса Р1, Р2, РЗ, гемагглютинин НА, яейраминидаза 4та , нуклеопротеин ИР и мембранный М белок. В процессе репликации вируса в зараженной клетке синтезируется, 1фогле того, два вирусспецифических неструктурных эдз белка, которые не встраиваются в вирион ,,6 . Один из самых крупных . НА. На его долю приходится более всех белков. Р Внутренние Негликозилированы. НАО 00 Белок оболочки вириона Глккопротеид. Содержит углеводов. НА Гликопротеид. Консервативен.