ШТАММ "ОРЛОВ – Д" ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИВОЙ АТТЕНУИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КРАСНУХИ

• Автор: Лаврентьева, Ирина Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 269 с. : 59 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ВИРУС КРАСНУХИ МОЛЕКУЛЯРНО БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА, ВАКЦИНЫ НА ЕГО ОСНОВЕ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Морфология, струкгурнофункциональная организация генома.

1.2. Чувствительность клеточных культур и лабораторных

животных к вирусу краснухи.

1.3. Антигенная и генетическая характеристика вируса краснухи.

1.4. Лабораторные методы определения вирусных антигенов и

специфических антител

1.5. Влияние стратегии вакцинации против краснухи на эпидемический

процесс и профилактику СВК.

1.5.1. Эпидемиологические особенности краснухи в довакцинальный
период.
1.5.2. Врожденная краснуха.
1.5.3. Эффективность профилактики СВК в зависимости
от стратегии вакцинации.
1.6. Штаммы вируса краснухи для живой аттенуированной вакцины
1.7. Моно и ассоциированные препараты для профилакгики краснухи . .
1.8. Вакцинный штамм Орлов
1.9. Заключение.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА 3. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭПИДЕМИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ ВИРУСА КРАСНУХИ. ПОЛУЧЕНИЕ ШТАММА ОРЛОВД
3.1. Генетическая характеристика штаммов и изолятов вируса краснухи
в современный период
3.2. Филогенетические изменения вируса краснухи в период вакцинопрофилактики инфекции
3.3. Получение и лабораторное тестирование штамма ОрловД
3.3.1. Чувствительность различных линий диплоидных клеток человека
к вирусу краснухи.
3.3.2. Использование диплоидной линии клеток М для получения штамма вируса краснухи ОрловД
3.4. Сравнительная молекулярногенетическая характеристика штаммов вируса краснухи Vi Я А 3 и ОрловД.
3.5. Заключение.
ГЛАВА 4. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИВОЙ АГГЕНУИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КРАСНУХИ НА ОСНОВЕ ШТАММА ОРЛОВД
И ДИПЛОИДНОЙ ЛИНИИ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА М
4. 1. Диплоидная линия клеток М как потенциальный тканевой
субстрат для производства вакцины против краснухи
4.1.1. Чувствительность линии клеток М в фазе активного роста
к вирусам краснухи, кори и эпидемического паротита.
4.1.2. Устойчивость линии клеток М к криоконсервации
4.1.3. Определение стабильности кариотипа и отсутствия способности
к гетеротрансплантации линии клеток М.
4.2. Отработка технологических характеристик репродукции штамма
ОрловД в культуре клеток М.
4.2.1. Определение оптимальной множественности инфицирования и динамики репродукции штамма ОрловД в клетках М
4.2.2. Стабильность лиофилизированного штамма ОрловД в
условиях длительного хранения
4.3. Определение вариабельности молекулярногенетических свойств
штамма ОрловД по лабораторным и генетическим маркерам
4.3.1. Определение фенотипа вариантов штамма Орлов
4.3.2. Определение генетических маркеров аттенуации штамма
Орлов.
4.3.3. Генетическая характеристика вариантов штамма Орлов, адаптированных к разным тканевым субстратам.
4.4. Заключение.
ГЛАВА 5. ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ШТАММА ОРЛОВД В ОПЫТЕ НА ОБЕЗЬЯНАХ МАКАКАРЕЗУС.
5.1. Определение специфической безопасности штамма
5.2. Определение специфической активности штамма
5.3. Определение иммунологической безопасности штамма.
5.4 Заключение.
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ И ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ПРИЛОЖЕНИЯ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
А аденин
АА аминокислотный остаток
аланин
С цитозин
С цистеин
аспарагиновая кислота
Е глютаминовая кислота
I Пе изолейцин
I иммуноглобулины класса А
I иммуноглобулины класса
I иммуноглобулины класса М
гуанин
Н i гистидин
лейцин
аспарагин
Р пролин
iv i способность размножаться при опре деленной температуре серии Т тимин Т треонин
V Уа1валин У Туг тирозин
ВОЗ Всемирная организация здравоохранения
ГИСК Государственный институт стандартизации и контроля
ИФА иммуноферментный анализ
кД килодальтон
МЕ международные единицы
МИ множественность инфицирования
НИИЭМ научноисследовательский институт эпидемиологии и микробиологии
Нк нуклеотид
ПААГ полиакриламидный гель
ППК первичнотрипсинизированная культура клеток почки кролика
П.о. пара оснований
РНК рибонуклеиновая кислота
РТГА реакция торможения гемагглютинации
СВК синдром врожденной краснухи
СГТ средняя геометрическая титра
ТЦД пятидесятипроцентная тканевая цитопатогенная доза ПТДР полимеразная цепная реакция
ЦГСЭН центр государственного санитарноэпидемиологического надзора ЦНС центральная нервная система
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Выход инфекционных вирусных частиц с апикальной поверхности может существенно облегчать передачу вируса от человека к человеку и, таким образом, способствовать распространению инфекции. В то же время базолатеральная секреция может иметь значение для распространения инфекции в данном микроорганизме или же для последующей трансплацеитарной передачи вируса. ДИчастицы. ДИчастицы при инфицировании культуры клеток 2 штаммом , модифицированным методом гемадсорбции. Формирование ДИчастиц при совместном культивировании разных штаммов вируса краснухи в клетках отмечено и другими авторами 5. Я. Я. Цилинский рассматривал ДИчастицы как универсальных хранителей запасов наследственной изменчивости вирусов 5. Чувствительность клеточных культур и лабораторных животных к вирусу краснухи. Репродукцию вируса краснухи i vi обеспечивает ряд первичных, полу перевиваемых диплоидных и перевиваемых клеточных культур птичьего, животного и человеческого происхождения. Описана способность вируса реплицироваться i viv в мононуклеарных клетках крови человека, макрофагах и лимфоцитах в органной культуре клеток синовиальной суставной оболочки эмбриона человека , 3, 3, 7. Однако цитодеструктивное действие вируса проявляется в весьма ограниченном числе клеточных культур. Из первичных это клетки почки кролика, клетки щитовидной железы и амниона человека, из перевиваемых клетки почки зеленой мартышки V, почки кролика , , почки хомяка ВНК 2. Уровень репродукции вируса краснухи i vi обычно не превышает 3 6ТЦД . ТЦД 0,5 мл использование диплоидных линий клеток легкого эмбриона человека для культивирования вируса позволяет регулярно получать вирусные сборы с инфекционной активностью 6,0 ТЦД зо0,5 мл. Такой же уровень репродукции вируса обеспе1ншают перевиваемые клетки почки хомяка ВНК. Использование роллерного культивирования или микроносителей позволяет в 0 раз повысить выход инфекционного вируса 7. Особенностью репродукции вируса краснухи i vi является его способность вызывать нелитическую продуктивную инфекцию клеток, которая может принимать хронический характер. Персистентную инфекцию удавалось смоделировать в перевиваемых клетках человека, клетках V. Инфицированные вирусом краснухи клетки приобретают устойчивость к суперинфекции другими вирусами при этом в ряде клеточных культур , ВПК вирус способен образовывать бляшки. Эта свойства вируса краснухи феномен интерференции и бляшкообразования могут быть использованы для определения его инфекционной активности. Единственный природный хозяин вируса краснухи человек. Тем не менее ряд лабораторных животных отвечают на инфицирование вирусом краснухи выработкой вируспецифических антител. А.И. Нифонтова исследовала панель лабораторных животных кролики, морские свинки, петухи, телята, белые крысы, бараны на способность индуцировать красиухоспецифичсские антитела. Сыворотки крови этих же животных содержали и наименьшее количество ингибиторов . Наиболее адекватной лабораторной моделью для изучения вируса краснухи являются приматы. Вирус краснухи патогенен, в частности, для обезьян Масасса и Масасса , чувствительных к интраназальному, внутримышечному и внутривенному заражению. Патонегез заболевания, вызываемого возбудителем краснухи, сходен с таковым у человека по таким параметрам как продолжительность инкубационного периода и вирусовыделения, натичие вирусемии, динамика формирования вирусспецифических антител 8. Значение этого вида лабораторных животных в создании противовирусной вакцины против полиомиелита, в доклинической оценке вакцинных штаммов для живых противовирусных вакцин, в том числе против краснухи, отмечено в ряде работ , . Согласно действующим нормативным документам, оценка на обезьянах макакарсзус остаточной нейровирулентности штаммов для живых вакцин обязательный этап доклинического изучения новых иммунобиологических препаратов . Характерной особенностью вируса краснухи является высокое антигенное родство различных штаммов, выделенных в разных регионах мира. Данный факт был описан как зарубежными, так и отечественными авторами.