Антигенная структура и анализ межштаммовых различий парвовирусов плотоядных

• Автор: Вахромеева, Виктория Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 164 с. : ил

Введение
давать только количественные различия в уроне нейтрализации либо уровне задержке гемадсорбции.
По этим причинам исследование этого вопроса реально провести только на уровне моноклональных антител. В связи с этим и были сформулированы цель и задачи нашей диссертационной работы.

4.2. Цель и задачи исследований

Целью работы было провести изучение степени антигенной гетерогенности штаммов парвовирусов плотоядных с использованием моноклональных антител.

Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи.

1. Приготовить панель моноклональных антител к структурным белкам штаммов парвовирусов плотоядных, выделенных от животных различных видов.
2. Изучить специфичность полученных моноклональных антител в ТФ ИФА с различными штаммами парвовирусов плотоядных и парвовирусов других видов животных и птиц.
3. Определить с использованием отобранных моноклональных антител степень антигенной гетерогенности штаммов вирусов плотоядных, выделенных от различных животных.
4. Если антигенная гетерогенность у штаммов парвовирусов будет установлена, то создать и испытать метод субтииировання штаммов парвовирусов плотоядных.

4.3. Научная новизна работы

Научная новизна работы заключена в получении новых данных по антигенной гетерогенности парвовирусов плотоядных, в частности показано, что различные штаммы парвовирусов плотоядных животных различаются между собой в иммунологическом плане по отдельным антигенным детерминантам. Установлено, что парвовирусы плотоядных, циркулирующие на одном и том же виде животных, могут быть идентичны по составу антигенных детерминант, а могут и различаться по нему вплоть до такого уровня, когда два различных штамма не имеют ни одной общей детерминанты, экспонированной на поверхности вирионов. Показано, что парвовирусы плото
Веиие
ядных почти не имеют антигенных перекрестов с парвовирусами птиц и свиней по антигенным детерминантам, экспонированным на поверхности вирионов.
4.4. Практическая значимость результатов
В результате работы создан набор из моноклональных антител к парвовирусам плотоядных. На основе семи из них разработан метод субтипирования штаммов парвовирусов плотоядных.
4.5. Основные положения, выносимые на защиту
1. Парвовирусы плотоядных обладают антигенной гетерогенностью, выражающейся в том, что различные штаммы парвовирусов обладают различающимся набором антигенных детерминант поверхностных белков вирионов.
2. Следствием антигенной гетерогенности является то, что нейтрализация их сыворотками, полученными на один из штаммов наиболее эффективна именно с этим штаммом и тем менее эффективна с другими штаммами, чем более выражены различия этих штаммов, выявляемые с использованием моноклональных антител.
3. Результаты иммунологического анализа штаммов парвовирусов плотоядных показывают, что циркулирующие у норок и собак штаммы разбиваются на два сероподтипа, следовательно, высокоэффективные вакцины против парвовирозов этих животных должны быть двухвалентными по отношению к штаммам парвовирусов, то есть инактивированные вакцины должны включать антигенный материал, полученный по крайней мере из двух штаммов, относящихся к разным сероподтипом, а живые вакцины два вакцинных штамма парвовирусов, относящихся к разным сероподтнпам.
4.6. Апробации результатов
Материалы исследований были заслушаны и обсуждены на международной конференции г. Москва, г., лабораторном совещании научных сотрудников г. Покров г., межлабораторной апробации диссертации г. Покров г
Введение


В состав вириона латентного вируса крыс Килхема, который является типовым представителем рода Рагуоугиз, входят три полипептида УР1, УР2, УРЗ с молекулярными массами x3, x3 и x3 Да. Парвовирусы термостабильны, устойчивы к действию липидорастворителей и в кислой среде. Структура семейства парвовирусов показана в Табл. В состав вирионов парвовирусов входят одноцепочечные молекулы ДНК, но в различных вирнонах могут присутствовать нити разной полярности как , так и В относительном составе популяции цепь может отсутствовать или иметься в количестве не превышающем таковое цепи. При выделении ДНК одноцепочечные молекулы могут спонтанно гибридизоваться, давая двуспиральные молекулы. ДНК аденонезависимых парвовирусов неинфекционна, но нуклеиновой кислотой аденосателлитных парвовирусов можно трансфецировать клетки, зараженные аденовирусом помощником, в результате чего образуется полноценное потомство аденосателлита. Парвовирусы, поражающие один какойлибо вид животных, либо близкие виды, могут иметь серологическое родство, как, например, парвовирусы рьзунов, обнаруживающие родство в реакциях нейтрализации и иммунофлуоресценции, либо не обладать никаким серологическим родством, как, например, вирус Алеутской болезни норок и вирус инфекционного энтерита норок. Таблица 1. Структура семейства vvii. Парвовирусы для которых совершенно четко установлен вид животногохозяина могут вызывать переболевапие той или иной тяжести у других родственных или нс родственных видов, например вирусы мышей и крыс Н1, НЗ, ЯУ, Х и МВМ при введении их хомякам вызывают видимую патологию. Характер ее зависит от возраста зараженного животного у новорожденных хомяков болезнь протекает молниеносно с уровнем летальности близким к 0. Ятя парвовирусов крупного рогатого скота, свиней, птиц характерно широкое распространение в природе и латентное носительство у взрослых животных. Они активно размножаются в эмбриональных культурах клеток млекопитающих и тканях плодов, вызывая различные нарушения беременности и поражения самых разных тканей плода, ведущие, в зависимости от его возраста, к рассасыванию, отмиранию и мумификации, выкидышам или врожденным уродствам. Выделено несколько штаммов парвовирусов человека. Первый из них, названный В, описанный доктором , вызывает хроническую гемолитическую анемию и является прототипным для человеческих парвовирусов. Ряд парвовирусов выделен из фекалий здоровых людей и людей с диарейным синдромом. Большинство представителей рода vvi активны в РГА с эритроцитами того или иного вида животных, их активность зависит от условий постановки и температуры. Причем температура может иметь критическое значение, тогда как , как правило, такого значения не имеет. Спонтанной элюции парвовирусов с эритроцитами при пермиссивных , как правило, не происходит. При непсрмиссивных элюция происходит быстро, полно, в результате эритроциты способны сорбировать на себе новые порции вируса, а элюированный вирус способен сорбироваться на новой порции эритроцитов. Истории изучении парвовирусов нлогоилных животных. Первой, установленной как отдельная иозоединица, парвовирусной болезнью плотоядных была ианлейкопения кошек ШПС , , , которая имела и другие названия кошачий инфекционный энтерит и чума кошек , . В году V ii 6 воспроизвели болезнь у кошек путем заражения свободными от бактерий фильтратами, чем доказали вирусную природу ПЛК. В настоящее время известен ряд болезней парвовирусной природы у различных видов плотоядных, которые протекают у животных в виде энтеритов. Соответственно этому, вирус, выделенный от норки, получает наименование штамм такойто вируса энтерита норок. В том случае, если видимой патологии, например у собаки нет, а парвовирус у нее выделен, то вирус получает наименование парвовирус собак штамм такойто. Очевидно, что такой подход к номенклатуре парвовирусов плотоядных ничего, кроме путаницы не вносит. Это положение можно проиллюстрировать следующими примерами. Пример 1 работа доктора i i 1 Он выделил парвовирус в ходе вспышки вирусного энтерита норок на пушном ранчо в Канаде и назвал его вирусом энтерита норок. При заражении этим штаммом не иммунных норок у них возникал парвовнрусный энтерит с типичной клиникой.