Моделирование инфекции, вызванной вирусом гепатита C, у мышей

• Автор: Сухно, Анатолий Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 135 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

ЧАСТЬ I. Литературный обзор

ГЛАВА I. Краткая характеристика вируса гепатита С и особенности географического распространения его генотипов

1.1. Краткая характеристика возбудителя и его генотипов

1.2. Географическое распространение ВГС и его генотипов ГЛАВА 2. Особенности патогенеза и иммунитета при вирусном гепатите

2.1. Клиническая характеристика острой и хронической инфекции гепатита С

2.2. Патоморфологические изменения в печени при вирусном гепатите С

2.3. Пантропные свойства ВГС

2.4. Гуморальный и клеточный иммунитет при вирусном гепатите С

2.5. Лабораторная диагностика гепатита С
2.6. Профилактика и лечение гепатита С ГЛАВА 3. Моделирование экспериментальной инфекции, вызванной
ВГС в культурах клеток и в организме лабораторных животных
3.1. Моделирование ВГСиифекции в культурах клеток.
3.2. Моделирование ВГСинфекции в организме лабораторных животных ЧАСТЬ 2. Собственные исследования
Глава 1. Материалы и методы
1.1. Вирус
1.2. Подготовка ВГСсодержащей культуральной жидкости для моделирования персистентной ВГСинфекции у мышей
1.3. Лабораторные животные
1.4. Выделение лимфоцитов
1.5. Выделение эритроцитов
1.6. Морфологические исследования печени
1.7. Определение инфекционной активности ВГС в пробах органов и тканей зараженных животных
1.8. Полимеразная цепная реакция
1.9. Реакция гемагглютинации
1 Иммуноферментный анализ для выявления антигенов
1 Методы определения антител к ВГС
. Реакция биологической нейтрализации
. Реакция торможения гемагтлютинации
. ИФА для определения специфических ДО
. Реакция связывания комплемента
1 Статистические методы Глава 2. Результаты.
Способность цитопатогенного варианта ВГС индуцировать
персистентную инфекцию у мышей
2.1. Выявление геномной РНК ВГС в ОТПЦР и антигенов ВГС в ИФА в
органах и тканях мышей, инфицированных цитопатогенным вариантом ВГС
2.2 Динамика показателей инфекционной и гемагглютинирующей ГА
активностей вируса в крови и в органах мышей, инфицированных ВГС
2.2.1. Инфекционная и ГА активности цитопатогенного варианта ВГС в сыворотке крови, эритроцитах и лимфоцитах зараженных мышей
2.2.2. Инфекционная и ГА активности цитопатогенного варианта ВГС в тканях печени зараженных мышей
2.2.3. Инфекционная и ГА активности цитопатогенного варианта ВГС в тканях лимфатических узлов зараженных мышей
2.2.4. Инфекционная и ГА активности цитопатогенного варианта ВГС в тканях селезенки зараженных мышей
2.2.5. Инфекционная и ГА активности цитопатогенного варианта ВГС в тканях головного мозга зараженных мышей
2.2.6. Инфекционная и ГА активности цитопатогенного варианта ВГС в тканях почек зараженных мышей
2.2.7. Инфекционная и ГА активности цитопатогенного варианта ВГС в тканях сердца зараженных мышей
2.2.8. Инфекционная и ГА активности цитопатогенного варианта ВГС в тканях легких зараженных мышей
2.3. Динамика гепатоспленомегалии
2.4. Патоморфологическое исследование тканей печени при моделировании ВГСинфскции у взрослых беспородных мышей
2.5. Закономерности специфического антителообразования при
экспериментальной инфекции у взрослых беспородных белых мышей, индуцированной цитопатогенным вариантом ВГС
2.5.1 Выявление вируснейтрализующих, комплементсвязывающих антител, антигемагглютининов и к ВГС
2.5.2. Спектр ДО к белкам ВГС при экспериментальной ВГСинфекции у взрослых беспородных белых мышей
Обсуждение результатов
Выводы
Приложение 1
Приложение 2
Приложение 3
Приложение 4
Приложение 5
Список литерату


Впервые обнаружена способность ВГС накапливаться в различных органах и тканях хронически инфицированных мышей. Показано, что основными маркерами ВГС инфекции у мышей могут служить РНК ВГС, инфекционная и ГА активности вируса. Выявлена динамика накопления инфекционного ВГС и его антигенов в крови и тканях внутренних органов животных по мере развития и становления хронической инфекции, свидетельствующая о медленнопрогрессирующем характере инфекции у животных. Впервые получены данные о способности ВГС преодолевать гематоэнцефалический барьер у животных. Выявлены особенности динамики специфического антителообразования при ВГСинфекции у мышей. Практическая ценность исследований. Полученная экспериментальная модель ВГС инфекции т viv может быть успешно использована для проведения доклинических испытаний противовирусной активности химиопрепаратов, индукторов интерферона и других иммуномодуляторов. Обнаружение способности ВГС, содержащегося в различных органах и тканях зараженных животных, агглютинировать гусиные эритроциты открывает перспективу использования РГА и РТГА для диагностики гепатита С. Экспериментальная модель инфекции, вызванная ВГС в организме мышей, может быть использована для оценки способности разрабатываемых против гепатита С вакцин защищать животных от инфекции. Основные положения выносимые на защиту. Внутривенное введение цитопатогенного варианта вируса гепатита С взрослым беспородным белым мышам приводит к развитию персистентной инфекции с накоплением вируса в крови и тканях внутренних органов, а также к развитию в печени характерных патоморфологических изменений. РНК ВГС, инфекционная активность вируса, специфические антигены и антитела к ним, выявленные в крови и тканях внутренних органов мышей, являются основными маркерами экспериментальной инфекции, вызванной цитопатогенным вариантом ВГС. Апробация работы состоялась июля года на совместном заседании Экспертного специализированного Совета по предварительной экспертизе диссертационных работ по медицинской вирусологии при Институте вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, отделов молекулярной вирусологии, экологии вирусов, Государственной коллекции вирусов, общей вирусологии. Основные положения диссертационной работы представлены в материалах VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов Москва, г. VI Всероссийской научнопрактической конференции Вирусные гепатиты проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилактики Москва, г. Юбилейной научной конференции, посвященной 5летию со дня рождения С. П. Боткина СанктПетербург, Военномедицинская академия им. С.М. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе, 2 статьи в журналах, рекомендуемых ВАК, 1 статья в зарубежном журнале и 6 кратких сообщений в материалах конференций. ГЛАВА 1. ВГСинфекция является одной из глобально распространенных вирусных инфекций 3, , , . Со времени открытия ВГС в году группами исследователей под руководством и начался период интенсивных исследований агента, ответственного в случаев за возникновение трансфузионных гепатитов гепатитов ни А, ни В, передающегося непосредственно через кровь или через продукты крови. Скрининг крови значительно уменьшает риск заражения. Имеющиеся в настоящее время тестсистемы в 0 случаев выявляют инфицированных доноров 1. Однако примерно у инфицированных факторы риска заражения установить не удается так называемые спорадические случаи ,,1. По последним данным ВОЗ, в среднем, около 3 населения мира инфицированы вирусом гепатита С. Однако, уровень инфицированности во многих регионах мира различен и колеблется от 0,6 1,4 в США до 4 5 в Африканских странах 3. В году в Российской Федерации РФ степень зараженности населения ВГС варьировала от 0,7 в Центральном регионе до 3,8 в ЦентральноЧерноземной области , , . У людей, инфицированных ВГС развивается хроническая инфекция 3, , , , . Многими исследователями гепатит С рассматривается как медленно прогрессирующее заболевание человека, а ВГС, по определению академика РАМН Д. К.Львова, является ласковым убийцей ,,.