Структура поверхности эпителиальных клеток шейки матки, инфицированных вирусом папилломы человека

• Автор: Яковлева, Валерия Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СОДЕРЖАНИЕ.

Список используемых сокращений .

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПАПИЛЛОМ АВИРУ СОВ

1.1. Общие сведения о вирусе папилломы Ю

1.2. Структура и организация генома IО

1.3.Репликация вируса в эпителиальных клетках

ГЛАВА 2. ИЗМЕНЕНИЕ МОРФОЛОГИИ КЛЕТКИ ПОД ВЛИЯНИЕМ ПАПИЛЛОМАВИРУСОВ.

2.1. Цитоморфология и гистоморфология нормального плоского эпителия.

2.2. Цитоморфология и гистоморфология клеток плоского эпителия, инфицированных вирусом папилломы.
2.3. Цитологические и гистологические критерии злокачественности
ГЛАВА 3. УЛЬТРАСТРУКТУРА КЛЕТОК В НОРМЕ ПАТОЛОГ ИИ
3.1. Просвечивающая электронная микроскопия клеток плоского эпителия
в норме и при вирусной патологии.
3.2. Сканирующая электронная микроскопия. Плоский эпителий.
3.3. Агомносиловая микроскопия
3.3.1. Принцип метода атомносиловой микроскопии.
3.3.2. Атомносиловое исследование биологических объектов
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.1. Материалы.
1.2. Колмюскопия.
1.3. Цитоморфологический метод.
1.3.1. Традиционный цитологический метод.
1.3.2. Метод жидкостной цитологии с применением системы Цитоспин
1.4. Г истом орфологический метод
1.4.1. Подготовка препаратов для гибридизации i i
1.5. Подготовка материала для исследования методом
полимеразной цепной реакции
1.6. Подготовка препаратов для исследования методом просвечивающей электронной микроскопии ПЭМ.
1.7. Подготовка препаратов для исследования методом сканирующей электронной микроскопии.
1.8. Подготовка препаратов для исследования поверхности клеток
методом атомносиловой микроскопии
1.8.1. Использование окрашенного материала
1.8.2. Использование неокрашенного материала
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 2. ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
В СОПОСТАВЛЕНИИ С КЛИНИЧЕСКИМИ ДАННЫМИ
2.1. Характеристика клинических данных исследуемых пациенток
и выявляемость койлоцитоза
2.2. Анализ способов получения материала
2.3. Выявление цитоморфологических признаков ГВИ и сопоставление
с результатами молекулярнобиологических методов
2.4. Определение степени патологических изменений плоского эпителия. ГЛАВА 3. ЦИТОМОРФОЛОГИЯ КЛЕТОК ПЛОСКОГО ЭПИТЕЛИЯ
В СОЧЕТАНИИ С АТОМНОСИЛОВЫМ ИССЛЕДОВАНИЕМ
3.1. Контрольные образцы цитология, атомносиловая микроскопия, сканирующая электронная микроскопия.
3.2. Плоский эпителий, измененный напилломавирусной инфекцией цитология, атомносиловая микроскопия.
3.3. Клетки плоскоклеточиого рака с ороговением цитология,
АСМисследование
ГЛАВА 4. ГИСТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И УЛЬТРАСТРУКТУРН ИССЛЕДОВ АШЯ БИОПТАТОВ.
4.1. Гистологическое исследование биопсий.
4.2. Ультраструктурне исследование биопсий.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Как известно, для исследования поверхности клетки используют сканирующую электронную микроскопию , 3, однако это дорогостоящий метод и к тому же требующий длительной подготовки образцов, что затрудняет его широкое использование в практической медицине. В настоящее время все большее применение находит, метод атомносиловой микроскопии, позволяющий получить трехмерное изображение клетки и изучить топографию ее поверхности. Этот метод, несомненно, было бы целесообразно использовать для исследования поверхности эпителиальных клеток с цитоморфолошческими признаками ПВИ. Цитоморфологическое исследование клеток плоского эпителия шейки магки в норме и при папилломавирусной патологии, структурное изучение их поверхности с помощью метода атомносиловой микроскопии. Проведение цитологического анализа мазков с шейки матки пациенток, инфицированных вирусом папилломы человека ВПЧ и выявление клеток с морфологическими признаками ПВИ койлоциты, дискератоциты, паракератоциты, элементы гиперкератоза чешуйки плоского эпителия, клетки с тающими ядрами и сопоставление их с контрольными клетками при учете клинических данных. Использование при этом в материале для контроля на наличие ВПЧ методов молекулярной биологии полимеразной цепной реакции, гибридизации i i. Получение АСМизображений поверхности клеток с морфологическими признаками ГТВИ и нормальных клеток плоского эпителия. Создание усредненных моделей структуры поверхности клеток с морфологическими признаками ПВИ и клеток без признаков патологии но результатам АСМисслсдования и сопоставление их с данными цитологического анализа. Получение АСМизображений поверхности клеток с морфологическими признаками плоскоклеточного рака с ороговением и создание усредненной модели структуры поверхности этих клеток. Изучение гистоморфологии и ультраструктуры клеток поверхностного и промежуточного слоев плоского эпителия шейки матки, инфицированного ВПЧ. Научная новизна работы Нами впервые применен и адаптирован к клеткам плоского эпителия в норме и патологии метод , позволивший исследовать структуру поверхности клеток нормы, с цигоморфологическими признаками вирусной и раковой патологии. Обнаружены существенные топографические различия структуры поверхности таких клеток. Практическая значимость работы В работе показана важность способа и зоны получения материала для цитологической диагностики ПВИ гениталий. При этом цитоморфологичсские признаки ПВИ койлоцигоз, дискератоз, паракератоз, гиперкератоз можно дополнить анализом тех же самых цитологических препаратов методом . Разработаны трехмерные модели структуры поверхности клеток с цитоморфологичсскими признаками ПВИ, которые позволяют сопоставлять исследуемые клетки с ними и выявлять клетки с вирусной патологией. Всероссийская научнопрактическая конференция Генодиагностика в современной медицине отдела молекулярной биологии г. Заседание Пленума Ассоциации клинических цитологов России Москва, г. Заседание Первой Всероссийской Школысеминара Современные достижения бионаноскопии Москва, МГУ, июня г. Заседание Пленума Центрального Исполнительного Совета Ассоциации Клинических цитологов России г. Заседание Форума по нанотехнологии Москва, 35 декабря г. В завершенном виде результаты диссертационной работы были доложены и обсуждены на совместном заседании отдела молекулярной вирусологии и совета но предварительной экспертизе диссертационных работ ГУ ИЛИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН от января г. Оптимизация и адаптация метода АСМ к исследованию поверхности клеток плоского эпителия в норме и при вирусной патологии. Изучение и сопоставление топографических изменений клеток плоского эпителия в норме и при патологии. По материалам диссертации опубликовано работ, в том числе 7 статей в реферируемых российских научных журналах и тезисы докладов в сборниках российских и международных конференций, зри из которых причисляются к списку ВАК. Объем и структура диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания использованных материалов и методов, 3 глав собственных исследований, заключения и выводов. Список литературы включает в себя 7 отечественных и зарубежных источников. Диссертация изложена на 8 страницах машинописного текста, включая таблиц и рисунка.