Получение вариантов вируса болезни Ньюкасла со сниженной вирулентностью для клеток-продуцентов интерферона

• Автор: Муллагулова, Марина Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 120 с. : ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Взаимоотношение вирусклетка в процессе инфекции и образования интерферона

1 2. Направленные мутации вирусов

Глава 2. Собственные исследования

2 1. Материалы и методы исследования

2 2. Получение холодоадаптированного вакцинного штамма Н вируса болезни Ньюкасла

2.2.1. Получение химических мутантов ВБНХ

2.2.2. Морфологическая, физикохимическая и биологическая характеристика ВБ1Х

2.3. Стимуляция размножения ВБНХ в куриных эмбрионах

2.4. Разработка тестсистемы для определения
количества вирусаиндуктора интерферона
Заключение
Выводы
Список литературы


Впервые получен высокоактивный и низковирулентный для клетокиродуцентов интерферона, холодоадаптированный вариант вируса болезни Ньюкасла, используемый в качестве индуктора интерферона, повышающего синтез интерферона при слабом повреждении интерфсронсинтезируюгцих клеток При использовании холодоадаптированного штамма, урожай интерферона повышался в 4 раза и более по сравнению с исходным производственным вакцинным штаммом Н ВБН. Впервые предложена ростовая добавка Днзомер лактозы для получения высокого урожая вируса в куриных эмбрионах. Научная новизна подтверждена 2 патентами РФ. На третью заявку получена приоритетная справка. Штамм депонирован в Государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И. Ивановского Российской Академии медицинских наук ГКВ . Полученные результаты положены в основу Изменений к Регламенту производства человеческого лейкоцитарного интерферона 1 Инструкции но изготовлению и контролю РРИД для определения количества вносимого вирусаиндукгора. Штамминдуктор и тестсистс. Дизомер лактозы, переданные в цех интерферона ГУН Иммунопрепарат способствовали получению больших количеств интерферона. Вирусы, как строго облигатные внутриклеточные паразиты, полностью лишены систем жизнеобеспечения и аппарата трансляции белков Реализация вирусной генетической информации и созревание новой популяции дочерних вирионов обеспечиваются клеткой хозяина Ершов Ф И. Климов Л И. Спигелман С. Засухина Г. Д., . Взаимодействие вируса с клеткой начинается с адсорбции вириона на клеточной поверхности Жданов В. М. и др. Соловьев В. Д. и др. Букринская А. Г. и др. i М. В основе адсорбции лежат два механизма. Первый неспецифический. В пользу первоначального электростатического взаимодействия между клеткой и вирусом, свидетельствуют данные о зависимости процесса адсорбции от ионной силы раствора, его i I и наличия в среде одно и двухвалентных катионов К . Орлова Т. Г. и др. Наиболее важным является специфическое взаимодействие рецепторов вируса с комплементарными рецепторами клетки. На поверхности вирионов многих групп вирусов, в том числе РНКсодсржащнх оболочечных вирусов и аденовирусов, имеются выступы или шипы длиной от до нм, состоящие из одного или двух гликозилированных полипептидов. Вероятно, одновременно связываются несколько выступов на вирусной оболочке с несколькими комплементарными рецепторами клеточной поверхности. Отщепление выступов с помощью протеолнтических ферментов приводит к потере вирусами способности адсорбироваться на клетках Косяков П. Н. и др. Сергеев В. А. и др. Идентификация рецепторов различных вирусов показала, что они представляют собой глнкопротеины V М. . VV. i . В некоторых случаях, когда проникновения вирусной РНК в клетку не происходит, вирус может отделиться от клетки и вновь адсорбироваться на другой. Вирусы можно отделить от полисахаридной цепи рецепторов при действии нейраминовон кислоты Петров Р. В. и др. Тарасишнн Л. А., . Генетическая информация их синтеза может находиться в различных хромосомах Рецепторы способны к регенерации после удаления их нротеолитическими ферментами Маленков А. Г. и др. Сергеев В. А. и др. Полагают, что каждая клетка может адсорбировать от десятков до нескольких сотен вирусов. При оптимальных условиях, вероятно, число адсорбированных вирионов определяется количеством рецепторов, специфичных для данного вируса Сергеев В. А., Букринская А. Г. и др. Первичный контакт с клеткой происходит в результате случайных столкновений вирусов с поверхностью клетки, при этом количество стабильных присоединений в 1 ООО ООО раз меньше количества случайных столкновений Сергеев В. А., Лурия С. Вторым этапом взаимодействия вирусклетка является проникновение. Показано, что участие в нем принимает, расположенный на поверхности парамиксовирусов, гликопротеид , причем активностью обладает только расщепленный полипептид i . Антитела к этому полипептиду блокируют распространение инфекции в клеточных культурах Липкинд М. А. и др. Зайдес В. М и др. . ., М. Проникновение происходит почти мгновенно, в результате слияния оболочки вируса с плазматической мембраной.