Перевиваемые линии клеток карпа (Cyprinus carpio) и сибирского осетра (Acipenser baeri), их использование в ихтиовирусологии

• Автор: Щелкунова, Татьяна Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 187 с. : ил.

Органные культуры культуры целых органов или их частей, культивируемые i vi, сохраняющие межклеточные взаимодействия и поддерживающие в течение периода культивирования характерную гистологическую структуру и биохимическую дифференцировку. Таким образом, при ведении ткани в органной культуре можно получать важную информацию о нормальном развитии того или иного органа и ткани, росте и дифференцировке, а также о влиянии внешних факторов на эти параметры. Однако не все результаты, полученные i vi, можно экстраполировать на ситуации i viv. К тому же продолжительность переживания органной культуры, как правило, ограничена и не превышает нескольких месяцев , , 6, 4. Культуры клеток клетки живого организма, культивируемые i vi, подразделяются на переживающие и растущие. Культуры клеток, как правило, лишены структурной организации, теряют характерную гистотипическую архитектуру и связанные с ней биохимические признаки. Клетки в культуре размножаются, что обеспечивает увеличение их массы. Они могут быть охарактеризованы и длительно сохранены путем криоконсервации. Различают три основных вида однослойных клеточных культур первичные, диплоидные и перевиваемые постоянные, стабильные , . Первичные культуры это культуры клеток, полученные непосредственно из тканей животных в эмбриональном или постнатальном периоде. Срок жизни таких культур ограничен. По прошествии определенного времени в них возникают явления неспецифической дегенерации. Периодическая смена среды, изменение ее состава и другие процедуры могут лишь несколько продлить срок их жизни, но не предотвращают конечной деструкции и гибели культур. К недостатку первичных культур клеток можно отнести неоднородность их клеточного состава, необходимость всякий раз подыскивать подходящего донора клеток и тестировать его на наличие контаминации различными микроорганизмами 1, 9, 2, 3. Клеточные линии, имеющие ограниченный срок жизни i vi и не менее клеток с диплоидным кариотипом, полностью соответствующим нормальному диплоидному кариотипу исходной донорской ткани, называются диплоидными штаммами 2, 7. Перевиваемые культуры линии это культуры, возникшие спонтанно или полученные искусственно из первичных культур, полностью адаптированные к условиям существования i vi и обладающие способностью к практически неограниченному по продолжительности субкультивированию. Перевиваемые клеточные линии имеют измененный кариотип, отличный от кариотипа хозяина 5, , 9,3. Перевиваемые клеточные линии, в отличие от культур нормальных клеток с ограниченным сроком жизни, трансформированные. Основным критерием трансформации считают приобретение бессмертия, однако, бессмертием обладает не отдельная клетка, а культура, сохраняющая определенные свойства из поколения в поколение. В тоже время в процессе длительного культивирования те или иные свойства клеток меняются. Другие критерии трансформации, такие как измененная зависимость от микроокружения подложки, окружающих клеток и факторов среды, онкогенность, проявляются у различных линий в неодинаковой степени. Перевиваемые клеточные линии отличаются от первичных тем, что состоят из клеток одного и того же тканевого типа. Тканевая однородность создается на самых ранних этапах культивирования и обусловлена тем, что любая используемая питательная среда является благоприятной лишь для клеток определенного тканевого типа и менее благоприятной для клеток других типов. Тем самым питательная среда выступает в качестве фактора селекции, обеспечивающего сохранение в культуре только клеток того тканевого типа, которые способны наиболее быстро в ней пролиферировать 5, 9, 3, 7. Основным преимуществом перевиваемой клеточной линии является то, что полученная один раз, охарактеризованная культура, может быть использована в любой момент, необходимый для работы. Первые сообщения о работах по культуре тканей рыб появились в начале XX века и заключались в непродолжительном выдерживании кусочков тканей или целых органов в физиологическом растворе. В дальнейшем к физиологическому раствору стали добавлять неорганические соли, сыворотку крови животных и другие биологические жидкости. Н. удавалось сохранять эксплантаты мальков и эмбрионов форели в течение часов в растворе Рингера с добавлением лимфы 9. Хлопин Н.