Чувствительность эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к химиопрепаратам

• Автор: Шевченко, Елена Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 107 с. : 13 ил.

1.1. Геном вируса гриппа

1.2. Структура и свойства поверхностных и внутренних вирионных белков.

1.2.1. Белки полимеразного комплекса РВ2, РВ1, РА

1.2.2. Гемагглютинин.

1.2.3. Нуклеопротсин.

1.2.4. Ненраминидаза.

1.2.5. Матриксный белок М1, мембранный белок М

1.2.6. Неструктурные белки и .

1.3. Исторические этапы изучения эпидемиологии и этиологии гриппа.

1.4. Гипотезы о происхождении пандемических штаммов вирусов гриппа

ГЛАВА 2. ПРОТИВОВИРУСНЫЕ ХИМИОПРЕПАРАТЫ

2.1. Амантадин и ремантадин.
2.2. Арбидол
2.3. Комбинированное применение арбидола и других противогриппозных химиопрепаратов
2.4. Занамивир и озельтамивир.
2.5. Противовирусная активность препаратов в отношении вирусов 1риппа птиц
2.6. Резистентность вирусов гриппа к химиопрепаратам
РАЗДЕЛ 2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И
НАБЛЮДЕНИЙ.
Глава 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1.1. Методы изучения антигенных свойств эпидемических штаммов.
1.1.1. Изоляция эпидемических штаммов вирусов гриппа
из носоглоточных смывов.
1.1.2. Идентификация гемагтлютинирующих изолятов.
1.2. Химиопрепараты и соединения
1.2.1. Противовирусный препарат ремантадин.
1.2.2. Противовирусный препарат арбидол
1.2.3. Производные индола
1.2.4. Производные селена
1.3. Методы определения противовирусной активности препаратов
1.3.1. Определение цитотоксического действия соединений
1.3.2. Изучение чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа
к препаратам методом ингибирования цитопатического действия вирусов и в реакции гемагтлютинации РГА
1.3.3. Изучение чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа
к препаратам методом иммуноферментного анализа ИФА.
1.3.4. Изучение комбинированного действия противогриппозных препаратов методом ИФА
1.4. Метод секвенирования М2 белка вирусов гриппа
1.5. Методы статистической обработки результатов.
ГЛАВА 2. ИЗУЧЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЭПИДЕМИЧЕСКИХ
ШТАММОВ ВИРУСОВ ГРИППА А и В СЕЗОНОВ гг. к РЕМАНТАДИНУ и АРБИДОЛУ в КЛЕТКАХ КУЛЬТУРЫ ТКАНИ МПСК.
2.1. Антигенная характеристика эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В, циркулировавших в России в период гг
2.2. Изучение чувствительности к ремантадину вирусов гриппа А, циркулировавших
в эпидемических сезонах гг., в РГА.
2.3. Оценка чувствительности методов изучения противовирусной активности арбидола в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В
в клетках культуры ткани МОСК
2.3.1. Изучение действия арбидола на инфекционный титр эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в реакции гемагглютинации РГА.
2.3.2. Изучение действия арбидола на репродукцию эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в клетках культуры МОСК с использованием метода ИФА
2.4. Изучение чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В сезона гг. к ремантадину и арбндолу в клетках культуры
ткани МОСК методом ИФА
2.5. Оценка комбинированного применения ремантадина и арбидола в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа А в клетках культуры ткани МБСК методом ИФА.
2.6. Оценка вероятности частоты возникновения вирусов, резистентных к арбидолу,
на фоне приема препарата у больных гриппом
ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТИ
ПРОИЗВОДНЫХ ИНДОЛА в ОТНОШЕНИИ ШТАММОВ
ВИРУСОВ ГРИППА А и В в КЛЕТКАХ КУЛЬТУРЫ
ТКАНИ МВСК МЕТОДОМ ИФА.
3.1. Изучение цитотоксического действия соединений.
3.2. Влияние аналогов арбидола на репродукцию эталонного штамма вирусов гриппа ЛЛСалифорния7 НЗКТ2 и эпидемического штамма ВХабаровск в клетках культуры ткани МОСК.
3.3. Изучение противовирусной активности соединения 5 в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в клетках культуры ткани МОСК
3.4. Изучение противовирусной активности соединения 7 в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в клетках культуры МОСК
3.5. Изучение противовирусной активности соединения 8 в отношении современных эпидемических штаммов вирусов 1риппа А и В в клетках культуры МОСК
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ СЕЛЕНА в ОТНОШЕНИИ ЭТАЛОННЫХ и ЭПИДЕМИЧЕСКИХ ШТАММОВ ВИРУСОВ ГРИППА А и В в КЛЕТКАХ КУЛЬТУРЫ ТКАНИ МОСК.
4.1. Изучение цитотоксического действия соединений.
4.2. Вирулицидное действие соединений селекартен, селенит и селекартеин в отношении эталонных вирусов гриппа А и В в клетках культуры МОСК
4.3. Изучение активности селенпроизводных селекартен, селенит, селекартеин в отношении эталонного штамма вируса гриппа АКалифорния7НЗЫ
в клетках культуры МОСК методом ИФА
4.4. Изучение активности селенпроизводных селекартен, селенит, селекартеин в отношении эталонного вируса гриппа ВГонконг0 и современных эпидемических штаммов вирусов гриппа В в клетках культуры МОСК
методом ИФА
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
НА гсмагтлютинин
1 в иммуноглобулин й
МОСК клетки культуры ткани почки собаки
ИА нейрамннидаза
АнтиНА антитела к гемагглютинину
БОА бляшкообразующая активность
ВГ вирусы гриппа
ВОЗ Всемирная Организация Здравоохранения
ДМСО диметилсульфоксид
ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота
ИФА иммуноферментный анализ
ИЭ индекс эффективности
КЭ коэффициент эффективности
к.э. куриные эмбрионы
МИК минимальная ингибирующая концентрация МКА моноклональные антитела МПК максимально переносимая концентрация ОП оптическая плотность
ОРВИ острые респираторные вирусные инфекции
ОФД ортофенилендиамин
ГИДР полимеразная цепная реакция
РГА реакция гемагглютинации
РТГА реакция торможения гемагтлютинирующей активности
РНК рибонуклеиновая кислота
РФ Российская Федерация
ТМБ тетраметилбензидин
ХТИ химиотерапевтический индекс
ЦД цитотоксическая доза
ЦПД цитопатическое действие
ЦГСЭН Центр Госсанэпиднадзора
ЦЭЭГ Центр экологии и эпидемиологии гриппа
АМИНОКИСЛОТЫ
Краткое обозначение Название Краткое обозначение Название
А аланин Ь лейцин
К аргинин К лизин
аспарагин м метионин
Б аспартат р фенилаланин
С цистеин р пролин
Е глютаминовая кта в серии
О глютамин т треонин
в глицин У триптофан
н гистидин У тирозин
I изолейцин V валин
ВВЕДЕНИЕ


Определить частоту возникновения естественно циркулирующих резистентных к ремантадину вирусов гриппа А среди современных эпидемических штаммов сезонов гг. Изучить спектр чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к арбидолу. Оценить эффективность комбинированного применения ремантадина и арбидола химиопрепаратов с различным механизмом действия в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа А в клетках культуры ткани МОСК. Изучить возможность формирования резистентных к арбидолу штаммов вирусов гриппа на фоне приема препарата пациентами в период заболевания. Определить чувствительность эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к новым химическим соединениям производным индола. Изучить активность производных селена в отношении эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В. Впервые в нашей стране установлен факт роста числа естественно циркулирующих резистентных к ремантадину вирусов гриппа А среди современных эпидемических штаммов сезонов гг. Показано наличие высокой активности арбидола в отношении эпидемических вирусов гриппа А и В, в том числе штаммов вируса гриппа А, резистентных к ремантадину. Впервые изучено комбинированное действие арбидола с ремантадином в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А. Установлено, что комбинированное применение низких концентраций арбидола и ремантадина увеличивает ингибирующий эффект препаратов на вирусную репродукцию по сравнению с эффектом, оказываемым каждым из этих препаратов в отдельности. Впервые проведено изучение возможности формирования резистентных к арбидолу штаммов вирусов гриппа А и В при приеме его пациентами в течение 5 дней в период заболевания. В клиническом наблюдении не выявлено формирования резистентных к арбидолу штаммов на фоне рекомендуемого курса лечения. Изучено новых соединений аналогов арбидола. Из них выявлено 3 соединения, обладающих специфической активностью в отношении вирусов гриппа А и В, сравнимой с активностью арбидола. Впервые изучено 3 новых соединения производных селена. Установлено, что эти соединения обладали активностью в отношении эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В. Отработан и усовершенствован для практического применения в лаборатории метод иммуноферментного анализа ИФА, позволивший проводить исследования чувствительности к химиопрспаратам эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В на луночных панелях с клетками культуры ткани МОСК. Факт роста показателя ремантадинрезистентных вирусов гриппа А научно обосновывает необходимость дальнейшего проведения мониторинга по изучению чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа А к ремантадину и целесообразность его применения для лечения и профилактики в РФ. Высокая активность арбидола в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В, включая ремантадинрезистентные штаммы вирусов гриппа А, и отсутствие случаев формирования резистентных к арбидолу вирусов гриппа А и В на фоне проводимого курса лечения подтвердили существующие рекомендации для его применения в качестве профилактическою и лечебного средства при гриппе в настоящее время. Данные об увеличении противовирусной активности в клетках культуры МБСК препаратов ремантадина и арбидола при одновременном использовании открывают перспективу для клинического изучения этих препаратов при комбинированной терапии гриппа в целях более рационального и, вместе с тем, эффективного их применения и снижения риска формирования резистентных мутантов. Выявление среди аналогов арбидола соединений с противовирусной акгивностью в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа, сравнимой с активностью арбидола, открывает новые возможности в расширении ассортимента средств химиопрофилактики и химиотерапии гриппа. Результаты, полученные при исследовании противовирусной активности новых соединений производных селена, показавшие их ингибирующий эффект в отношении эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа, открывают перспективы дальнейшего поиска и экспериментального изучения противовирусных препаратов среди селенпроизводных.