Геномный полиморфизм и эволюционная изменчивость природных популяций аденовирусов серотипов 3 и 7 в процессе их эпидемической циркуляции в СССР

• Автор: Головина, Галина Игоревна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1991
• Место защиты: Ленинград
• Количество страниц: 218 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений, .принятых в диссертации

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Биология аденовирусов

1.1. Физикохимические СЕОИСТВа вирионов.

1.2. Классификация аденовирусов человека.

1.3. Особенности репликации и сборки аденовирусов . .

. 1.4. Рекомбинации аденовирусов .

2. Молекулярная эпидемиология аденовирусных инфекций . .

2.1. Методы молекулярной эпидемиологии.

2.2. Рестрикционный анализ в плане изучения геном. .
. . ной гетерогенности аденовирусов .
2.3. Молекулярная эпидемиология аденовирусных инфекций, обусловленных аденовирусами серо. . .
. . типа 3
2.4. Молекулярная эпидемиология аденовирусных
инфекций, обусловленных аденовирусами.
серо типа 7.
3. Эволюция геномов аденовирусов
Заключение
ЭКСПЕРИ,1ЕНТЛЛЫ1АЯ ЧАСТЬ
4. Материалы и методы
4.1. Штаммы аденовирусов серотипов 3 и 7,.использо.
. . ванные в работе .
4.2. Инфекционная активность и эффективность репродукции вируса в клетках тканевых культур . .
4.3. Антигенная характеристика изолягов аденовирусов .
4.4. Активность интерференции аденовирусов с вирусом везикулярного стоматита на тканевых культурах . .
4.5. Накопление и очистка аденовирусов
4.6. Выделение вирусной ДНК
4.7. Обработка ДНК эндонуклеазами рестрикции .
4.8. Электрофорез в агарозном геле
4.9. Мечение рестрикционных фрагментов ДНК
4 Электрофорез в полиакриламидном геле
5. Геномный полиморфизм популяпци аденовирусов серо
типа 3, выделенных на территории Советского Союза.с
по гг
5.1. Анализ генотипов аденовирусов серогипа 3, циркулировавших на территории СССР, с помощью крупнощепящих ферментов рестрикции
5.2. Анализ генотипической гетерогенности популяции аденовирусов серотила 3 с помощью мелкощепящей рестриктазы Сх 1 ..
Заключение
6. Геномный полиморфизм популяции аденовирусов сероти
па 7, выделенных на территории. Советского Союза . . .
6.1. Анализ генотипов аденовирусов серотила 7, циркулировавших на территории СССР, с помощью крупноцепящих ферментов рестрикции
6.2. Анализ генотипической гетерогенности популяции аденовирусов серотипа 7 с.помощью мелкощепящей рестриктазы огг .
Заключение
7. Коррелятивная взаимосвязь между фенотипическими и генотипическими профилями циркулирующих штаммов адено. . вирусов серогипов 3 и 7
7.1. Биологияеские свойства аденовирусов.серотипов.
. . 3 и 7 с разными генотипами
7.2. Биологическая совместимость аденовирусов сероти
пов 3 и 7 с разньши генотипами
Заключение
8. Обсуждение результатов.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Аденовирусы Ад . ДНКсодеркащие вирусыПловучая плотность аденовирусов в i составляет 1, гсм3 . Константа седиментации аденовириона равна 0 . ДНК аденовирусов имеет двуспиральную, линейную структуру, молекулярнуюмассу . ЮД и константу седиментации . С 5концами молекулы ДНК ковалентно связан белок с молекулярной массой ООО Д К белок. В состав ДНК аденовируоов входят инвертированные концевые избыточные последо. Содержание ГДпар варьирует у разных серогипов аденовирусов от до . В вирионе аденовируса идентифицировано от II до структурных белков 5, Молекулярная масса составляющих их полипептидов колеблется от до 0. Липиды в составе аденовирусов не обнаружены . Вирионы содержат фибриллы, модифицированные глюкозамином, который присоединен к ним ковалентно. Аденовирусы имеют форму . Белковая оболочка капсид состоит из 2 субъединиц капсомеров, 0 из которых гексоны и пентоны . От каждой из вершин . Аденовирусы человека разнородны по биологическим, химическим, иммунологическим и морфологическим свойствам. В основу ранних классификаций аденовирусов табл. ГЦпар в составе ДНК Ад 4, уровень гомологии ДНК , длина отростка фибра 2,7,1. Дальнейшее совершенствование классификации Ад человека связано с работами б. ИааеН а1. Авторы принимали во внимание то, что классификация должна исходить из максимально детального сравнения геномов рассматриваемых вирусов или продуктов их геномов. В связи о этим была предложена классификация Ад человека, учитывающая молекулярные массы внутренних полипептидов У, У1 и УП как наиболее консервативных 3 табл. Таблица 1. Гомо ГЦ Количес Молекулярная Типы логяя с Бле В 3,7. Окончание табл. ТИ . Гомология ДНК, ГД Коли чество Бпе Уровни гомологии между ДНК аденовирусов изучали разными методами гибридизаций на фильтре гетеродуплексным картированием , гибридизацией в растворе . В качестве критерия, позволяющего сравнивать непосредственно геномы вирусов, был предложен анализ ДНК с помощью эндонуклеазы рестрикции , которая расщепляет ДНК в участке i, что особенно важно, учитывая неодинаковое содержание ГЦпар среди Ад разных подродов. С помощью такого подхода Ад человека были разделены на семь подродов А, В,С,Д,Е, , 9 поскольку число Фрагментов, получаемых в результате расщепления ДНК этой рестршстазой является характерным для каждого подрода табл. Следует отметить, что достоверность определения гомологичности геномов вирусов с помощью сайтспецифических рестриктаз уступает только способу ее определения в результате выяснения последовательности нуклеотидов методом секвенирования. Необходимо подчеркнуть, что ленду всеми принятыми в настоящее время критериями подродовой идентификации Ад человека существует четкая корреляция. Однако, учитывая значительную геномную гетерогенность Ад человека, в практику вводятся новые классификации генотипов Енутри каждого серотипа аденовирусов, которые будут рассмотрены ниже гл. ДНК. Для ингибирования синтеза клеточной ДНК необходим продукт большой мРНК I . Анализособенностей механизма репликации ДНК Ад посвящен ряд обзоров ,,,, ,,5,4,3. Репликация ДНК Ад происходит полуконсервативно по механизму вытеснения. В процессе продуктивной Адинфекции выявляют репликативные и зрелые формы вирусной ДНК. ДНК Ад представляют кольцевые молекулы. Около вновь синтезированной вирусной ДНК находится в ассоциации с ядерным матриксом 9. Точный механизм репликации аденовирусной ДНК пока не известен. Однако существует ряд моделей синтеза ДНК ,, ,, основанных на имеющихся экспериментальных данных, полученных при изучении репликации Ад ДНК i viv и i vi. В некоторых исследования, в частности в работах ,6, высказывается предположение о синхронизации процессов синтеза ДНК и сборки аденовирусов. Сборка вирионов блокируется либо при понижении концентрации аргинина , либо при повышении температуры инкубации . В инфицированных клетках состав вирусных частиц неодинаков. ДНК юные вирионы Р i 1.