Совершенствование методов диагностики оспы овец и оспы коз

• Автор: Орлова, Елена Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 133 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ .

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика оспы овец и коз

1.1.1. Распространенность заболеваний

1.1.2. Клиническая картина заболеваний.

1.1.3. Патологоанатомические изменения.

1.1.4. Эпизоотологические особенности

1.2. Характеристика ВОО и ВОК

1.2.1. Таксономическое положение.

1.2.2. Видовая специфичность.

1.2.3. Физикохимические свойства
1.2.4. Структура вириона.
1.3. Геном ВОО и ВОК.
1.4. Патогенез ВОО и ВОК.
1.4.1. Проникновение вируса в клетку.
1.4.2. Депротеинизация вирусной сердцевины
1.4.3. Экспрессия генов
1.4.4. Морфогенез
1.5. Культивирование ВОО и ВОК.
1.6. Иммунитет и специфическая профилактика.
1.7. Диагностика оспы овец и оспы коз
1.7.1. Дифференциальная диагностика
1.7.2. Вирусологические методы диагностики.
1.7.3. Серологические методы.
1.7.4. Молекулярнобиологические методы
1.8. Заключение по обзору литературы
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы.
2.1.1. Патологический материал.
2.1.2. Вирусы
2.1.3. Реактивы и ферменты.
2.1.4. Праймеры
2.1.5. Растворы и буферные смеси.
2.1.6. Оборудование
2.2. Методы
2.2.1. Расчет праймеров для ПЦР
2.2.2. Выделение ДНК.
2.2.3. Полимеразная цепная реакция.
2.2.4. Очистка продуктов ПЦР.
2.2.5. Рестрикционный анализ.
2.2.6. Молекулярное клонирование.
2.2.7. Экспрессия рекомбинантных белков
2.2.8. Сыворотки крови.
2.2.9. Иммуноферментный анализ.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.1. Расчет праймеров для метода индикации и видовой дифференциации каприпоксвирусов.
3.2. Оценка специфичности метода видовой дифференциации каприпоксвирусов
3.3. Оценка аналитической чувствительности метода
видовой дифференциации каприпоксвирусов.
3.4. Разработка метода дифференциации вакцинных и эпизоотических штаммов вируса оспы овец
3.5. Оценка специфичности метода штаммовой дифференциации ВОО
3.6. Разработка метода обнаружения вируса контагиозной эктимы
на основе ПЦР
3.7. Получение рекомбинантных антигенов ВОО.
3.8. Оценка активности рекомбинантных антигенов
3.9. Разработка непрямого варианта ИФА на основе рекомбинантных антигенов Р и Р.
3.9.1. Определение рабочего разведения антигенов Р и Р
3.9.2. Выбор блокирующего раствора
3.9.3. Выбор буфера для приготовления блокирующего раствора
3.9.4. Выбор рабочего разведения конъюгата
3.9.5. Определение позитивнонегативного порога для
РИФА и РИФА
3.9.6. Оценка воспроизводимости методов РИФА и РИФА
3 Определение диагностической чувствительности и специфичности ИФА на основе рекомбинантных антигенов
Р и Р.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЯ.
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Предложен метод дифференциальной диагностики вируса оспы овец и вируса оспы коз от вируса контагиозной эктимы. Экспрессией в . Р, I8 и Р вируса оспы овец. Разработан непрямой вариант ИФА с использованием рекомбинантных белков Р и Р в качестве антигенов для обнаружения антител к каприпоксвирусам в сыворотках крови мелких жвачных. Практическая значимость исследовании. Методика обнаружения и видовой дифференциации каприпоксвирусов с использованием мультиплексной полимеразной цепной реакции г. Методика обнаружения вируса контагиозной эктимы с использованием полимеразной цепной реакции г. Методика дифференциации вакцинных и эпизоотических штаммов вируса оспы овец с использованием рестрикционного анализа продуктов ПЦР г. Методика обнаружения антител к каприпоксвирусам в непрямом иммуноферментном анализе с использованием рекомбинантного антигена Р вируса оспы овец г. Методика обнаружения антител к каприпоксвирусам в непрямом иммуноферментном анализе с использованием рекомбинантного антигена Р вируса оспы овец г. Публикации научных исследований. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе одна работа в издании, рекомендованном ВАК РФ. Апробация работы. Материалы диссертации представлены и обсуждены на Международной научной конференции молодых ученых Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных Владимир, г. ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных в период гг. Метод обнаружения и видовой дифференциации каприпоксвирусов, с использованием мультиплексной ПЦР. Метод дифференциации вакцинных и эпизоотических штаммов вируса оспы овец с использованием рестрикционного анализа продуктов ПЦР. ПЦР. Получение рекомбинантных антигенов вируса оспы овец и оценка их антигенной активности. Использование рекомбинантных антигенов Р и Р вируса оспы овец в непрямом варианте ИФА. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 3 страницах и содержит следующие разделы введение, обзор литературы, собственные исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения и 5 приложений. Список используемой литературы включает 8 источников, из которых 9 на иностранном языке. Работа иллюстрирована таблицами и рисунками. Исследования по диссертационной работе выполнены в гг. ФГУ Федеральный центр охраны здоровья животных г. Владимир. Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю кандидату биологических наук Алексею Владимировичу Щербакову и сотрудникам лаборатории диагностики особо опасных болезней животных за оказанную практическую помощь в выполнении отдельных этапов работы и оформлении диссертации. Оспа овец и коз наносит животноводству большой экономический ущерб, слагающийся из гибели и вынужденного убоя больных животных, снижения продуктивности, затрат на проведение ветеринарносанитарных и охраннокарантинных мероприятий 4. На XII сессии Генерального Комитета МЭБ оспа овец и оспа коз были внесены в список наиболее опасных конвенционных болезней животных. Они распространены но всем континентам, за исключение Австралии и Океании. Оспа овец имеет документированную историю почти такой же продолжительности, как и вирус натуральной оспы. Заболевание появилось в Европе во втором веке нашей эры, куда оно могло быть занесено из Центральной Азии . Инфекционная природа оспы овец была определена только в середине века. В Британии к г. Европы этому препятствовала интенсивная торговля животными между странами 9. Первое сообщение об оспе коз поступило из Норвегии в г. Позднее она наблюдалась во время Первой Мировой войны в Македонии, где за один год стала энзоотией со смертностью . В х гг. Азии, Африке, на Среднем Востоке и в некоторых странах Европы 8. В Индии первые вспышки оспы коз зарегистрированы в г. В настоящее время оспу овец и оспу коз постоянно регистрируют в странах Африки Алжире, Тунисе, Ливии и других, Азии Китае, Пакистане и Ближнего Востока Иране, Кувейте, ОАЭ, Израиле, Омане, Катаре, причем во многих из них в виде эпизоотий. В г.