Получение и анализ трансгенных растений, экспрессирующих белки тройного блока генов гордеивирусов

• Автор: Горшкова, Елена Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

Введение 2 Обзор литературы 2. Альфаподобные фитовирусы, содержащие тройнойблок генов. Семейства ТиЬЫшсЬе. Род Рото1гш. Род Ресигиз. Субклеточное фракционирование белков ТБГ 2. Субклеточная локализация белков ТБГ
2. Структура и свойства белков тройного блока генов. Биохимические и функциональные свойства белка
2. Векторы для клонирования и бактериальные штаммы. Извлечение фрагментов ДНК из агарозного геля. Трансформация бактериальных клеток А. Рестрикционный гидролиз тотального препарата ДНК, выделенного из клеток А. Синтез зонда для гибридизации. Экстракция белков из препарата мембран. ТБГЗ ПЛВМ и белок ТБГЗ ПЛВМ, слитого с СРР. Иммунодетекция белков К и ОРРК в трансгенных и зараженных растениях. Эпифлуоресцентная микроскопия трансгенных растений, экспрессирующих, ген. Исследование мембранной природы белков К и СРР
4. В КПД вирус кольцевой пятнистости лихниса. ВМТо тобамовируса мозаики томата . ВШМЯ вирус штриховатой мозаики ячменя. ВХЖА каулимовирусом. Предметом молекулярной фиговирусологии является исследование репликации и экспрессии вирусного генома, а так же взаимодействия вирусного патогена с растением хозяином Одной из ключевых проблем является изучение механизмов транспорта вирусов в зараженном растении. Основную роль. Транспортные белки фитовирусов делятся на несколько классов, одним из которых является группа белков, кодируемых тройным блоком генов ТБГ v i, . В зависимости от ii вирусов ТБГ может находиться в различных участках вирусного генома, но взаимное расположите генов ТБГ1, ТБГ2 и ТБГЗ и особенности кодируемых ими белков всегда остаются неизменными. Мутации в любом из генов ТБГ приводят к потере вирусом транспортных функций , i, i i, i, . Среди белков ТБГ наиболее хорошо изучен 6ТБГ1. Для него показана РНКсвязывающая, НТФазная и хеликазная активности я. В отличие от 6ТБГ1, биохимические свойства белков ТБГ2 и ТБГЗ изучены слабее. Это обусловлено высокой гидрофобностью этих белков. Локализация 6ТБГ2 в клетках зараженных растений была определена достаточно давно i i, i, , однако попытки детектировать биохимическими методами 6ТБГЗ в клетках зараженных растений до сих пор не были успешными i
. Тм не менее в настоящий момент появилось достаточно много сведений о локализации этого белка при экспрессии его с помощью различных векторных систем vv . Распространение фитовирусов по тканям растенияхозяина происходит по принципиально отличной стратегии по сравнению с вирусами животных или бактериофагами. Из первичноинфицированной клетки, пользуясь специальными механизмами и не разрушая клетки, вирус транспортирует свой геном в соседние клетки растений v i, i . Такое распространение фитовирусов называют ближним или межклеточным траенпортом i . I.i , . При попадании в проводящие пучки вирус способен перемещаться по флоэме пассивно с током жидкости. Таким образом, вирус перемещается по стеблю на достаточно далекие дистанции к другим листьям и органам. Такой процесс именуется дальним транспортом v i, i . Попав в неинфицированный лист, для дальнейшего распространения фитовирусы снова пользуются механизмами ближнего транспорта. Следует отметить, что существует несколько групп фитовирусов, неспособгшх к ближнему транспорту в мезофилле листовой пластины, и весь их жизненный цикл проходит во флоэме. Такие вирусы называют флоэмноограниченными i , , . Механизм попадания фитовирусов в первичную клетку изучен недостаточно хорошо. Считается, что такое проникновение вируса в клетку происходит через механические повреждения в клеточной стенке i . Известно, что вирусы, передающиеся насекомыми и патогенными грибами, попадают в первую очередь во флоэму i i i, . Некоторые вирусы способны передаваться через семена от поколешя к поколению .