Пути усовершенствования живой гриппозной вакцины и тактики ее применения при подготовке к пандемии

• Автор: Дешева, Юлия Андреевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 314 с. : 14 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ.
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. ЖИВАЯ ГРИППОЗНАЯ ВАКЦИНА ЖГВ.

1.1. Основные этапы разработки живой аттенуированной вакцины против гриппа

1.2. Реассортантиые ЖГВ и доноры аттенуации для их подготовки

1.3. Изучение молекулярных основ аттенуации вирусов гриппа.

1.4. Вакцинопрофилактика гриппа с помощью реассортантной ЖГВ на

основе холодоадаптированных донорских штаммов.

ГЛАВА 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕДПАНДЕМИЧЕСКОЙ СИТУАЦИИ.

2.1. Кандидаты в пандемические штаммы.

2.2. Особенности клинической картины при заражении людей высокопатогенными вирусами гриппа
2.3. Антигенная изменчивость вирусов АНЧ1 и способность к трансмиссии от человека к человеку.
2.4. Роль отдельных генов в проявлении патогенности и расширении круга чувствительных хозяев вирусов гриппа А.
2.5. Маркеры высокой патогенности вирусов птичьего гриппа на различных животных моделях.
2.6. Оценка развития современной предпандемической ситуации и
возможные меры и средства профилактики
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА ВАКЦИН ПРОТИВ ПАНДЕМИЧЕСКИ ОПАСЫХ ВИРУСОВ ГРИППА
3.1. Разработка инактивированных вакцин против вирусов гриппа, обладающих пандемическим потенциалом.
3.2. Разработка ЖГВ при подготовке к пандемии.
3.3. Основные требования, предъявляемые к гриппозным вакцинам при подготовке к пандемии и пути усовершенствования вакцинных
препаратов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
4.1. Вирусологические методы
4.2. Методы работы с хорьками
4.3. Методы работы с мышами.
4.4. Клиническое изучение безвредности и эффективности ЖГВ, содержащей реассортантиые вакцинные штаммы на основе холодоадаптированных допоров аттенуации.
4.5. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫХ ОСНОВ АТТЕНУАЦИИ ХОЛОДОАДАПТИРОВАННЫХ ШТАММОВ ВИРУСОВ ГРИППА А И В.
5.1. Изучение биологических свойств штамма подтипа АН2Ы2 АМосква.
5.2. Молекулярногенетический анализ холодоадаптированного штамма АМоскваН2Ы2.
5.3. Сравнительный анализ различных холодоадаптированных вирусов подтипа АЬШ.
5.4. Изучение свойств полигенных реассортантов на основе штамма АМоскваН2К2
5.5. Характеристика донора аттенуации для компонента В тривалентной живой гриппозной вакцины ВСССР.
5.5.1. Молекулярногенетический анализ и рестриктазное картирование донора аттенуации ВСССР
5.5.2. Изучение свойств холодоадаптации и аттенуации для
хорьков.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ГЛАВА 6. ПОДГОТОВКА РЕАССОРТАНТОВ ПТИЧЬИХ ВИРУСОВ
НА ОСНОВЕ ДОНОРА АТТЕНУАЦИИ
АЛЕНИНГРАД4Н2Ы2.
6.1. Характеристика вирусов птичьего гриппа, использованных в качестве источника поверхностных антигенов
6.2. Рсассортация и определение состава генома реассортантов
6.3. Ростовые характеристики реассортантов птичьих вирусов на основе штамма АЛенинград4Н2Ы2 при различных температурах инкубации в куриных эмбрионах
6.4. Оценка безвредности холодоадаптированных реассортантов,
содержащих гены вирусов гриппа птиц, при введении курам
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ГЛАВА 7. РЕЗУЛЬТАТЫ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ КАНДИДАТА В ВАКЦИННЫЕ ШТАММЫ ЖГВ
АУ ТК АПОТС ДАМН5Ы2
7.1. Молекулярногенетический анализ гемагглютинина и антигенные свойства реассортаитного штамма АУткаПотсдамН5Н2
7.2. Изучение генетической стабильности реассортаитного штамма АН5Ы2 после пассажей в носовых ходах хорька.
7.3. Безвредность кандидата в вакцинные штаммы подтипа АН5К
при иитраназальном введении мышам.
7.4. Сравнительное изучение иммуногенности при введении ЖГВ и
ИГВ подтипа АН5Ы2 белым мышам.
7.5. Эффективность ЖГВ и ИГВ подтипа АН5Ы2 против инфекции вирусами АН5М1, выделенными в и гг. в Гонконге
7.6. Оценка эффективности реассортанта А УткаПотс дам8 6 Н5Ы2 против реинфекции вирусом АН5Ы1, выделенным в году
во время вспышки во Вьетнаме
7.7. Защита против реинфекции антигенным вариантом вируса II, выделенным в году на территории Российской
Федерации
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ГЛАВА 8. РЕЗУЛЬТАТЫ ДОКЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ КАНДИДАТА В ВАКЦИННЫЕ ШТАММЫ ЖГВ
8.1. Молекулярногенетический анализ гемагглютинина.
8.2. Антигенная специфичность
8.3. Показатели репродукции в РКЭ
8.4. Взучение прививочныех свойств кандидата в вакцинные штаммы
на модели белых мышей .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ГЛАВА 9. КЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ БЕЗВРЕДНОСТИ И ИММУНОГЕННОСТИ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ ШТАММ АУТКА1ТОТС ДАМН5Ы2
9.1. Организация исследования
9.2. Результаты
9.2.1. Безвредность и реактогенность.
9.2.2. Выделение и анализ реизолятов вакцинного штамма от привитых.
9.2.3. Иммуногенность
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
Глава . СТРАТЕГИЯ И ТАКТИКА ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЖГВ В ИНТЕРПАНДЕМИЧЕСКИЙ ПЕРИОД И
ПРИ ПОДГОТОВКЕ К ПАНДЕМИИ
.1. Вакцинопрофилактика с использованием ЖГВ среди лиц высокого риска
.2. Вакцинация детей дошкольного возраста ЖГВ для взрослых в качестве единого препарата для взрослых и детей
.3. Экспериментальное изучение прививочных свойств реассортантного штамма АУткаПотсдамН5Ш в составе поливалентной вакцины, включающей реассортантные штаммы современных эпидемических вирусов II, I и
.4. Изучение на на экспериментальной модели прививочных свойств
ЖГВ подтипа при сочетанной вакцинации с ИГВ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
Глава . ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В структуре белка выявлены также домен, отвечающий за взаимодействие с РЫК, сигнал нуклеарной локализации 5, а также последовательность цинковый палец в области аминокислотных остатков, мутации в которых могут влиять на уровень репродукции вируса 0. Полипептид М2 обладает трансмембранной активностью. Изменения в участке Мгена, кодирующем белок М2, играет определяющую роль в чувствительности вируса гриппа А к ремантадину и амантадину 1. М ген ХА вируса АЭнн Арбор6 может частично отвечать за ХА и температурочувствителъность реассортантов эпидемических вирусов АНыо ДжерсиНШ1 и АШотландия0 9. И.Н. Жилинская с соавт. Мгена в процессе аттенуации вирусов гриппа . II состав Мгена от ХА штамма АЭнн Арбор6, несмотря на и фенотип одногенного реассортанта, наблюдалось снижение его репродукции в легких мышей по сравнению с эпидемическим вирусом. Мгена ХА штамма в состав другого эпидемического вируса ЛУдорнНЗК2 не приводило к его аттенуации 1. Изменения в гене также могут приводить к аттенуации вирусов гриппа для различных хозяев , 3. Этот геи кодирует неструктурные белки 1 и 2, которые экспрессируется в зараженной клетке. Структура белка 1 и его взаимодействие с белками хозяина может играть значительную роль в трансляции и репликации, влияя на ингибирование нуклеарного экспорта и сплайсинг мРНК хозяина 8, 6, 7, 5. В ядре клетки белок нуклеарного экспорта , также кодируемый геном, взаимодействует с белком , который присоединяется к вновь синтезированному рибонуклеопротеиновому комплексу и при взаимодействии с белком 1 клеткихозяина регулирует нуклеарный экспорт РНП 0. Изучение мутантов вирусов гриппа, имеющих мутации в гене, показало, что белок 1 может влиять на ингибирование экспрессии белков клеткихозяина и стимулировать синтез вирусных белков 8. Экспрессия белка I в зараженной клетке определяет антагонистическую активность вирусов гриппа в отношении интерферона 6, 1, а также регуляцию апоптоза 5, 4. Как и другие белки, регулирующие посттранскрипционные процессы, 1 белок взаимодействует с различными видами РНК, такими как вирусная РНК, полиаденилированная РНК, 5 некодирующий регион вирусной мРНК и двухцепочечная РНК. При этом функционально активным является концевой участок 1 белка, состоящий из аминокислотных остатков белка 1 5. М или гены в состав реассортантов не влияло на продукцию ранних цитокинов, включая и интерферон I типа, при инфицировании эпителиальных макрофагов человека, в отличие от реассортантов, включающих мутантные РВ2 или РВ1 гены, когда такое снижение имело место . По мере развития методов обратной генетики в последние несколько лет появились несколько инновационных стратегий для разработки нового поколения ЖГВ. Одной из таких стратегий является разработка делеционных мутантов с полностью или частично удаленным геном 1 или 2, обладающим сниженной способностью к репродукции 3 вследствие утраты генетической информации для синтеза соответствующих белков. Сконцевой последовательностью, включающие 0 или вместо 8 аминокислотных остатков, проявляли фенотип на культуре клеток 2. Кинетика репродукции мутантных вирусов коррелировала с нарушениями на поздних этапах репродуктивного цикла синтез вРНК, синтез соответствующих вирусных белков и нуклеарный экспорт вирусного рибонуклеопротеина. Свойства реассортантных вирусов могут определяться не одним, а несколькими генами. Более того, одни и те же биологические свойства могут определяться сочетанием констелляцией отдельных генов у реассортантов, полученных от различных родительских штаммов. Так, при изучении причин высокой реактогенности некоторых рекомбинантных клонов, полученных при разработке вакцины i в е годы XX века, было выяснено, что для аттенуации реассортангного вируса на основе 8 необходима пересортировка генов полимеразного комплекса. Было показано, что все отобранные опытным путем апатогенные реассортанты имели в своем составе гены РВ2 и РА от 8, а ген РВ1 от вирулентного родителя. Реассортанты же, унаследовавшие от 8 все гены внутренних и неструктурных белков, оказались вирулентными для человека.