Оптимизация условий культивирования штаммов вируса энтерита норок и изучение его биологических свойств

• Автор: Ночевная, Татьяна Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 175 с. : ил.

Этот метод используется для фракционирования зрелых вирионов. В модификации, с предварительным концентрированием ПЭГ, метод изопикнического центрифугирования в растворах хлористого цезия применялся i и др. Выбор плотности раствора для градиента обосновывается литературными данными по плавучей плотности зрелых инфекционных вирионов ВЭН, в частности, 1,1, гсм3 3. Одним из наиболее распространенных методов очистки вирусов и вирусных антигенов является иммуноафинная хромотография 1АС. Для парвовпрусов этот метод впервые использовали при выделении вируса алеутской болезни норок из зараженных тканей 6. Несколько позже был разработан метод очистки и концентрации энтерита собак V2 при помощи 1ЛС, в котором использовали мышиные моноклональные антитела к гемагглютинирующему белку V2. При этом было показано, что более балластных белков удаляется и извлекается инфекционного V2 7. Антигенные свойства вируса. Известно, что изучение антигенных свойств вирусов имеет огромное значение для классификации и идентификации возбудителей болезней животных. ВЭН обладает набором различных антигенов, которые выявляются в реакции нейтрализации 6, 8 реакции диффузной преципитации в агаровом геле РДП , реакции связывания комплемента РСК 3 реакции торможения гемагглютинации РТГА метод флуоресцирующих антител МФА , . Отличия штаммов обнаружены только по показателю патогенности 5. ВЭН находится в тесном антигенном и иммунологическом родстве с вирусом панлейкопении кошек ПЛК 8, 7. ВЭН имеет близкое родство с вирусом ПЛК, но они различаются между собой по антигенной структуре, гемагглютинирующим свойствам, кругу хозяев и строению генома. Однако, А. К. Кириллов и с соавторами 3 доказали тесное антигенное сходство этих вирусов, но не их идентичность, так как при перекрестном заражении не вызывают заболевания и гибели других видов животных, хотя иммунитет у них при этом образуется. С помощью реакции нейтрализации, иммунофлуоресценции и по характеристике репликативных форм ДНК показано антигенное родство ВЭН с возбудителем парвовирусного энтерита собак ПЭС 4, 6, 7. Однако, эги вирусы отличаются по спектру гемагглютинации с различными эритроцитами животных, тропизму к клеткам хозяина i vi и уровнем патогенности 7. В году Е. Ю.Зеленов изучал антигенные свойства ВЭН штамма Ладожский в перекрестной РТГА с использованием сывороток против ВЭП, ПЭС, ПЛК и парвовирусной инфекции свиней ПИС. ПК. Было доказано, что ВЭН имеет антигенное родство с ПЭС и ПЛК, а с возбудителем ПИС антигенного родства не установлено. Ряд исследователей, изучая первичные структуры вирусов ПЛК, ПЭС и ВЭН установили, что они содержат более подобия в последовательности оснований внутри капсида. Наиболее идентичными были ПЛК и ВЭН , которые отличаются только по восьми сайтам рестрикции, а ПЭС и ВЭН различаются менее чем на 1 по нуклеотидной последовательности ДНК, но поражают разных хозяев. Кроме того, между ПЛК, ПЭС и ВЭН отсутствуют физикохимические различия и в тоже время они отличаются по чувствительности к ним клеточных культур и по гемагглютинирующей активности. Заражение первичных и перевиваемых культур клеток кошек и собак показало, что вирусы ПЛК и ВЭН размножаются только в клеточных культурах тканей кошек, а ПЭС в культурах клеток собак и кошек 7, 1. Изучению гемагглютинирующих свойств ВЭН посвящено незначительное количество работ , , , 5, 8, авторы которых считают, что степень агглютинирующей активности парвовирусов связана с капсидом и зависит о г типа эритроцитов, штамма вируса, температуры, и ионного состава среды. В настоящее время известно, что молекулярными структурами, ответственными за гемагглютинирующую активность ВЭН являются белки VI и V3, экспонированные на поверхности вирусной частицы 8. Явление гемагглютинации представляет собой взаимодействие между молекулами, которые очень сходны по своему составу и структуре, но резко отличаются по своим зарядовым свойствам. Как и вирусные белки, ответственные за гемагглютинацию, так и рецепторы эритроцитов являются низкомолекулярными гликопротеидами, склонными к агрегации после их изоляции.