Разработка и совершенствование методов иммуноферментной диагностики классической чумы свиней

• Автор: Бьядовская, Ольга Петровна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 136 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Общие сведения о КЧС .

Морфологические и физикохимические свойства вируса КЧС

Антигенные свойства вируса КЧС.

Патогенез и клинические формы

Эпизоотологические особенности КЧС.

Иммунитет и специфическая профилактика.

2.2. Диагностика классической чумы свиней.

Выделение инфекционного вируса.

Обнаружение вирусного антигена.
Выявление противовирусных антител
2.3. Применение ИФА при диагностике КЧС.
Теоретические основы ИФА
ИФА в диагностике КЧС
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы и методы.
3.1.1. Материалы.
3.1.2. Серологические и иммунохимические методы исследования.
3. 2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
3.2.1. Разработка и оптимизация непрямого иммуноферментного метода для выявления антител к вирусу КЧС в сыворотках крови свиней
3.2.2. Выявление антител в непрямом варианте ИФА методом одного разведения у.
3.2.3. Сравнительная оценка результатов выявления антител к
вирусу КЧС в непрямом варианте ИФА и в реакции
нейтрализации
3.2.4. Сравнительная оценка результатов исследования сывороток крови
свиней в НИФА и с помощью СИекКИФА
3.2.5. Определение чувствительности и специфичности непрямого варианта ИФА
3.2.6. Иммунологический мониторинг поголовья свиней в хозяйствах Российской Федерации на основе непрямого варианта ИФА
3.2.7. Разработка сэндвичварианта непрямого иммуноферментного анализа для обнаружения вируса КЧС
3.2.8. Разработка непрямого жидкофазного блокирующего варианта ИФА на основе рекомбинантного белка Е2 для выявления вируса КЧС в вируссодержащих пробах
3.2.9. Определение специфичности и чувствительности разработанной тестсистемы на основе блокирующего варианта ИФА
3.2 Обнаружение вируса КЧС в патологических материалах с помощью блокирующего варианта ИФА
4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.
5. ВЫВОДЫ.
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
ПРИЛОЖЕНИЯ
1.ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


На основании проведенных исследований разработаны тестсистемы на основе ИФА, использующие в качестве антигена рекомбинантный белок Е2 вируса КЧС для определения антител и антигена вируса КЧС в пробах сывороток крови свиней и вируссодержащих материалах. Методика выявления антигена вируса классической чумы свиней в непрямом жидкофазном блокирующем варианте иммуноферментного анализа с использованием рекомбинантного вирусного белка Е2. Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях Достижения молодых ученых в ветеринарную практику Владимир, г. Актуальные проблемы патологии свиней, крупного и мелкого рогатого скота Владимир, г. ВНИИЗЖ в годах. Основные положения выносимые на защиту. Результаты выявления антител к вирусу КЧС в сыворотках крови свиней с помощью непрямого варианта ИФА при тестировании проб в одном разведении с использованием в качестве антигена рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС. Данные по выявлению антигена вируса КЧС в вируссодержащих пробах с помощью разработанной тестсистемы на основе непрямого жидкофазного блокирующего варианта ИФА, с использованием иммобилизованного на планшете рекомбинантного белка Е2 вируса КЧС. Результаты сравнения блокирующего варианта ИФА и реакции иммунофлюоресценции при обнаружении антигена вируса КЧС в образцах патологических материалов и в инфицированных вирусом КЧС культурах клеток. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ. Исследования по диссертационной работе выполнены в гг. Всероссийском научно исследовательском институте защиты животных ВНИИЗЖ, г. Владимир. Обьем и структура диссертации. Диссертация изложена на 6 страницах, иллюстрирована таблицами и рисунками. Список использованной литературы включает 0 источников, из которых 8 иностранные. Автор выражает искреннюю благадорность научному руководителю, к. В.Г. Андрееву и сотрудникам института д. Т.З. Байбикову, д. В.Л. Узюмову, к. С.В. Безбородовой, Н. С. Мудрак, . . Луговскому, Л. А. Быковой, к. В.Ф. Ковалишину, И. А.Пронину, глав. О.Г. Андреевой, А. Б. Смирнову, Зинковскому Ю. В., Филиной А. Ю. за практическую помощь в выполнении отдельных этапов работы и оформлении диссертации. Общие сведения о классической чуме свиней Чума свиней или классическая чума свиней КЧС распространена во всем мире и признана вирусным заболеванием, приносящим значительный ущерб свиноводству 5,,2. Первые описания КЧС, согласно , относятся к году . В г. Дорсет и Швайнитц установили вирусную природу КЧС. На протяжении более 0 лет это инфекционное заболевание не потеряло своей актуальности и значимости . Несмотря на то, что болезнь достаточно хорошо изучена и накоплен положительный опыт работы по искоренению КЧС во всем мире, пока не удается предотвратить эпизоотии болезни. Возбудителем заболевания является вирус, принадлежащий к роду ivi семейства vivii. Термин пестивирус впервые ввел в г. М. Хорзинек с целью группировки антигенно родственных, оболочечных, РНКсодержащих вирусов классической чумы свиней ВКЧС, диареи КРС ВДКРС и пограничной болезни овец ВПБО. Все пестивирусы имеют сходный спектр восприимчивых хозяев. Вирус КЧС может передаваться крупному рогатому скоту и мелким жвачным. Однако, несмотря на их способность преодолевать видовой барьер, пестивирусы слабо реплецируются в гетерологичных хозяевах. Ранее пестивирусы относили к семейству vii. Накопленные со временем данные об организации генома и стратегия репликации свидетельствуют о фундаментальных различиях , на основании которых в г. ivi. В г. Интернациональном Вирусологическом конгрессе в Берлине Международный комитет по таксономии вирусов утвердил эту классификацию . Мифологические и физикохимические свойства вируса КЧС Вирус КЧС ВКЧС мелкий оболочечный вирус с однонитчатой РНК позитивной полярности. Вирионы сферической или овальной формы диаметром нм . Нуклеокапсид нм икосаэдрического типа симметрии, покрыт суперкапсидной оболочкой.