Свойства некоторых белков вируса клещевого энцефалита

• Автор: Морозова, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 216 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений. 2

Введение. 7

Обзор литературы.

Глава 1. Белки флавивирусов.

1.1. Молекулярная организация генома флавивирусов.

1.2. Белки вирионов.

1.2.1. Белок нуклеокапсида С.

1.2.2. Белок М.

1.2.3. Гликопротеин оболочки вирионов Ее

1.3. Неструктурные белки флавивирусов.

1.3.1. Неструктурный гликопротенн .
1.3.2. Малые неструктурные белки.
1.3.3. Неструктурный белок .
1.3.4. Неструктурный белок .
Глава 2. Вакцины против флавивирусных инфекций.
2.1. Применяемые вакцины.
2.1.1. Живые аттенюированные вакцины.
2.1.2. Инактивированные вакцины.
2.2. Новые подходы к созданию вакцин.
2.2.1. Рекомбинантные белки.
2.2.2. Рекомбинантные ДНК.
2.2.3. Рекомбинантные бактерии.
2.2.4. Трансгенные растения.
Глава 3. Экспериментальная часть.
3.1 Материалы.
3.2. Методы.
3.2.1. Генетический анализ штаммов ВКЭ.
3.2.2. Иммуноферментный анализ белков ВКЭ.
3.2.3. Выделение и изучение свойств внутриклеточного комплекса вирусных и клеточных белков.
3.2.4. Фотоаффинное мечение.
3.2.5. Фосфорилированис белков.
3.2.6. Выделение комплекса гликопротеинов Е и 1 ВКЭ.
3.2.7. Получение рекомбинантных белков.
3.2.8. Анализ стабильности плазмид в клетках.
3.2.9. Иммунизация мышей.
3.2 Методы детекции антител к ДНК.
3.2 Оценка защитных свойств белков ВКЭ.
Глава 4. Результаты и обсуждение.
4.1. Генетический анализ штаммов ВКЭ.
4.2. Исследование вариабельности белков различных 5 штаммов ВКЭ.
4.3. Внутриклеточный комплекс белков ВКЭ.
4.4. Синтез РНК ВКЭ i vi.
4.5. Функции вирусных белков в катализе синтеза геномных
РНК ВКЭ.
4.6. Фосфорилирование белка 5 ВКЭ.
4.7. Изменение состава внутриклеточного комплекса белков 4 ВКЭ.
4.8. Антигенные свойства белков ВКЭ.
4.8.1. Антитела к неструктурным белкам ВКЭ у больных клещевым энцефалитом с различной тяжестью заболевания.
4.8.2. Комплекс гликопротеинов Е и 1 ВКЭ.
4.9. Исследование защитных свойств белков ВКЭ.
4.9.1. Стабильность плазмид в эукариотических клетках.
4.9.2. Изучение экспрессии генов ВКЭ в эукариотических
клетках.
4.9.3. Защитные свойства белков ВКЭ.
4.9.4. Влияние различных способов введения плазмид в
ткани мышей на защитный эффект.
4.9.5. Экспрессия гена 1 ВКЭ в рекомбинатных бактерияхобитателях слизистой оболочки носоглотки мышей.
4 Изучение зависимости защитного эффекта от способа представления неструктурного белка 1 ВКЭ иммунной системе мышей.
Заключение.
Выводы.
Список литературы


Рис. . Увеличение размеров таких делеций приводит к нежизнеспособности вирионов . Интересно отметить, что при выделении РНК из тканей животных, заражнных одним штаммом ВКЭ, наблюдается гетер . Зконцов геномов Добрикова, . Однако у вирусных РНК того же штамма, выделенных из отдельной бляшки на клеточной культуре, некоднрующие области однородны. При заражении пермиссивных клеточных культу р отличия первичных структур не транслируемых областей геномов выявлены только для различных штаммов Добрикова и Плетнв, . Все консервативные элементы вирусных геномов могут вовлекаться в формирование вторичной структуры РНК. i . Г с и. I . Рис. Схема организации 3нетранслируемой области РНК ВКЭ , . терминирующий кодон. Нумерация дана по нуклеотидной последовательности геномной РНК штамма Найдорф. I, 2, 3 повторяющиеся элементы первичной структуры. I инвертированный повтор , Ру гомопуриновый и гомопиримидиновый участки, область, комплементарная фрагменту 5концевой области РНК, последовательность, образующая Зконцевую шпильку. Цифрами обозначен размер делеции относительно нуклеотидной последовательности РНК ВКЭ штамм Найдорф. Шпилечнопетлевая структура нетранслируемых областей геномов Рис. РНК в вирионы. Так, для успешной репликации флавивирусов необходимо наличие 5 и Знекодирующих областей генома, а повреждения концевых консервативных вторичных структур генома приводят к неспособности мутантных флавивирусов к репликации е1 а1, СаЬоиг е Ы. Для вируса Западного Нила обнаружен мутант, реплицирующийся более эффективно по сравнению с вирусом дикого типа. Зконцсвые нетранслируемые области РНК мутантного и дикого штаммов идентичны, а отличия локализуются в гене РНКполимераз Опт ап1 Вппюп, . РНК Рис. Отсутствие 56 н. СаЬоиг е1 а Следовательно, стабильность вторичной, а не первичной структуры генома, повидимому, определяет репродуктивную способность флавивирусов. Эффективность трансляции геномных РНК делеционных мутантов, составляющая от до 0 от уровня синтеза белков флавивируса денге дикого типа, может приводить как к снижению скорости роста и уменьшению размеров бляшек, так и к полной нежизнеспособности вирионов. Существенные изменения уровня трансляции у мутантов свидетельствуют о второстепенной роли этого процесса в обеспечении выживания флавивирусов. Интересно отмстить, что деления фрагмента н. РНК вируса денге, коррелирующая с самой низкой эффективностью трансляции, обнаружена в составе инфекционных вирионов, реплицирующихся в клетках млекопитающих и неспособных к репродукции в клетках насекомых СаЬоиг е1 а1, . Повидимому, этот гексануклеогид участвует в связывании с хозяйскими факторами, что необходимо для репликации флавивирусов. Ьг. VI. V,,. П ,,. I I. Л, . О V . Рис. Шпилечнопетлевые структуры нетранлируемых областей геномной РНК ВКЭ Огяип е а. , Знетранслирусмая область генома штамм Васильченко. , 5нетраслируемая область штамм Васильченко. , 5нстранслнруемая область штамм Повассан. Единая открытая рамка считывания кодирует полипротеинпредшественник, который ко и иосттрансляцнонно процессируется клеточными сигналазами и вирус специфической протеазой белком 3 с дополнительными родослецифичными протеазами с образованием 3 структурных и 7 неструктурных белков. РНК флавивирусов содержит гены в следующем порядке 52234453 Рис. З. Иная молекулярная организация генома характерна для рода ivi 272344553 , Рис. З. Для третьего рода ivi типичен иной порядок генов 5027234455 , . Рис. З. Схема организации генома флавивирусов v . , , . С, . структурные белки, неструктурные белки, в обозначениях которых цифра справа указывает порядковый номер неструктурного белка.