Анализ транспортной функции вирусов растений с тройным блоком генов

• Автор: Соловьев, Андрей Геннадьевич
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 52 с. : ил.; 20х14 см

Показано, что они образованы мембранами эндоплазматического ретикулума и расположены около плазмодесм. С помощью мутагенеза выявлены структурные элементы белков ТБГ2 и ТБГЗ, отвечающие за их субклеточную локализацию. Впервые описано и исследовано явление ТБГЗзависимого внутриклеточного транспорта белка ТБГ2. С помощью мутагенеза и коэкспрессии гетерологичных белков показано, что ТБГЗзависимый транспорт не является специфическим по отношению к последовательности транспортируемого белка. Доказана возможность ТБГЗзависимого транспорта белка ТБГ2 в клетках млекопитающих. Впервые показано, что белок оболочки потексвирусов содержит минимум две детерминанты, определяющие его функцию в межклеточном транспорте вируса. Обнаружено, делеция короткого карбокситерминального участка белка, делающая его дефектным по функции транспорта, может быть комплементирована белками оболочки гетерологичных потивирусов и частично функциональными делеционными вариантами транспортного белка ВТМ. Практическая ценность работы. Работа имеет теоретическое и методическое значение для последующих исследований транспортной функции вирусов растений и представляет интерес для специалистов в области вирусологии, молекулярной биологии и физиологии растений. Полученные библиотеки клонов потеке и гордеивирусов могут использоваться в дальнейших фундаментальных и прикладных работах. Разработанные в процессе исследования методические подходы могут использоваться в различных областях молекулярной вирусологии. Материалы работы используются в курсах лекций на Биологическом факультете МГУ. Результаты, изложенные в диссертации, получены в отделе биохимии вирусов растений НИИ ФХБ им. А. Н. Белозерского МГУ и на кафедре вирусологии Биологического факультета МГУ, возглавляемых академиком РАН, профессором И. ГАтабековым. Апробация работы. Материалы работы были представлены на международных конференциях и симпозиумах, в том числе на VIII, X и XI Международных вирусологических конгрессах Берлин, Иерусалим, Сидней, , Курсах ФЕБО Геном вирусов растений структура и экспрессия Рига, , 4ом
Международном конгрессе по молекулярной биологии растений Амстердам, , Международной конференции Фундаментальные и прикладные проблемы фитопатологии Ялта, , Конференции по вирусам злаков Версаль, , Международном симпозиуме Молекулярные механизма ответа стресс в растениях Москва, , Симпозиуме Новые аспекты исследования устойчивости сельскохозяйственных культур Ашерслебен, , 6ом Международном симпозиуме по РНКсодержащим вирусам Париж, , а также на научных конференциях и лабораторных семинарах НИИ ФХБ им. А. Н. Белозерского МГУ. Вирус мозаики подорожника азиатского ВМПА ii i vi, IV на основании размеров геномной РНК и данных о структуре вирионов был предварительно классифицирован как новый представитель группы лотексвирусов Минская и др. Используя в качестве матрицы для обратной транскрипции геномную РНК ВМПА, выделенную из препарата вируса, была синтезирована ДНК, которую клонировали в плазмидных векторах. Затем с помощью перекрестной гибридизации и частичного определения первичной структуры был выявлен набор рекомбинантных клонов, ВМПАспецифические вставки в которых содержали практически всю последовательность вирусной РНК за исключением прилежащего к бконцу небольшого участка генома, который был направленно клонирован с использованием специфического олигонуклеотида. Определение первичной структуры этого набора клонированных фрагментов генома позволило определить полную нуклеотидную последовательность геномной РНК ВМПА, которая составила, не считая Зконцевой , нуклеотидных остатков. Анализ последовательности генома ВМПА выявил наличие пяти открытых рамок трансляции ОРТ. Их расположение, размеры и последовательности кодируемых белков типичны для геномов вирусов рода xvi Рис. ОРТ в геноме ВМПА способна кодировать 6кДа белок, несущий в своей последовательности три домена, типичных для репликативных белков Синдбисподобных вирусов i , , а именно метилтрансферазный, нуклеотидсвязывающийхеликазный и домен, характерный для РНКлолимераз Рис. А v .